摘要
于1994年5月—1995年7月，根据已克隆的草鱼出血病病毒GCHV -861株cDNA的部分序列，设计合成了两对PCR引物，采用RT-PCR技术对GCHV-861及CCHV-873两病毒株的dsRNA进行扩增。结果表明，两对引物仅能特异地检测出CCHV-861病毒株核酸的存在，而不能对GCHV-873病毒株的核酸进行特异扩增，该方法最小可检测出0.1pg纯化的GCHV-861病毒dsRNA；采用该方法对GCHV-861人工感染的草鱼和稀有鲍鲫组织进行RT-PCR检测，不仅能检测到发病期显症病鱼中GCHV-861病毒的存在，还能检测发病前期及愈后无出血病症状的病毒携带者中病毒的存在；利用该方法还从本所关桥实验场出血病流行季节收集的发病草鱼体内检测出GCHV的存在，说明所设计的引物具有一定的实际意义；利用该法还能检测出感染病毒的组织培养细胞系GCK和CIK上清液中GCHV的存在。还建立了简易的模板制备方法，采用该方法整个检测过程只需3—4h，可大大缩短检测时间。由此可见，RT-PCR技术是检测GCHV的快速、灵敏而特异的方法，发展和完善该技术对草鱼出血病的早期诊断和防治、抗病育种具有重要意义。