摘要
有机磷农药在农业生产中起到举足轻重的作用。目前，在我国的农药市场中，有机磷农药仍作为主要的杀虫剂得到广泛的应用。但由于对于农药的不合理使用，造成了农药残留对于植物、动物、大气、水源等周围一切环境的污染，我们的很多农产品和加工食品同样也受到农药残留的污染。随着人们对食品安全意识的加强，农药残留检测这门应用性学科被更加重视，农药残留检测方面的标准也逐步得到完善。
农药残留分析是从复杂混合物中进行痕量组分分析，整个过程包括样品制备、纯化富集、分离检测和综合分析等步骤，它要求分析方法灵敏度高、回收率高、重现性好、操作简单易行。进行农药残留分析方法的研究主要是在样品前处理技术和检测技术方面进行优化，开展农药残留的消解动态实验，对于指导农民用药时间，生产高品质农产品，增强我国农产品的竞争力有重要意义。
本实验初步建立了固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC)检测柑橘中有机磷农药残留的方法，同时也对毒死蜱在柑橘中的消解动态规律进行了研究。
首先是SPE-HPLC检测柑橘中有机磷农药残留的方法的初步建立。样品的前处理技术：分别用丙酮、乙酸乙酯提取柑橘果皮果肉中的3种有机磷农药残留(乐果、杀扑磷、毒死蜱)，用SPE方法净化样品萃取液，分别用丙酮、乙酸乙酯淋洗后浓缩等待进样。检测时采用HPLC，PDA检测器，乙腈与水做流动相，进行梯度洗脱(0-6.5min乙腈：水=50％：50％；6.5-25min乙腈：水=50％：50％变化到乙腈：水=70％：30％：25-30min乙腈：水=70％：30％；30-35min乙腈：水=70％：30％变化到乙腈：水=50％：50％)。最后进行回收率、精密度和灵敏度检验，3种有机磷农药的添加回收率达76.11％-101.82％，相对标准偏差为4.31％-8.49％，最低检测浓度分别为0.012mg／kg，0.015mg／kg，0.021mg／kg符合单次洗脱进行多残留分析的要求。
本文还对毒死蜱在柑橘中的消解动态规律进行了研究。结果表明：果皮的农药残留量和消解速率都比果肉中的大，而且不同浓度处理对果实的不同部位农药半衰期无显著性差异。
Organophosphorous pesticides are very important in agricultural production. So far, they are considered to be the mainly employed insecticides among pesticides in China. Irrational usage of pesticides pollute environment including plants, animals, atmosphere and water bodies. Farm production and processed foods are also in danger of being polluted by pesticide residues. As safe consciousness about foods strengthened by the mass, pesticide residue assay as a practical science is attached more and more attention and criterions of pesticide residuals are optimized gradually.
Pesticide residue assay is a technique that determines the trace components in a complex mixture, the process of witch including sample preparation, purification, enrichment, separation, detection and analyses. The technique is required to be high sensitivity, efficient recovery rate, good recurrence and simple and workable operation. The study on pesticide residue detection methods is to optimize the pretreatment techniques and detection techniques. The study on pesticide residue degradation dynamics plays important roles in instructing properly usage of pesticides, high quality farm production and national farm production competitiveness enhancement.
In the study we primarily optimized the method of Solid Phase Extraction-High Performance Liquid Chromatography (SPE-HPLC) in organophosphorous pesticides' detection in Citrus, and revealed the degradation dynamical rhythm of chlorpyriphos in Citrus.
The method in organophosphorous pesticides' detection by using SPE-HPLC is described as follows: The optimized sample pretreatment techniques included organophosphorous pesticides extraction from Citrus's pericarp and pulp by acetone and ethyl-acetone: optimizing SPE method to purify extractions samples, after eluted with acetone and ethyl-acetone, concentrating the elution solution before determination. Determination was carried out by using HPLC coupled with Photodiode Array Detector. Gradient elution method was employed by starting from 50% acertonitrile and 50% water to 70% acertonitrile and 30% water during 6.5-20mins and back to 50% acertonitrile and 50% waters during 30-35mins. Furthermore, the recoveries, recurrences and the lowest detection limits were determined. The recoveries was between 76.11%-101.82%, RSD 4.31%-8.49%, the lowest limit of the three organophosphorous pesticides was 0.012mg/kg, 0.015mg/kg, 0.021mg/kg respectively, witch meet with the requirements of determine many pesticide residues in a single run.
The degradation dynamics rhythm of chlorpyriphos in Citrus was also studied. The results showed that more pesticide residue and faster were found in pericarp of Citrus than in the pulp, the half life of the pesticide was found no significant difference in different part of Citrus treated with by different pesticide concentrations.
