RAG2的350-383氨基酸区域参与调控Igk基因DNA的去甲基化
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- 论文作者：邬采君 ; 董艳迎 ; 张萍 ; 赵小惠 ; 焦俊娜 ; 季延红
- 年：2016
- 作者机构：西安交通大学医学部基础医学院病原生物学和免疫学系;
- 论文关键词：RAG ; Igk ; B细胞 ; RAG2 ; DNA甲基化
- 会议召开时间：2016-11-04
- 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编
- 英文会议录名称：Abstracts of 2016 CSI Congress on Immunology
- 语种：中文
- 分类号：R392
- 学会代码：IGMD
- 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
- 会议地点：中国安徽合肥
- 主办单位：中国免疫学会
- 学会名称：中国免疫学会
- 页数：1
- 文件大小：1290k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
目的:发育的B细胞通过位点特异性的V(D)J重组产生多样性的免疫球蛋白(Igs)。该过程是由重组激活基因蛋白RAG1和RAG2共同组成的RAG重组酶,结合和断裂Ig基因片段旁的重组信号序列(RSS),后经传统的非同源末端连接途径(NHEJ)把断裂的基因片段组合在一起,形成编码抗原受体结合区的基因。RAG1含有1040氨基酸,其384-1008氨基酸能直接结合和催化断裂DNA。RAG2含有527氨基酸,其1-350氨基酸,没有直接结合DNA的功能,但能够与RAG1相互作用并发挥重组酶功能。当B细胞由祖B细胞(pro-B)细胞进入前B细胞(pre-B)阶段,Igk基因位点依次发生高水平转录、组蛋白的乙酰化和DNA的去甲基化等表观遗传学修饰。研究发现RAG1和RAG2结合到Igk基因仅需要高水平转录和组蛋白的乙酰化。但是RAG1和RAG2结合到Igk基因是否介导了DNA去甲基化尚不清楚。方法:选择含有Igm链转基因的RAG1-/-(R1-/-H)或RAG2-/-(R2-/-H)小鼠或细胞系,其B细胞阻断在pre-B细胞阶段。提取小鼠骨髓CD19+的细胞和细胞系的DNA,进行Bisulfite甲基化检测。构建野生型和突变的RAG2腺病毒表达载体,体外检测RAG酶活性并感染R2-/-H细胞系,检测Igk位点的甲基化状态、Igk重组。结果:1)Igk基因位点DNA在R1-/-H小鼠CD19+细胞中是去甲基化状态,而在R2-/-H的中是甲基化状态;2)野生型RAG2感染R2-/-H的Pre-B细胞,Igk位点发生了单个等位基因的去甲基化;3)体外发现在350-383氨基酸区域突变的RAG2增加了RAG重组酶的活性;4)在350-383氨基酸区域突变的RAG2感染R2-/-H的Pre-B细胞,Igk基因位点维持DNA甲基化状态及存在Igk基因的重组。结论:RAG2介导Igk位点发生单个等位基因的去甲基化;RAG2的350-383氨基酸区域维持了基本的RAG重组酶活性;RAG2的350-383氨基酸区域调控Igk基因位点发生DNA的去甲基化。
引文