摘要
瑞香狼毒是瑞香科狼毒属植物，大毒，近年来，对其在防治农业病虫害及医药方面的应用报道很多，而对其在抗菌方面的报道却很少，本文针对其在抗菌方面的功效进行了系统的研究。
我们先对瑞香狼毒根进行了系统的试管预试和薄层预试，初步确定出其中含有的主要化学成分：黄酮类、内酯香豆素类、挥发油、甾体萜类及少量有机酸和糖类。然后采用柱色谱分离纯化与生物测定跟踪相结合的研究方法来筛选活性成分。
本实验选用了七种有代表性的菌种作示踪（列出七种），首先将实验材料用三种溶剂乙酸乙酯，乙醇，甲醇依次提取，根据抑菌试验情况决定对二乙部分进行再分离。二乙部分硅胶柱层析，共分得五部分：F1、F2、F3、F4、F5，同样方法, 进行生测，根据生测结果，决定对活性最强的F1、F2两部分再分离。F1与F2部分合并硅胶柱层析，共得五个组分：F1-1、F1-2、F1-3、F1-4、F1-5，同样方法，对五部分进行生测试验，由生测结果知：F1-4与F1-5抑菌活性最强。再用葡聚糖凝胶柱Sephadex LH－20对F1-4与F1-5两化合物进行纯化处理，通过采用两种差异较大的展开体系薄层检测，紫外灯与I2缸显色，均为单一斑点，证明化合物F1-4与F1-5均为纯品。
通过对纯品F1-4与F1-5的物理、化学定性及有机波谱解析，结合文献资料，推断出化合物F1-4为新狼毒素B，化合物F1-5为狼毒色原酮；二者均为双黄酮类化合物, 且均为已知化合物。
Stellera chamaejasme L. belongs to Stellera L. Thymelaeaceae, heavily toxic. In recent years, reports about its application on preventing agricultural pests, disease and medical science are enough, but the research on the anti-fungal is little. This thesis made a systematic research about its application on anti-fungal, on the basis of the predecessors’ work.
The chemical constituents of stellera chamaejasme L.’s roots have been protested systematically by means of tube-test and thin layer chromatography (TLC). The main ingredients are flavanone, coumarins, steriod terpenoide and organic acid. We selected the most active compounds by column chromatography on silica, accompanied with antifungal tests.
We have chosen seven kinds of fungal for trial(Bakeri Rehm、 Gibberalla zeae、 Alternaria solani、Fusarium bulbigenum、Exserohilum turcicum、Alternaria alternata、Phytophthora capsici Leon).The crushed roots of stellera chameajasmine L. were extracted with systemic solvent: ethyl acetate、ethanol、methanol. We decided to separate the ethyl acetate fraction according to the antifungal trial result. The ethyl acetate extract was separated by silica chromatography to afford five parts: F1, F2, F3, F4 and F5. An antifungal trial was made on the five parts by the same means. According to the results, we made a further separation on the significant active part: F1 and F2. The mixture of F1 and F2 was separated with silica chromatography to get another five parts: F1-1, F1-2, F1-3, F1-4 and F1-5. We made a third trial on the five parts and got two most antifungal active compounds in the end. We purified the two compounds through the column chromatography on Sephadex LH-20. They were speeded out with two big different solvent systems. They both were single point in the TLC, examined by ultraviolet lamp and I2 box. They were proved to be pure compounds.
We can identified the two pure compounds F1-4 and F1-5 as neochamaejasme B and chamaechromone through physical、chemical quality analysis and organic spectrum determination, assisted with relevant papers. They both belong to biflavanone compounds and haven’t been reported for the first time.
