人工培养多毛孢菌菌粉水提物对庆大霉素诱导LLCPK细胞凋亡及bFGFmRNA表达的影响
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摘要
目的 研究人工培养的多毛孢菌菌粉水提物对庆大霉素诱导的猪肾小管上皮细胞(LLCPK)损伤、凋亡的保护作用及对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA表达的影响。
方法 将培养的LLCPK细胞分成正常对照组、模型组和治疗组，模型组用庆大霉素刺激，治疗组同时加多毛孢菌菌粉水提物干预。①以MTT法观测存活细胞数；②并测定细胞上清液NAG酶浓度；③荧光标记细胞表面Annexin V，以细胞流式法测定其表达；④RT-PCR检测细胞bFGF mRNA的表达。
结果 庆大霉素可引起细胞存活率的显著降低，NAG酶浓度显著增高，并提高细胞Annexin V的表达，和诱导LLCPK细胞bFGF mRNA的表达。治疗组经用多毛孢菌菌粉水提物干预后，则能提高肾小管上皮细胞LLCPK存活率，降低细胞凋亡数，并显著抑制bFGF mRNA的表达。
结论多毛抱菌菌粉水提物能够对庆大霉素诱导
的猪肾小管上皮细胞(LLCPK)损伤、凋亡起到保护作
用，显著抑制细胞bFGF mRNA的表达可能与抗间质纤
维化有关。
Objective To investigate the theraperatic effects of Cordyceps Sinensis in Gentamincin-induced cytotoxicity, apoptosis and bFGF gene expression in LLCPK.
Methods Model group of LLCPK cells was stimulated with Gentamincin, and at same time added Cordyceps Sinensis in the theraperatic group. The number of cell survival was measured by MTT method and NAG level in culture supernatant was detected by color reaction. Flow cytometry was used to detect the Annexin V upon the cytomembrane. The bFGF mRNA expression was quantitated by RT-PCR assay.
Results In this study, after treatment with Gentamincin, the number of cell survival was markly decreased, and NAG level was markly increased. Results presented that Gentamincin could induce the apoptosis and high expression of bFGF mRNA in LLCPK cells. And following incubation with Cordyceps Sinensis, the number of cell survival was significant increased, the level NAG and apoptosis and bFGF mRNA expression was decreased obviously . Cordyceps Sinensis could decrease the cell damage reduced by Gentamincin and inhibite the apoptosis and bFGF mRNA expression in LLCPK cells.
Conclusion Cordyceps Sinensis can Proteel the cell damage,olecrease the cell's apoptosis and inhibite the bFGF mRNA expression in LLCPK cells induced by Gentamincin,that could be
one of the mathanisms of its cutifibrosis.
方法 将培养的LLCPK细胞分成正常对照组、模型组和治疗组，模型组用庆大霉素刺激，治疗组同时加多毛孢菌菌粉水提物干预。①以MTT法观测存活细胞数；②并测定细胞上清液NAG酶浓度；③荧光标记细胞表面Annexin V，以细胞流式法测定其表达；④RT-PCR检测细胞bFGF mRNA的表达。
结果 庆大霉素可引起细胞存活率的显著降低，NAG酶浓度显著增高，并提高细胞Annexin V的表达，和诱导LLCPK细胞bFGF mRNA的表达。治疗组经用多毛孢菌菌粉水提物干预后，则能提高肾小管上皮细胞LLCPK存活率，降低细胞凋亡数，并显著抑制bFGF mRNA的表达。
结论多毛抱菌菌粉水提物能够对庆大霉素诱导
的猪肾小管上皮细胞(LLCPK)损伤、凋亡起到保护作
用，显著抑制细胞bFGF mRNA的表达可能与抗间质纤
维化有关。
Objective To investigate the theraperatic effects of Cordyceps Sinensis in Gentamincin-induced cytotoxicity, apoptosis and bFGF gene expression in LLCPK.
Methods Model group of LLCPK cells was stimulated with Gentamincin, and at same time added Cordyceps Sinensis in the theraperatic group. The number of cell survival was measured by MTT method and NAG level in culture supernatant was detected by color reaction. Flow cytometry was used to detect the Annexin V upon the cytomembrane. The bFGF mRNA expression was quantitated by RT-PCR assay.
Results In this study, after treatment with Gentamincin, the number of cell survival was markly decreased, and NAG level was markly increased. Results presented that Gentamincin could induce the apoptosis and high expression of bFGF mRNA in LLCPK cells. And following incubation with Cordyceps Sinensis, the number of cell survival was significant increased, the level NAG and apoptosis and bFGF mRNA expression was decreased obviously . Cordyceps Sinensis could decrease the cell damage reduced by Gentamincin and inhibite the apoptosis and bFGF mRNA expression in LLCPK cells.
