棣棠花组织培养及植株再生体系的研究
摘要
本研究以棣棠花Kerria japonica(L.)DC.当年生幼嫩带芽茎段和叶片为试验材料,通过正交实验设计结合方差分析,探讨了棣棠花离体培养的关键影响因素,存在问题及解决方法,对棣棠花茎段诱导、叶片愈伤组织诱导及壮苗生根、炼苗与移栽等方面进行了研究,以得到最佳培养配方及培养程序,从而为建立棣棠花的快繁体系、工厂化生产提供理论与技术依据。
通过组织培养技术研究得出：
①棣棠花外植体组织培养最佳取材时间为3月,启动率高,污染率相对其它时期较低,茎段和叶片的启动率分别为83.3%和38.3%,污染率分别为38.4%和41.5%。
②棣棠花叶片的最佳0.1%HgCl2灭菌时间为5 min,茎段的最佳0.1%HgCl2灭菌时间为7 min。
③初代培养：茎段培养以MS+6-BA0.5 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1+IBA 0.05mg·L-1为最适宜培养基配方组合,启动率高达91.3%,出芽指数1.7。
④继代培养：适宜于芽继代增殖培养的最优组合是1/2 MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1,增殖倍数达4.3,有效苗数3.2。
⑤有效苗的培养：以1/2MS+NAA0.1 mg·L-1为最适宜培养基配方组合,植株生长健壮,有效苗数达89.6%。
⑥生根培养：以1/2MS+活性炭2.0 g·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1为最适宜培养基配方组合,植株生长健壮,生根率最高,达78.7%,平均根数最佳,为3.9条。
⑦移栽与炼苗：炼苗基质以蛭石、珍珠岩、河沙以1：1：2的比例效果最好,成活率较高,达到82.3%,且植株长势良好。
The study was mainly to probe an efficient way through tissue and rapid propagation of Kerria japonica (L.)DC. The leafaxles of young branches, the leaves are taken as explants.. For know the better medium and proceeding of culturing Kerria japonica (L.)DC., we use orthogonal experimental design and analysis of variance to establish the technique system of tissue culture. The affected factors of propagation, existing problems in this technique and the corresponding solutions are also described, which provide the theoretical base and technical measures for industrial producing of plantlet.
The study of tissue culture technique and the better medium for various stages are as follows:
①March is the best season to draw materials, in which the germination rate are 83.3% and 38.3% by stem and leaf, the contaminated rate only are 38.4% and 41.5% by stem, and leaf
②During the trial:5 minutes is good t treat the laminae by HgCl2(0.1%) and 7 minutes is good to treat the stem.
③Initial medium of stem:MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1in which the germination rate is 91.3%, and the shoot forming index is 1.7.
④Proliferating of stems cultivation:The optional proliferating buds culture medium stems and shoots wes:1/2 MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,in which the multiplication rate is 4.3 and the multiplication of efficiency seedings is 3.2.
⑤Efficiency seeding culture:1/2MS+NAA0.1 mg·L-1, in which the rate of efficiency seedings is 89.6%.
⑥Rooting culture:1/2MS+AC2.0 g·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+Sucros 20 g·L-1 in which the rate of rooting is 78.7%, the quantity of roots is 3.9.
⑦Forging seeding transplanting:The transplant medium in vermiculite, perlite and riversand by 1:1:2 is the optimal for. Jacaranda mimosifolia, which the rate of survival is 82.3%.
通过组织培养技术研究得出：
①棣棠花外植体组织培养最佳取材时间为3月,启动率高,污染率相对其它时期较低,茎段和叶片的启动率分别为83.3%和38.3%,污染率分别为38.4%和41.5%。
②棣棠花叶片的最佳0.1%HgCl2灭菌时间为5 min,茎段的最佳0.1%HgCl2灭菌时间为7 min。
③初代培养：茎段培养以MS+6-BA0.5 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1+IBA 0.05mg·L-1为最适宜培养基配方组合,启动率高达91.3%,出芽指数1.7。
④继代培养：适宜于芽继代增殖培养的最优组合是1/2 MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1,增殖倍数达4.3,有效苗数3.2。
⑤有效苗的培养：以1/2MS+NAA0.1 mg·L-1为最适宜培养基配方组合,植株生长健壮,有效苗数达89.6%。
⑥生根培养：以1/2MS+活性炭2.0 g·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1为最适宜培养基配方组合,植株生长健壮,生根率最高,达78.7%,平均根数最佳,为3.9条。
⑦移栽与炼苗：炼苗基质以蛭石、珍珠岩、河沙以1：1：2的比例效果最好,成活率较高,达到82.3%,且植株长势良好。
The study was mainly to probe an efficient way through tissue and rapid propagation of Kerria japonica (L.)DC. The leafaxles of young branches, the leaves are taken as explants.. For know the better medium and proceeding of culturing Kerria japonica (L.)DC., we use orthogonal experimental design and analysis of variance to establish the technique system of tissue culture. The affected factors of propagation, existing problems in this technique and the corresponding solutions are also described, which provide the theoretical base and technical measures for industrial producing of plantlet.
