抗c-Myc纳米抗体的淘选、表达及应用
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- 论文作者：李金晶 ; 许菲 ; 吴青松 ; 涂追 ; 付金衡
- 年：2016
- 作者机构：南昌大学生命科学学院;南昌五中;南昌大佳科技有限公司;南昌大学中徳联合研究院;
- 论文关键词：纳米抗体 ; c-Myc ; ELISA ; 量子点
- 会议召开时间：2016-11-04
- 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编
- 英文会议录名称：Abstracts of 2016 CSI Congress on Immunology
- 语种：中文
- 分类号：R730.2
- 学会代码：IGMD
- 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
- 会议地点：中国安徽合肥
- 主办单位：中国免疫学会
- 学会名称：中国免疫学会
- 页数：1
- 文件大小：1197k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
c-Myc蛋白为转录调节因子,与生长分裂密切相关,因此在多种肿瘤细胞中的表达量较高。本研究期望得到高亲和力和高稳定性的纳米抗体,用于建立检测细胞内c-Myc蛋白表达情况的生物学检测方法。为了更好的适应复杂的胞内环境,获得更好的检测效果,本研究采用了纳米抗体与量子点检测技术相结合的实验方案。运用噬菌体展示技术,从羊驼免疫库中淘选能与c-Myc蛋白结合的纳米抗体,并将淘选获得的抗c-Myc纳米抗体在大肠杆菌中进行表达,获得的可溶性抗c-Myc纳米抗体经量子点标记后,用于检测细胞内c-Myc蛋白的表达情况,主要研究结果如下:1、通过四轮固相淘选,从羊驼c-Myc蛋白免疫文库中获得了11个与c-Myc蛋白特异性结合的纳米抗体序列并对这些序列的亲和力进行了比较分析,选出较好抗体序列。2、将选好的抗体序列转入表达载体p ET-25b(+)中,运用大肠杆菌表达系统诱导表达,获得可溶性的抗体蛋白,蛋白大小与预期相符,ELISA检测结果显示,亲和力正常。3、初步建立了量子点标记纳米抗体用于细胞内靶标检测的方法,具体操作如下:制备骨髓瘤细胞SP2/0细胞爬片,分别用不同量子点标记技术,检测c-Myc蛋白在细胞内表达情况,实验显示加入纳米抗体及量子点孵育并充分洗脱,细胞仍能捕捉到强烈荧光,单纯加入量子点,无荧光反应。实验结果与预期相符。
引文