猪瘟病毒Npro蛋白及细胞内环境改变对其IRES活性的影响
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- 论文作者：罗庆华 ; 贾俊杰 ; 张必凯 ; 米士江 ; 张莉 ; 谢金鑫 ; 刘艳 ; 涂长春
- 年：2016
- 作者机构：扬州大学兽医学院;军事医学科学院军事兽医研究所;吉林农业大学动物科技学院;
- 论文关键词：猪瘟病毒 ; IRES ; 双荧光素酶报告基因 ; N~(pro)蛋白 ; 细胞内环境
- 会议召开时间：2016-09-18
- 会议录名称：第六届中国兽药大会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of 2016 the 6th China Congress of Veterinary Medicine
- 语种：中文
- 分类号：S852.651
- 学会代码：ZGXJ
- 会议名称：第六届中国兽药大会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国兽医药品监察所、中国兽药协会
- 学会名称：中国畜牧兽医学会
- 页数：1
- 文件大小：67k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
位于猪瘟病毒(CSFV)基因组5'端非翻译区(UTR)的内部核糖体进入位点(IRES)在调控CSFV基因组的翻译中发挥重要的作用,IRES可与宿主细胞中的翻译起始因子3(eIF3)结合,开始CSFV mRNA的翻译,启动蛋白的合成。为探索CSFV自身蛋白以及细胞内环境改变对IRES活性的影响,本研究通过分析CSFV 5'-UTR序列,成功构建了包含CSFV RES在内的荧光素酶报告基因质粒,并检测CSFV非结构蛋白N~(pro)以及不同外界压力条件对IRES活性的影响。首先构建含有Shimen毒株5'-UTR序列的萤火虫荧光素酶重组质粒pGL4.20-Shimen-5'-UTR,经菌液PCR及测序结果证实,重组质粒构建正确;将重组质粒转染HEK-293T和ST细胞,荧光检测结果进一步表明重组质粒构建成功且具有活性。随后,采用本实验室构建的CSFV非结构蛋白N~(pro)、NS5A过表达质粒,或葡萄糖剥夺、氨基酸剥夺、氧化应激、血清饥饿等条件分别处理细胞,发现N~(pro)蛋白比之前报道的NS5A蛋白具有更显著的IRES抑制效果,且抑制呈浓度依赖性;氨基酸剥夺、氧化应激及血清饥饿时可以显著降低CSFV IRES的活性,而葡萄糖剥夺对其活性无显著影响。本研究明确了CSFV非结构蛋白N~(pro)以及细胞内环境的改变可以调控IRES的活性,丰富了CSFV N~(pro)蛋白的功能,并为完善IRES参与CSFV的翻译复制的分子机制提供新的理论依据,也为以IRES为靶点治疗CSFV提供潜在的可能。
引文