The study of tissue culture technique and the better medium for various stages are as follows:
①March is the best season to draw materials, in which the germination rate are 83.3% and 38.3% by stem and leaf, the contaminated rate only are 38.4% and 41.5% by stem, and leaf
②During the trial:5 minutes is good t treat the laminae by HgCl2(0.1%) and 7 minutes is good to treat the stem.
③Initial medium of stem:MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1in which the germination rate is 91.3%, and the shoot forming index is 1.7.
④Proliferating of stems cultivation:The optional proliferating buds culture medium stems and shoots wes:1/2 MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,in which the multiplication rate is 4.3 and the multiplication of efficiency seedings is 3.2.
⑤Efficiency seeding culture:1/2MS+NAA0.1 mg·L-1, in which the rate of efficiency seedings is 89.6%.
⑥Rooting culture:1/2MS+AC2.0 g·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+Sucros 20 g·L-1 in which the rate of rooting is 78.7%, the quantity of roots is 3.9.
⑦Forging seeding transplanting:The transplant medium in vermiculite, perlite and riversand by 1:1:2 is the optimal for. Jacaranda mimosifolia, which the rate of survival is 82.3%.
引文
[1]方文培,等.中国植物志.[M].北京：科学出版社,1981,54-56
[2]李宪章.繁花的棣棠[J].中国花卉盆景,2004,(04)
[3]任继文,芦维忠.棣棠花[J].甘肃林业,1994,(02)
[4]卓丽环,陈龙清.园林树木学[M].北京：中国农业出版社,2004：200-201.
[5]贾禾弟.现代花卉使用技术全书[M].北京：中国农业出版社,2004：356-357.
[6]园林新优植物[J].园林科技,2008,(01)
[7]朱福勤.优良地被植物——棣棠[J].北京园林,1999,(02)
[8]卢学义.园林树种育苗技术[M].沈阳：辽宁科学技术出版社中国林业出版社,2001：2962301
[9]尤雅宜.园林植物栽培手册[M].北京：中国林业出版社,2004
[10]陈克武.棣棠花的栽培技术[J].安徽林业科技,2005,(01)
[11]邓运川,李素想.棣棠的栽培管理技术[J].南方农业(园林花卉版),2009,(03)
[12]Davies, F. S.用蔗糖和酒精处理桃离体新梢可促使早开花和延长瓶插寿命.园艺学文摘,1983
[13]宋丽华,曹兵,秦娟.几种观叶植物的水培繁殖试验[J].北方园艺,2003(3)：62-64.
[14]赵兰枝,王珊珊,陈进洁,张允伟.棣棠水培生长试验[J].广东农业科学,2007,(01)
[15]温爱存.棣棠嫩枝扦插育苗试验研究[J].中国林副特产,2009,(02)
[16]许福金.棣棠花的引种试验[J].宁夏农林科技,2002,(03)
[17]张海军,高欣.园林花卉的综合应用[J].吉林蔬菜,2009,(04)
[18]赵权牢.植物色彩的应用[J].河南林业,1999,(05)
[19]王仕玉,郭凤根.棣棠和碧桃的切花保鲜研究[J].云南农业大学学报,1999,(01)
[20]王昌腾.浙江省蔷薇科观赏植物资源及园林应用[J].安徽农业科学,2007,(23)
[21]李声媛、夏晓玲.中药棣棠花治疗小儿哮喘性支气管炎30例疗效观察[J].昆明医学院学报1993；14(2)：70-71
[22]许智宏主编.植物生物技术[M].上海：上海科学技术出版社,1998,224-273.
[23]谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术[M].北京：中国林业出版社,1991.
[24]韩一凡.德国林业生物技术研究现状[J].世界林业研究,1993,(2)：23-26.
[25]蔡新声.台湾组织培养研究现状(杨仲南译)[J].植物生理学通讯,1994,30(6)：473.
[26]罗士韦.植物细胞和组织培养的应用和展望[J].植物生理学通讯,1983,(2)：1-6.
[27]薛庆善.体外培养的原理与技术[M].北京：科学出版社,2001.
[28]郑玉梅,刘青林.木本观赏植物离体快速繁殖技术的进展[J].北京林业大学学报,2001,23(增刊)：75-82.
[29]齐力旺,韩素英,杨凤英等.金黄球柏离体培养及快速繁殖研究[J].园艺学报,1997,24(1)：75-78.