引文
1．安凤春，莫汉宏，王天华等．对硫磷在苹果上的残留动态．环境保护，2001，20(2)：117-119
2．安捷伦色谱和SPE分离注意事项．分析应用通讯，2005，2
3．安蓉．液相色谱技术及液质联用技术在食品及农产品残留检测中的应用．现代科学仪器，2003，1：20-23
4．白芳．中国出口农产品中残留有机磷农药的研究[硕士学位论文]．大连：大连海事大学图书馆，2005
5．蔡雪寒．蔬菜水果中农药残留的固相萃取．液相色谱测定方法的研究．福州市：福建大学图书馆，2006
6．陈虹，张承红．超临界流体萃取极其在我国的研究应用进展．化学通报，1999，11(3)：227-238
7．陈家华，方晓明，朱坚，李晓红，潘良文编著．现代食品分析新技术．北京化学工业出版社，2004，10
8．陈金泉．食品中有机磷农药残留的前处理研究及色谱检测[硕士学位论文]．福州市：福建大学图书馆，2006
9．陈静．蔬菜中有机磷杀虫剂多残留分析方法的研究[硕士学位论文]．北京：中国农业大学图书馆，2004
10．陈石榕．对我国水果农药残留最大限量标准的分析与建议．农药科学与管理，2006，25(12)
11．陈小帆，荣晓东，何日荣等．国内外水果农药残留管理概况．植物保护，2006，32(6)
12．陈萱．三唑磷在柑桔中的残留分析方法极其动态研究[硕士学位论文]．长沙：湖南农业大学图书馆，2005
13．陈振德，袁玉伟，陈雪辉等。毒死蜱在韭菜中的残留动态研究．2006，6(6)：41-43
14．陈珠玲，陈飞，陈红青．高效液相色谱法测定蔬菜中有机磷农药残留量．福州大学学报(自然科学版)2005，33(1)
15．陈宗保．土壤中有机磷农药残留分析及有机磷农药降解行为研究[硕士学位论文]．南昌：南昌大学图书馆，2006
16．戴军主编．食品仪器分析技术．北京：化学工业出版社，2006
17．邓伯勋．我国柑橘产业的现状及对策．浙江柑橘，2000，17(1)：5-7
18．邓军蓉．我国柑橘商品处理化问题研究．武汉：华中农业大学图书馆，2005
19．邓秀新．国内外柑橘产业发展趋势与柑橘优势区域规划．广西园艺，2004，15(4)．6-10
20．范德林．拟除虫菊酯类农药在蔬菜残留及消解动态初步研究[硕士学位论文]．武汉：华中农业大学图书馆，2006
21．关紫烽，马明洋．有机磷农药在水果蔬菜中降解情况研究．大连民族学院学2002，2(2)：21-22
22．郝征红．固相萃取-HPLC技术在农药残留分析中的研究与应用[硕士学位论文]．济南：山东师范大学图书馆，2006
23．何亚斌．不同蔬菜中农药残留与消解规律的初步研究[硕士学位论文]．武汉：华中农业大学图书馆，2005
24．洪蔚萍，陈枝华，杨忠强．气相色谱法同时检测蔬菜中多种有机磷、拟除虫菊酯农药残留．色谱，2004，5
25．洪振涛，张卫锋，聂建荣，庄志辉，刘颖琪．应用固相萃取分析蔬菜水果中农药残留的研究．广东化工，2005，7
26．黄德智，岳永德，汤锋．农药残留分析研究进展，安徽农业科学，2002，30(4)：523-526
27．黄晓梅，钱翌．气相色谱法测定有机磷农药残留方法研究[硕士学位论文]．陕西农业科学，2007，1
28．姜会书，徐会君．农业与技术，1999，19(6)：35-37
29．康天放，赵华，张雁．章辛夷用植物酯酶法快速检测蔬菜中的有机磷农药．化学工业大学学报，2006，32(12)
30．类杀虫剂及其代谢物残留量．色谱，2003，21(3)：255-257
31．李本昌主编．农药残留实用检测方法手册．中国农业科学出版社，1995
32．李继革，周凯，戚双祥．气相色谱法测定蔬菜中10种有机磷农药．中国卫生检验杂志，2005，15(3)
33．李永库．高效液相色谱-质谱联用技术在农药残留分析中的应用研究[硕士学位论文]．桂林：广西大学图书馆，2006
34．李永新，孙成均，赵剑虹等．高效液相色谱法同时测定蔬菜水果中的12种农药残留．色谱，2006，24(3)：251-255
35．刘长武，刘潇威，翟广书等．固相萃取．高效液相色谱法测定蔬菜水果中的氨基甲酸酯
36．刘署照，冯大和．固相抗体直接竞争ELISA法测定小白菜和苹果中甲萘威残留．农药学学报，2001(4)：69-72
37．刘莹雯，丁时超，杜文等．高效液相色谱．串联质谱法测定烟草中有机磷农药的残留量．色谱，2006，24(2)：174-176
38．刘正才．SPE-MEKC测定蔬菜中农药残留量和杀扑磷、氟苯尼考的电化学分析[硕士学位论文]．南京：南京农业大学图书馆，2004
39．卢佩章，戴朝政，张祥民著．色谱理论基础．北京：科学出版社．1997，2
40．陆勋元，蒋永祥．气相色谱法同时检测和分析蔬菜中毒死蜱、氯氰菊酯和氰戊菊酯的残留量．理化检验．化学分册，2006，42
41．马恒麟，张永刚，赵秀华，刘祖兰．苹果中多种农药残留气相色谱分析方法的研究．化工环保，1997，(2)
42．牟世芬．加速溶剂萃取的原理及应用．环境化学，2001，20(3)：299-300
43．纽伟民，赵晓联，赵春城，蔡建荣．有机磷农药检测方法综述．江苏食品与发酵，2004，1
44．农药的作用与污染．绿色化学，2006，5
45．全国农药标准化技术委员会编．化学工业标准汇编农药(第二版)．中国标准出版社，2000
46．孙震，顾亚萍，钱和．果蔬中农药残留分析检测技术的发展．食品科技，2007，(1)：15-19
47．汤桦，孔祥虹，李建华．浓缩苹果汁中多种拟除虫菊酯农药残留量的气相色谱-质谱色定方法．分析实验室，2004，08(23)：25-27
48．唐除痴，李煜昶，陈彬，杨华铮，金桂玉编著．农药化学．南京：南京大学出版社，1998
