轮状病毒重组非结构蛋白NSP4_(86-175)蛋白的表达及其致泻能力的研究
摘要
目的:构建轮状病毒重组NSP4_(86-175)表达蛋白,对其致泻能力进行初步评价。方法:从轮状病毒SA11病毒株中提取RNA,逆转录为cDNA,利用PCR技术扩增目的基因并制备E.coli DH5α感受态细胞,酶切pMD19T-NSP4,pMD19T-NSP4_(86-175)质粒和pET28a(+)质粒构建轮状病毒重组NSP4_(86-175)表达质粒,诱导其表达NSP4_(86-175)蛋白,经Glutathione SepharoseTM 4B纯化并鉴定。取新生6天乳鼠40只,随机分为四组,每组各10只。第1组腹腔注射0.5 nmol重组蛋白,第2组腹腔注射1.0 nmol重组蛋白,第3组腹腔注射1.5 nmol重组蛋白,第4组腹腔注射生理盐水作为对照组。观察其对小鼠的腹泻和生长发育的影响。结果:第1组的腹泻率为20%,第2组的腹泻率为30%,第3组的腹泻率为70%,第4组的腹泻率为10%,四组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中第3组的腹泻率最高。在体重增长情况方面,在第96小时时,第1组平均增加体重(2.11±0.04)g,第2组平均增加体重(2.06±0.11)g,第3组平均增加体重(1.95±0.15)g,第4组平均增加体重(2.60±1.06)g,四组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验成功重组、表达并纯化出轮状病毒重组非结构蛋白NSP4_(86-175)蛋白,证实了其可以引起小鼠腹泻并影响其生长发育。
引文
[1] 王大燕.轮状病毒NSP4基因变异与致病性改变的关系及其免疫学特性研究[D].山东大学,2003.
[2] 庞伟,黄永坤,孟明耀,等.两株Wa株人源轮状病毒NSP4蛋白的表达及其致ICR小鼠腹泻的毒力比较[J].医学分子生物学杂志,2005,2(2):94.
[3] 杨梅,陈兰举.轮状病毒非结构蛋白的研究进展[J].中华实用儿科临床杂志,2010,25(19):1520.
[4] Josh A Boshuizen,Johan HJ Reimerink.Changes in small intestinal omeostasis,morphology,and gene expression during rotavirus infection of infant mice[J].Journal of virology,2003,77 (24):13005-13016.
[5] 熊晓顺,刘彩霞,胡音音,等.重组轮状病毒NSP4蛋白对大鼠神经元细胞内钙离子的干扰及损伤作用[J].中华微生物学和免疫学杂志,2017,37(7):497.
[6] 林玲.轮状病毒非结构蛋白4的克隆、表达及其对细胞损伤作用的初步研究[D].温州医科大学,2014.
[7] 王大燕,王健伟,魏强,等.人轮状病毒NSP4蛋白的表达及其致小鼠腹泻作用的初步研究[J].Virologica Sinica,2003,18(3):217.
[8] 林玲,张盼,林祥芳,等.轮状病毒非结构蛋白4的克隆、表达及其对胞内钙离子的干扰[J].中华微生物学和免疫学杂志,2013,33(8):568.
[2] 庞伟,黄永坤,孟明耀,等.两株Wa株人源轮状病毒NSP4蛋白的表达及其致ICR小鼠腹泻的毒力比较[J].医学分子生物学杂志,2005,2(2):94.
[3] 杨梅,陈兰举.轮状病毒非结构蛋白的研究进展[J].中华实用儿科临床杂志,2010,25(19):1520.
[4] Josh A Boshuizen,Johan HJ Reimerink.Changes in small intestinal omeostasis,morphology,and gene expression during rotavirus infection of infant mice[J].Journal of virology,2003,77 (24):13005-13016.
[5] 熊晓顺,刘彩霞,胡音音,等.重组轮状病毒NSP4蛋白对大鼠神经元细胞内钙离子的干扰及损伤作用[J].中华微生物学和免疫学杂志,2017,37(7):497.
[6] 林玲.轮状病毒非结构蛋白4的克隆、表达及其对细胞损伤作用的初步研究[D].温州医科大学,2014.
[7] 王大燕,王健伟,魏强,等.人轮状病毒NSP4蛋白的表达及其致小鼠腹泻作用的初步研究[J].Virologica Sinica,2003,18(3):217.
[8] 林玲,张盼,林祥芳,等.轮状病毒非结构蛋白4的克隆、表达及其对胞内钙离子的干扰[J].中华微生物学和免疫学杂志,2013,33(8):568.