[30]段祖安,齐建国,张承庆.金脉连翘的组培快速繁育研究[J].园艺学报,2000,129(4)：22-24.
[31]于萍,王燕,牟淑瑛等.金叶卫矛的茎段培养及试管繁殖[J].园艺学报,2001,27(1)：69-70.
[32]李青,苏雪痕.金叶连翘试管苗生根及移栽成活率的研究[J].北京林业大学学报,2003,25(1)：58-61.
[33]张庆田,夏阳,孙仲序等.垂丝海棠组培再生体系建立的研究[J].生物技术,2007,17(3)：73-75
[34]周玉珍,张雨青.金叶风箱果初代离体培养中影响褐化的因素[J].植物生理学通讯,2001,37(2)：122-123.
[35]曹孜义,刘国民.实用植物组织培养技术教程[M].兰州：甘肃科学技术出版社,1999.
[36]徐妙珍,张雅君,李伟等.林木组织培养的障碍因素及其对策[J].林业科技,1992,17(3)：10-12.
[37]李浚明.植物组织培养教程[M].北京：中国农业大学出版社,2002.
[38]王丽娟,田京伟,杨建雄等.植物组织培养的研究进展[J].运城高等专科学校学报,1999,17(3)：8-11.
[39]李海燕,胡国富,胡宝忠.月季组培快繁技术的研究[J].东北农业大学学报,2004,(01)
[40]熊芳,吴安湘,金晓玲,邱慧.月季快速繁殖技术研究[J].中南林学院学报,2006,(04)
[41]唐黎标.月季快繁新法[J].中国花卉园艺,2002,(22)
[42]张红.大花月季的组培快繁技术[J].北方园艺,2008,(04)
[43]王红.抗寒月季组培快繁技术研究[J].园林科技,2007,(04)
[44]杨俊霞,王耀辉.微型月季的组培快繁[J].中国花卉盆景,2004,(10)
[45]吴淑平,马汉云,龚凤萍,蒋双丰,张杰磊,党永超.丰花月季组培快繁技术研究[J].安徽农业科学,2006,(21)
[46]杨永花,朱亚灵.丰花月季组培快繁技术研究初报[J].甘肃农业科技,2000,(05)
[47]吕汰,裴建文,王娟.丰花月季的组培快繁技术[J].甘肃农业科技,2000,(02).
[48]蒋细旺.丰花月季的两步法快速繁殖技术研究[J].黄冈职业技术学院学报,2005,(01)
[49]项艳,江海洋,李卞宗.正交试验法在月季离体快繁中的应用[J].安徽农业大学学报2003,(03)
[50]崔广荣.月季茎段组织培养的研究[J].特产研究,2003,(03).
[51]郭致宽,李方华.玫瑰苗组织快繁技术[J].河北农业科技,2008,(21)
[52]张艳秋,张天静,孙敏杰,温健.玫瑰组织培养快繁技术[J].科技情报开发与经济,2008,(28)
[53]赵一鹏,赵兰枝,周岩,刘弘.玫瑰的组织培养技术[J].西南园艺,2002,(01)
[54]潘立刚.玫瑰组织培养及胚状体诱导技术研究[J].黑龙江八一农垦大学学报,1990,(02)
[55]于福科,张广军.玫瑰组织培养污染控制技术措施[J].陕西农业科学,2002,(11)
[56]孙瑞芳.钻石玫瑰组培快繁技术研究[J].园林科技,2007,(04)
[57]朱翠英,王文莉,孙居文.紫枝玫瑰组培快繁技术的研究[J].山东林业科技,2005,(06)
[58]吴连松,陈桂信.珍珠玫瑰的离体快繁技术初探[J].福建热作科技,2007,(01)
[59]洪燕萍,林顺权.草莓离体培养研究进展[J].福建农业学报,1999,(02)
[60]许淑琼.草莓脱毒苗组培快繁技术研究[J].中国南方果树,2002,(02)
[61]王波,蒋天仪,程晓波,宋碧.重瓣棣棠花的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯,2008,(06)
[62]张茹琴.棣棠花组织培养与快速繁殖技术研究[J].安徽农业科学,2009,(17)
[63]韩一凡.德国林业生物技术研究现状[J].世界林业研究,1993,(2)：23-26.
[64]夏晗.珙桐组织培养技术体系研究.[D].雅安：四川农业大学,2003,7.
[65]林伯年.园艺植物繁育学[M].上海：上海科学技术出版社,2002,344.
[66]陈振光.茶树的花药培养实验[J].福建农业科技,1979,(4)：39.
[67]黄学林,李悠菊.高等植物组织离体培养的形态建成及其调控[M].北京：科学出版社,1995,150.
