Notch-1基因通过自噬途径对抗病毒天然免疫的调控作用的研究

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• 论文作者：孙东豪 ; 王春梅
• 年：2016
• 作者机构：中国医学科学院基础医学研究所;
• 论文关键词：自噬 ; 抗病毒天然免疫
• 会议召开时间：2016-11-04
• 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编
• 英文会议录名称：Abstracts of 2016 CSI Congress on Immunology
• 语种：中文
• 分类号：R392
• 学会代码：IGMD
• 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
• 会议地点：中国安徽合肥
• 主办单位：中国免疫学会
• 学会名称：中国免疫学会
• 页数：1
• 文件大小：1225k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

目的:观察上调和下调Notch-1基因的表达水平对小鼠巨噬细胞自噬与天然免疫应答的影响,探讨Notch-1基因通过自噬调节途径参与抗病毒天然免疫的可能机制。方法:我们利用Notch信号的化学阻断剂γ分泌酶抑制剂GSI、特异性的Notch1干扰RNA和Notch-1胞内段(Notch-1intracellular domain,NICD)的过表达载体分别处理小鼠的原代腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞系,通过荧光定量PCR和Western Blotting法鉴定Notch-1表达下调或NICD表达上调的巨噬细胞与RAW264.7细胞;应用单丹(磺)酰戊二胺(Monodansylcadaverine,MDC)染色法观察细胞自噬现象;通过Western-blotting和细胞免疫染色法检测自噬相关蛋白LC-3(microtubule-associated protein1lightchain3,微管相关蛋白1轻链3)和Beclin-1的表达情况;通过RT-PCR和Western Blotting法鉴定病毒刺激后一型干扰素的生成情况。结果:Notch-1RNA干扰能有效下调巨噬细胞Notch-1的表达,而NICD过表达能显著上调RAW264.7细胞NICD的表达;MDC荧光染色法发现,Notch-1下调的巨噬细胞中可观察到点状自噬囊泡(autophagicvacuoles,AVs),Western-blotting和细胞免疫染色法结果显示,在Notch-1表达下调的巨噬细胞中,自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达增高,同时在VSV刺激的情况下,一型干扰素的生成量也显著提升。化学阻断剂GSI产生的效应与RNA干扰结果一致。结论:Notch-1表达下调的巨噬细胞中观察到了自噬现象与一型干扰素表达的上调,Notch-1可能通过调控自噬来影响巨噬细胞的抗病毒天然免疫效应。

引文