引文
[1] 肖崇厚. 中药化学. 上海科学技术出版社, 1997
[2] 姚新生. 天然药物化学. 北京：人民卫生出版, 2001
[3] 高锦明. 植物化学. 北京：科学出版社, 2003
[4] 王 宁. 秦岭龙胆化学成分研究. 西北农林科技大学硕士论文, 2001
[5] 陈冀胜， 郑硕. 中国有毒植物. 科学出版社, 1987
[6] 刘延泽，冀春茹，冯卫生.瑞香科植物的化学成分与药理作用. 中草药, 1987, 21(11): 32
[7] 候太平，崔球等. 瑞香狼毒中灭蚜活性物质的结构鉴定. 有机化学，2002, 22(1): 67-70
[8] 赵奎军，徐国钧等. 瑞香狼毒与黄花瑞香狼毒的生药鉴定 中药材, 2000, 23(1), 16-19
[9] 解庆珂. 植物农药-狼毒. 林业三防, 35
[10] 张建琛. 浅谈狼毒资源的开发与利用 中国野生植物 1992, (2): 36-37
[11] 曹挥, 刘素琪. 瑞香狼毒提取物对山楂叶螨的生物活性及酶活性的影响. 林业科学, 2003, 39(1)
[12] 权宜淑. 瑞香狼毒的研究概况. 陕西中医, 1999, 20(9): 425-426
[13] 秦宝福，周乐，苗芳等. 瑞香狼毒根的抑菌活性研究（Ⅰ）. 西北植物学报，2003, 23(11): 1977-1980
[14] 刘欣，叶文才等. 瑞香狼毒中的双黄酮类化合物. 中草药, 2003 , 31(5): 399-400
[15] 简丽，张前程等. 瑞香狼毒的有效成分及药理活性研究进展. 西北药学杂志, 2003, 18(4)
[16] 赵奎军，徐国钧等. 狼毒类中药对结核杆菌抗菌作用的比较. 中国药科大学学报, 1995, 26(2): 122-124
[17] 赵奎军，杨隽等. 五种狼毒大戟提取物对结核杆菌抗菌作用的比较. 时珍国医国药, 2001, 11(7): 589-590
[18] 冯宝民，裴月湖等. 六种瑞香科植物中双黄酮类化合物的分布. 大连大学学报, 2003, 24(2): 95-100
[19] 张国洲，王亚维等.瑞香狼毒杀虫活性成分的提取与分离（Ｉ）.安徽农业大学学报，2000, 27(4): 340-344
[20] 张国洲，王亚维等.瑞香狼毒杀虫活性成分的提取与分离（Ⅱ）.安徽农业大学学报，2000, 27(4): 340-344
[21] 张国洲，王亚维. 瑞香狼毒根提取物对菜粉蝶的产卵忌避与杀卵作用. 安徽农业科学，2000, 28(5): 623-628
[22] 吴文君，刘惠霞等编著. 天然产物杀虫剂. 西安: 陕西科技出版社, 1999: 389
[23] 陈年春 农药生物测定技术[M] 北京：北京农业大学出版社 1991, 69-78
[24] 樊俊杰，贾正平，谢景文. 瑞香狼毒水提物抗肿瘤作用. 内蒙古医学院学报, 1996, 18(2): 67
[25] 樊俊杰，贾正平，谢景文. 瑞香狼毒和狼毒素对体外培养小鼠白血病P388细胞生长的影响. 中药材, 1996, 19（11）：567-570
[26] 冯威健，池川哲郎，吉田光二. 瑞香狼毒提取物尼迪吗啉的抗癌活性. 中华肿瘤杂志，1995, 17(1): 24
[27] 中国土农药之编辑委员会. 中国土农药志, 北京：科学出版社, 1959: 104-105
[28] 刘寿山. 中药研究文献摘要. 1820-1961, 北京：科学出版社, 1979: 552
[29] 魏春雁. 瑞香狼毒化学成分与生物活性研究的回顾与展望 中国药学杂志 2001，36(9): 557
[30] 杨伟文，刑有权，宋贸森等. 7–甲氧基狼毒素的分离与结构鉴定.
[31] 刘桂芳，付玉芹，王连等. 瑞香狼毒化学成分研究. 中国中药杂志，1995, 20(12): 738
[32] 刘桂芳，赵瑞凌，付玉芹. 瑞香狼毒化学成分研究[J].中草药，1996, 27(2): 67
[33] 杨伟文，李兆林，杨玉成等. 瑞香狼毒化学成分研究（Ⅴ）挥发油成分研究. 中药通报，1986，10（12）：31
[34] 杨宝印，贾宝山，杨正裕等. 瑞香狼毒对小鼠移植性肿瘤的抑止作用. 中药通报, 1986,（11）：186
[35] 杨正裕，徐培生，曹富珍等. 瑞香狼毒对小鼠移植性Lewis肺癌生长的抑止作用. 中药通报，1988，13（4）：53
[36] 王俊儒. 天然产物提取分离与鉴定技术. 西北农林科技大学讲义，2003
[37] 董旭俊. 中药太白米大鳞茎化学成分研究. 西北农林科技大学, 2002, 6
[38] 张国洲，陈于年等. 瑞香科杀虫植物－瑞香狼毒. 华中师范大学学报（自然科学版）, 2000, 34(3): 326
[39] 张健琛. 亟待开发利用的野生纤维植物－狼毒. 四川草原, 1993(4): 24-27
[40] 史志诚，张祚煌等. 中国草地重要有毒植物. 北京：农业出版社, 1997
[41] 杨仓良. 毒药草本. 北京：中国中医药出版社, 1995
[42] 徐延良. 狼毒枣治疗骨结核16例. 浙江中医杂志，1986(2): 67
[43] 申玉通. 狼毒药酒治疗坐骨神经痛50例. 河北中药, 1987, 9(1): 1-3
[44] 李安生. 狼毒枣合剂治疗颈淋巴结核. 浙江中医杂志, 1984(5): 239
[45] 李征服. 狼毒治疗晚期恶性肿瘤54例. 中西医结合杂志, 1985(1): 29
[46] 郭晓庄. 有毒中草药大辞典. 天津：天津翻译科技出版社, 1992
[47] 郭孝武. 一种提取中草药化学成分的方法–超声提取法. 天然产物研究与开发, 1999, 11(2): 37-40
[48] 郭孝武. 超声技术在中草药成分中的应用. 中草药, 1996, 27（增刊）：234-235
[49] 曾里，夏之宁. 超声波和微波对中药提取的促进和影响. 化学研究与应用，2002，14（3）：245-249
[50] 江苏新医学院. 中药大词典(下). 上海：上海人民出版社，1977
[51] 陈业高，孙汉董，徐志虹等. 瑞香狼毒化学成分的研究. 中国中药杂志，2001，26（7）：477-478