49．田丹碧主编，仪器分析．北京：化学工业出版社，2004
50．王桂才．油菜子中有机磷农药多残留分析方法的研究[硕士学位论文]．武汉：中国农业科学院油料作物研究所，2006
51．王洪涛，许志强，张玉芳．涕灭威在苹果和土壤中的残留试验研究．农药，2002，41(2)：19-21
52．王建华，王国涛，袁社梅．超临界流体萃取．气相色谱法测定水果蔬菜中有机磷农药残留量．分析实验室，1999，18(6)：55-57
53．王建华，徐强，焦奎．SFE在有机磷农药残留分析中的报道．色谱，1998，16 (6)
54．王硕，刘佳，王俊平．除虫脲农药残留的酶联免疫测定方法．农业环境科学学报，2005(6)：216-220
55．王伟东，苑亚利．我国果品进出口现状及存在问题．落叶果树，2005，35(6)：10-12
56．吴玉洁．食品中农药残留分析方法研究[硕士学位论文]．长沙：湖南师范大学图书馆，2004
57．许泓，林安清，古珑．果蔬中107种残留农药的气相色谱-质谱检测方法．分析测试学报，2004，23(3)：34-38
58．薛晓荣．最低检出量确定方法的探讨．青海环境，2000，10(4)
59．杨娟，阮长青，闫美珍，孟祥宇．植物胆碱酯酶抑制法分析有机磷农药残留的研究．黑龙江八一农垦大学学报，2006，18(5)：55-58
60．杨振锋，丛佩华，聂继云．梨在国内外质量标准比对研究．农药质量标准，2003，(1)5：8-10
61．易军，李云春，弓振斌．食品中农药残留分析的样品前处理技术进展，化学进展，2002，14(6)
62．尹桂豪，秦春秀．热带水果农药残留限量对比分析．热带农业科学，2006，26(5)
63．云自厚，欧阳津，张晓彤编著．液相色谱检测方法．北京：化学工业出版社．2004，10
64．张金虎．毒死蜱农药在苹果果实、叶片及果园土壤中的残留分析[硕士学位论文]．陕西杨凌：西北农林科技大学图书馆，2006
65．张仁堂，牛竹梅，乔旭光，刘维．中国农产品出口贸易中的绿色技术壁垒．中国实物与营养，2005，2
66．张志恒，陈丽萍．欧盟农药MRL标准及中国的主要差异．世界农业，2004，10：47-48
67．朱正斌．高效液相色谱法在农药残留分析中的应用．化学工业与工程技术，2004，25(6)
68. Ahmed F E. Analyses of pesticides and their metabolites in food and drinks. J TrendsAnal Chem, 2001, 20 (11): 649-661
69. Blasco C, Font G. Solid-Phase Microextraction Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry to Determine Postharvest Fungicides in Fruits. Anal Chem, 2003, 75:3606-3615
70. Castro J, Perez R A, Sanchez-Brunete C, Tadeo J L. J Chromatography, 2001, 53 (2): 361-365
71. Arrebolaa F J, Martinez Vidal J L. Determination of 81 multiclass pesticides in fresh foodstuffs by a single injection analysis using gas chromatography-chemical ionization and electron ionization tandem mass spectrometry. Analytica Chimica Acta, 2003, 484 (2): 167-180
72. Goto T, Ito Y, Oka H. Simple and Rapid Determination of N-methylcarbamate Pesticides in Citrus Fruits by Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry. Analytica Chimica Acta, 2003, (487): 201-209
73. Masahiro O, Yoko K, Kazuhiko A. Rapid Method for the Determination of 180 Pesticide Residues in Foods by Gas Chromatography/Mass Spectrometry and Flame Photometric Detection. J Pestic Sci, 2005, 30 (4): 368-377
74. Nunes M J, Camoes M F, Fournier J. J Chromatography, 1997,44 (9-10): 505-513
75. Pylypiw H M, Arsenault T L, Thetford C M, Mattina M J I. J Agric Food Chem, 1997, 45: 3522
76. Simplicio A L, Boas L V. J Chromatogr A, 1999, 833: 35-42
77. Snyder J M, King J W, Rowe L D, Woemer J A. J AOAC Int, 1993, 76 (4): 888-892