Conclusion Cordyceps Sinensis can Proteel the cell damage,olecrease the cell's apoptosis and inhibite the bFGF mRNA expression in LLCPK cells induced by Gentamincin,that could be
one of the mathanisms of its cutifibrosis.
引文
1 王海燕．重视和研究小管—间质损害在肾小球疾病发展和预后中的作用．中华肾脏病杂志，2000，16(1)：5～6．
2 kuncio GS, Neilson, Haverty T. Mechanisms of tubulointerstitial fibrosis. Kidney Int, 1991,39: 550～556.
3 EL Nahas AM. Pathways to renal fibrosis. Exp Nephrol, 1995,3: 71～75.
4 孙阳、郑法雷．血管紧张素与肾间质纤维化．中华内科杂志，1999，38(3)：202～204．
5 文晓彦，郑法雷，孙阳，等．缬沙坦抑制人类肾小管上皮细胞转分化的初步研究．中华肾脏病杂志，2000，16(4)：244～247．
6 王翠玲，李建先，刘源，等．氟伐他汀对肾衰大鼠肾脏纤维化病变进展影响及机制探讨．中国中西医结合杂志，2001，2(6)：321～324．
7 李娅，陈楠，王伟铭，等．斯伐他汀对大鼠实验性肾间质纤维化的影响极其机制探讨．中华肾脏病杂志，2001，17(3)：156～159．
8 王要军，孙自勤，权启镇，等．冬虫夏草对大鼠实验性肝纤维化的防治作用极其机理研究．中国中药杂志，1996，21(3)：179～181．
9 刘宏伟，林艺章．冬虫夏草防治肾脏病的实验研究进展．中医杂志，1997，38(9)：563～565．
10 张传开，袁盛榕．冬虫夏草极其人工菌丝的免疫药理学研究进展．首都医科大学学报，1997，18(3)：287～290．
11 黎磊石，郑丰，刘志红，等．冬虫夏草防治氨基糖甙肾毒性损伤的实验研究．中国中西医结合杂志，1996，16(12)：733～737．
12 林善锬．当代肾脏病学．第1版．上海：上海科技教育出版社，2001．484．
13 董德长．实用肾脏病学．第1版．上海：上海科技教育出版社，1999．442．
14 李雪梅，郑法雷，刘彦信，等．庆大霉素对猪肾小管上皮细胞凋亡与细胞内钙浓度的影响．中华内科杂志，1998，37(10)：667～670．
15 陈香美，喻陆，徐启河．肾脏细胞的活化与慢性进展性肾病．中华肾脏病杂志，2000，16(2)：52～54．
16 程叙扬，李晓玫，王海燕．肾小管上皮细胞损伤在慢性肾脏疾病进展中的作用．国外医学泌尿系统分册，2002，22(3)：152～156．
17 王金泉．细胞凋亡与肾小管上皮细胞损伤．肾脏病与透析肾移植杂志，1997，6(3)：249～251．
18 杜爱萍，邹万忠，付艳华，等．肾小管上皮细胞损伤与成纤维细胞生长因子的关系．肾脏病与透析肾移植杂志1997，6(3)：221～224．
19 杜爱萍，邹万忠．成纤维细胞生长因子与肾小管间质纤维化的关系．中华肾脏病杂志，2000，16(1)：47～50．
20 Strutz F, Zeisberg M, Ziyadeh FN, et al. Role of fibroblast growth factor-2 in epithelial-mesenchymal transformation. Kedney Int, 2002,61(5):1714～28.
21 Strulz F, Okada H, LoC, et al.J Cell Biol, 1995, 130: 393～405.
22 王伟铭．肾间质纤维化的机制研究进展．国外医学内科学分册，2000，27(11)：491～494．
23 Du A, Zou W. The role bFGF in renal tubular injury and the interstitial lesion. Zhonghua bingli xue za zhi, 2000, 29(3):208～11.
24 山崎康司．尿细管上皮细胞活性化尿细管间质病变机
序．医学，1999，19(1)：62．
25 王永钧．中医肾病的过去、现在和未来．浙江中医学院学报，1998，22(3)：1～5．
26 庄永泽，黎磊石．冬虫夏草防治氨基糖甙急性肾衰的分子生物学机理．中华肾脏病杂志，1996，12(5)：300～304．
27 郑丰．冬虫夏草促进大鼠肾小管细胞增殖与起其对庆大霉素急性肾损伤的防治作用．中国病理生理杂志，1995，11(2)：211～215．
28 刘宏伟，林艺章．冬虫夏草防治肾脏病的实验研究进展．中医杂志，1997，38(9)563～565．
29 Burton CJ, Wuthrich RP, Yui MA, Mazoujian G, et al. Am J Pathol, 1989,134:45～51.
2 kuncio GS, Neilson, Haverty T. Mechanisms of tubulointerstitial fibrosis. Kidney Int, 1991,39: 550～556.