[52] 程德昌. 碳谱及其在中草药化学中的应用. 北京：人民卫生出版社，1981
[53] 常建华，董绮功. 波谱原理及解析. 科学出版社，2001
[54] 宁永成，有机化合物结构鉴定与有机波谱学. 科学出版社, 2000
[55] 赵瑶兴，孙祥玉编. 有机分子结构光谱鉴定. 科学出版社, 2002
[56] 孟令芝. 有机波谱分析(第二版). 武汉大学出版社, 1996
[57] 刘欣，叶文才，车镇涛等. 瑞香狼毒中的木脂素类成分的研究. 中国药科大学学报, 2003, 34（2）：116-119
[58] 洪山海．光谱解析法在有机化学中的应用．科学出版社，1980
[59] 冯宝民，裴月湖.瑞香狼毒化学成分的研究.中国医药杂志，2001,11（2）: 112-114
[60] 宋晓平，周乐等. 瑞香狼毒中异狼毒素的提取和结构鉴定. 中兽医药杂志（专辑）,1995: 2-3
[61] 冯宝民，韩冰. 瑞香狼毒化学成分的研究. 沈阳药科大学学报，2000，17(4): 258-259
[62] 冯宝民，裴月湖. 瑞香狼毒中的黄酮类化合物. 中草药，2001, 32(1): 14-15
[63] 耿会玲. 苯基脲类衍生物的合成及其促进细胞分裂活性. 西北农林科技大学硕士论文, 2003
[64] 郭玉波. 狼毒治疗牛皮癣250例. 河北中医，1986，(4):20
[65] Yoshida M, Feng W J, Saijo N et al. Anti-tumor activity of daphnane-type diterpene gnidimacrin isolated from stellera chamaejasme L. Int Cancer, 1996, 66(2): 268
[66] Ikegawa T, Ikegawa A. Extraction of antitumor diterpenes from Stellera chamaejasme L. Jpn Kokai Tokkyo Koho JP 08310,993[96 310,993] (CI.C07C69/21), 1996-04-26
[67] Liu G Q, Tatematsu H et al. Novel C–3/C–3′biflavanones from Stellera chamaejasme L. Chem Pharm Bull, 1984, 32(1): 362
[68] Niwa M, Tatematsu H, Liu G Q et al. Isolation and structures of two new C–3/C–3′bilavanones, neochamaejasmin A and neochamaejasmin B. Chem Lett, 1984(4): 539
[69] Niwa M, Chen X F, Liu G Q et al. Structure of isochamaejasmin A and neochamaejasmin B. Chem Lett, 1984(9):1587
[70] Niwa M, Liu G Q, Tatematsu H et al. Chamaechromone, a novel rearranged biflavonoid from Stellera chamaejasme L. Tetrahedron Lett, 1984, 25(34): 3735
[71] Ikegawa T, Ikegawa A. Chamaejasmin and euchamaejasmin extraction from Stellera chamaejasma and their antiviral activities. Jpn Kokai Tokkyo JP 08 311,056[96 311,056](CI.C07D311/32), 1996-11-26
[72] Jin C D, Michetich R G, Daneshtalad M. Flavonoids from stellera chamaejasme. Phytochemistry, 1999, 50(3): 505
[73] Tikhomirova L I. Coumarins from Stellera chamaejasme L. Chem Pharm Bull, 1984, 32(4): 1612-1614
[74] Tikhomirova L I, Markova L P, Tumbaa H et al. Coumarins from stellera chamaejasme. Khim Prir Soedin, 1974(3): 402
[75] Modonova L D, Zhapova T S, Bulatova N V et al. Coumarins from stellera chamaejasme. Khim Prir Soedin, 1985(5):709
[76] Narantuya S, Batsuren D, Rashkes Y V et al. Chemical studay of plants of the nongolianfoara coumarins of Stellera chamaejasme L.:thestructure of chamaejasmoside–— a new bicoumarin glycoside. Khimiya Ptirocdnykn soedineni, 1994(2): 216-219
[77] Niwa M, Takamizawa H, Tatematsu H et al. Piscicidal constituents of Stellera chamaejasme L. Chem Pharm Bull, 1982, 30(12): 4518
[78] Feng W J, Zhang H L, Li LF et al. Studies on antitumor Chinese medicinces (Ⅱ). Antitumor constituents of Stellera chamaejasme L. Wakan Gakkaishi, 1991, 8(2): 96
