乙型肝炎病毒阿德福韦酯耐药株(RT A181T)感染性克隆的构建及在Huh7细胞中的表达

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• 论文作者：赵建华 ; 陆仁飞
• 年：2016
• 作者机构：南通市第三人民医院检验科;
• 论文关键词：乙型肝炎病毒 ; 阿德福韦酯 ; 耐药 ; 感染性克隆 ; 复制 ; 表达
• 会议召开时间：2016-09-09
• 会议录名称：第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编
• 语种：中文
• 分类号：R512.62;R446.6
• 学会代码：WSWZ
• 会议名称：第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
• 会议地点：中国浙江宁波
• 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、医学参考报社、宁波大学、宁波大学医学院附属医院
• 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
• 页数：1
• 文件大小：33k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

目的利用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)快速构建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药株(RT A181T)感染性克隆,观察重组质粒在Huh7细胞中的表达,建立HBV ADV耐药株(RT A181T)的体外研究细胞模型。方法设计保守引物,从慢性乙型肝炎阿德福韦酯耐药患者血清中扩增全长HBV基因组,利用SOE-PCR技术构建1.3倍基因组长度的感染性克隆质粒pHBV1.3,转染肝癌细胞系Huh7,采Western Blot、Real-time PCR检测感染性克隆复制以及表达情况,同时用抗病毒药物拉米夫定(LAM)以及阿德福韦酯(ADV)验证对感染性克隆复制以及表达的抑制情况。结果成功构建了HBVADV耐药株感染性克隆质粒pHBV1.3(RTA181T),该质粒在Huh7细胞系中能有效复制、转录和表达。LAM能有效抑制该感染性克隆的复制和表达,ADV不能抑制该感染性克隆的复制和表达。结论构建的HBV ADV耐药株感染性克隆质粒pHBV13(RTA181T)在体外能高效复制以及表达蛋白,其转染细胞可用于HBV复制机制以及抗病毒研究。

引文