产NDM-1泛耐药大肠埃希菌耐药机制及流行特性研究
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- 论文作者：杜佳 ; 周翠 ; 李梅梅 ; 李斌 ; 陈华乐 ; 侯渊博 ; 周铁丽
- 年：2015
- 作者机构：温州医科大学附属第一医院;
- 论文关键词：大肠埃希菌 ; XDR ; NDM-1 ; ST2型
- 会议召开时间：2015-09-03
- 会议录名称：第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编
- 语种：中文
- 分类号：R440
- 学会代码：WSWZ
- 会议名称：第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
- 会议地点：中国湖南长沙
- 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、医学参考报社、宁波大学医学院附属医院
- 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：57k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
目的研究6株分离自温州医科大学附属第一医院的产NDM-1泛耐药(extensively drug-resistant,XDR)大肠埃希菌的耐药机制和分子流行病学特性。方法采用琼脂稀释法测定6株泛耐药大肠埃希菌对临床常见药物的MIC值。PCR筛查确认6株泛耐药大肠埃希菌中产NDM-1菌株,改良Hodge试验和EDTA增效试验检测金属β-内酰胺酶(MBLs)耐药表型。PCR扩增并测序检测6株泛耐药大肠埃希菌中其他相关耐药基因。提取菌株质粒,采用Southern blot对blaNDM-1基因进行定位,并进行接合转移试验了解耐药基因的水平转移情况。通过18对引物扩增法对质粒复制子进行分型。采用超声破碎法获得外膜蛋白进行十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),扩增OmpF和OmpC的结构基因并对外膜蛋白进行测序分析,了解菌株外膜蛋白的改变情况。采用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)方法对XDR菌株进行同源性和分子分型研究。结果药敏结果显示6株实验菌株对三、四代头孢菌素,氟喹诺酮类药物,碳青霉烯类药物,氨基糖苷类药物,β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复合物等各类临床药物都表现出高度耐药。PCR筛查确认6株泛耐药大肠埃希菌均产NDM-1,且6株菌在改良Hodge试验和EDTA增效试验中均表现为阳性。PCR检测及测序发现所有的菌株都携带blaSHV-11、aac(6')-Ib-cr、qnrB、rmtb,部分菌株还携带qnrA、blaCTX-M-1、blaCTX-M-9等耐药基因。Southern blot定位分析显示blaNDM-1位于约54.2kb大小的质粒上;接合转移试验成功获得NDM-1阳性接合子,质粒复制子分型后主要为IncN,都验证了耐药基因的水平传播性。SDS-PAGE和结构基因序列分析显示所有菌株均表现为OmpC的缺失。PFGE显示所有菌株都为同一克隆型,MLST显示5株菌归属于为ST2型,1株为ST594型。结论多重耐药基因和外膜蛋白的缺失共同造成了实验菌株对多种药物的高度耐药性,IncN型质粒较强的水平传播性和ST2的克隆流行性促进了耐药性的传播。
引文