[79] Feng W J. Studies on antitumor active compounds of Stellera chamaejasme L. and their mechanism of action. Tak Igokkai Zasshi, 1992, 38(6): 896
[80] Ikekawa T, Ikekawa N. Carcinestatic compounds and production thereof. PCT Int Appl WO 93, 03, 039 (CI.C07D493/18), 1993-02-18
[81] Ikegawa T, Ikegawa A. Extraction of anticancer and antiviral substances from Stellera chamaejasme for therapeutic use. Jpn Kokai Tokkyo Koho JP08 92, 118[96 92,118] ; (CI. A61K35/78), 1996–04–09
[82] Endo Y, Maruno M, Miura N et al. Nevol diterpenes and their use antiviral and anti–HIV agents with low toxicity. Jpn Kkai Tokkyo Koho JP 10 287,617[98 287,617]; (CI.C07C69/21), 1998–10–27
[83] Tatematsu H, Kurokawa M, Niwa M et al. Piscidal constituents of Stellera chamaejasme L.Ⅱ. Chem Pharm Bull, 1984, 32(4): 1612
[84] Ikegawa T, Ikegawa A. Extraction of antitumor diterpenes from Stellera chamaejasme L. Jpn Kokai Tokkyo Koho JP 08 310,993[96 310,993](CI.C07C69/21),1996-04-26
[85] Jin CD, Ronald M G, Mohsen D. Phenylpropanoid glucosides from Stellera Chamaejasme L. Phytochemistry, 1999, 50(4): 677
[86] Feng B M, Pei Y H, Hua H M. Chemical Constituents of Stellera chamaejasme L. Journal of Chinese Phamaceutical Sciences, 2001, 10(2)
[87] Jin C, Michetich R G, Daneshtalab M. Flavonoids from Stellera chamaejasmie. Phytochemistry, 1999 (50): 505-508
[88] Feng B M, Pei Y H, Han B. Plavonoids from root of stellra chamaejasme. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2001, 32(1): 14-15(in Chinese)
[89] Masatake N, Guo-Quan LIU, Hiroshi Tatematsu. Chamechromone, anovel rearranged biflavonoid from stellera chamaejasme L. Tetrahydron Ltters, 25(34): 3735-3738
[90] Masatake N, Chen Xiang-fang and Liu Guo-quan et al. Strncyure of isochamaejasmin from stellera chamaejasme L. Chem Lett, 1984, 32(9): 1587-1590
[91] Masatake N, Hiroshi, Guo-Quan LIU. Isolation and structures of two new C-3/C-3’’-biflavanones, neochamaejasmin A and neochamaejasmin B.Chemistry Letters, 1984: 539-542
[92] Narantuya S.Batsuren D Rashkes Y V. et al. Chemical study of plants of the Mongolian foara coumarins of Stellera Chamaejasme: the structure of chamaejasmoside-a new bicoumarin glycoside. Khimiya Prirocdnykn Soedineni, 1994(2): 216-219
[93] Masatake N, Seiko O, Hiroshi T. Stereostructures of Two Biflavanones from Stellere chamaejasme L. Chem Pharm Bull, 34(8): 3249-3251
[94] Zhi-Hong Jiang, Takashi Tanaka et al. Biflavanones, Diterpenes, and Coumarins from the Roots of Stellere chamaejasme L. Chem Pharm Bull, 2002, 50(1): 137-139