3 EL Nahas AM. Pathways to renal fibrosis. Exp Nephrol, 1995,3: 71～75.
4 孙阳、郑法雷．血管紧张素与肾间质纤维化．中华内科杂志，1999，38(3)：202～204．
5 文晓彦，郑法雷，孙阳，等．缬沙坦抑制人类肾小管上皮细胞转分化的初步研究．中华肾脏病杂志，2000，16(4)：244～247．
6 王翠玲，李建先，刘源，等．氟伐他汀对肾衰大鼠肾脏纤维化病变进展影响及机制探讨．中国中西医结合杂志，2001，2(6)：321～324．
7 李娅，陈楠，王伟铭，等．斯伐他汀对大鼠实验性肾间质纤维化的影响极其机制探讨．中华肾脏病杂志，2001，17(3)：156～159．
8 王要军，孙自勤，权启镇，等．冬虫夏草对大鼠实验性肝纤维化的防治作用极其机理研究．中国中药杂志，1996，21(3)：179～181．
9 刘宏伟，林艺章．冬虫夏草防治肾脏病的实验研究进展．中医杂志，1997，38(9)：563～565．
10 张传开，袁盛榕．冬虫夏草极其人工菌丝的免疫药理学研究进展．首都医科大学学报，1997，18(3)：287～290．
11 黎磊石，郑丰，刘志红，等．冬虫夏草防治氨基糖甙肾毒性损伤的实验研究．中国中西医结合杂志，1996，16(12)：733～737．
12 林善锬．当代肾脏病学．第1版．上海：上海科技教育出版社，2001．484．
13 董德长．实用肾脏病学．第1版．上海：上海科技教育出版社，1999．442．
14 李雪梅，郑法雷，刘彦信，等．庆大霉素对猪肾小管上皮细胞凋亡与细胞内钙浓度的影响．中华内科杂志，1998，37(10)：667～670．
15 陈香美，喻陆，徐启河．肾脏细胞的活化与慢性进展性肾病．中华肾脏病杂志，2000，16(2)：52～54．
16 程叙扬，李晓玫，王海燕．肾小管上皮细胞损伤在慢性肾脏疾病进展中的作用．国外医学泌尿系统分册，2002，22(3)：152～156．
17 王金泉．细胞凋亡与肾小管上皮细胞损伤．肾脏病与透析肾移植杂志，1997，6(3)：249～251．
18 杜爱萍，邹万忠，付艳华，等．肾小管上皮细胞损伤与成纤维细胞生长因子的关系．肾脏病与透析肾移植杂志1997，6(3)：221～224．
19 杜爱萍，邹万忠．成纤维细胞生长因子与肾小管间质纤维化的关系．中华肾脏病杂志，2000，16(1)：47～50．
20 Strutz F, Zeisberg M, Ziyadeh FN, et al. Role of fibroblast growth factor-2 in epithelial-mesenchymal transformation. Kedney Int, 2002,61(5):1714～28.
21 Strulz F, Okada H, LoC, et al.J Cell Biol, 1995, 130: 393～405.
22 王伟铭．肾间质纤维化的机制研究进展．国外医学内科学分册，2000，27(11)：491～494．
23 Du A, Zou W. The role bFGF in renal tubular injury and the interstitial lesion. Zhonghua bingli xue za zhi, 2000, 29(3):208～11.
24 山崎康司．尿细管上皮细胞活性化尿细管间质病变机
序．医学，1999，19(1)：62．
25 王永钧．中医肾病的过去、现在和未来．浙江中医学院学报，1998，22(3)：1～5．
26 庄永泽，黎磊石．冬虫夏草防治氨基糖甙急性肾衰的分子生物学机理．中华肾脏病杂志，1996，12(5)：300～304．
27 郑丰．冬虫夏草促进大鼠肾小管细胞增殖与起其对庆大霉素急性肾损伤的防治作用．中国病理生理杂志，1995，11(2)：211～215．
28 刘宏伟，林艺章．冬虫夏草防治肾脏病的实验研究进展．中医杂志，1997，38(9)563～565．
29 Burton CJ, Wuthrich RP, Yui MA, Mazoujian G, et al. Am J Pathol, 1989,134:45～51.