[68]Gunson H E et al latent bacterial infection:Epiphytes as contaminants of micropagated[A].Inphysiology,growthand development of plants in culture[C].Kluwer Academic Publishers,Dordrecht,Netherlands,1994.379-396
[69]于亚军,代汉萍,李宝江植物激素和生长调节剂在果树组织培养中的应用[J].北方园艺,2002,(6)：68-70.
[70]Leifert C et al.Ecology of microbial sathogens in tissue culture and fieldgrown plants:reasons for contamination problem in vitro[J].critial review in plant science,1994,13:139-183
[71]Smulder M.J.M,Croes A.F,Wallems GJ,Polar transport of 1-naphthaleneacetic acid determines the distribution of flower buds on explants of tobacco[J].Plant Physiol.1988,88:752-756
[72]LiMJ.The influence of different factors on callus induction of Dioscorea opposita[J]. GUIHAIA,2000,20(2):156-160.
[2]李宪章.繁花的棣棠[J].中国花卉盆景,2004,(04)
[3]任继文,芦维忠.棣棠花[J].甘肃林业,1994,(02)
[4]卓丽环,陈龙清.园林树木学[M].北京：中国农业出版社,2004：200-201.
[5]贾禾弟.现代花卉使用技术全书[M].北京：中国农业出版社,2004：356-357.
[6]园林新优植物[J].园林科技,2008,(01)
[7]朱福勤.优良地被植物——棣棠[J].北京园林,1999,(02)
[8]卢学义.园林树种育苗技术[M].沈阳：辽宁科学技术出版社中国林业出版社,2001：2962301
[9]尤雅宜.园林植物栽培手册[M].北京：中国林业出版社,2004
[10]陈克武.棣棠花的栽培技术[J].安徽林业科技,2005,(01)
[11]邓运川,李素想.棣棠的栽培管理技术[J].南方农业(园林花卉版),2009,(03)
[12]Davies, F. S.用蔗糖和酒精处理桃离体新梢可促使早开花和延长瓶插寿命.园艺学文摘,1983
[13]宋丽华,曹兵,秦娟.几种观叶植物的水培繁殖试验[J].北方园艺,2003(3)：62-64.
[14]赵兰枝,王珊珊,陈进洁,张允伟.棣棠水培生长试验[J].广东农业科学,2007,(01)
[15]温爱存.棣棠嫩枝扦插育苗试验研究[J].中国林副特产,2009,(02)
[16]许福金.棣棠花的引种试验[J].宁夏农林科技,2002,(03)
[17]张海军,高欣.园林花卉的综合应用[J].吉林蔬菜,2009,(04)
[18]赵权牢.植物色彩的应用[J].河南林业,1999,(05)
[19]王仕玉,郭凤根.棣棠和碧桃的切花保鲜研究[J].云南农业大学学报,1999,(01)
[20]王昌腾.浙江省蔷薇科观赏植物资源及园林应用[J].安徽农业科学,2007,(23)
[21]李声媛、夏晓玲.中药棣棠花治疗小儿哮喘性支气管炎30例疗效观察[J].昆明医学院学报1993；14(2)：70-71
[22]许智宏主编.植物生物技术[M].上海：上海科学技术出版社,1998,224-273.
[23]谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术[M].北京：中国林业出版社,1991.
[24]韩一凡.德国林业生物技术研究现状[J].世界林业研究,1993,(2)：23-26.
[25]蔡新声.台湾组织培养研究现状(杨仲南译)[J].植物生理学通讯,1994,30(6)：473.
[26]罗士韦.植物细胞和组织培养的应用和展望[J].植物生理学通讯,1983,(2)：1-6.
[27]薛庆善.体外培养的原理与技术[M].北京：科学出版社,2001.
[28]郑玉梅,刘青林.木本观赏植物离体快速繁殖技术的进展[J].北京林业大学学报,2001,23(增刊)：75-82.
[29]齐力旺,韩素英,杨凤英等.金黄球柏离体培养及快速繁殖研究[J].园艺学报,1997,24(1)：75-78.
[30]段祖安,齐建国,张承庆.金脉连翘的组培快速繁育研究[J].园艺学报,2000,129(4)：22-24.
[31]于萍,王燕,牟淑瑛等.金叶卫矛的茎段培养及试管繁殖[J].园艺学报,2001,27(1)：69-70.
[32]李青,苏雪痕.金叶连翘试管苗生根及移栽成活率的研究[J].北京林业大学学报,2003,25(1)：58-61.
[33]张庆田,夏阳,孙仲序等.垂丝海棠组培再生体系建立的研究[J].生物技术,2007,17(3)：73-75
[34]周玉珍,张雨青.金叶风箱果初代离体培养中影响褐化的因素[J].植物生理学通讯,2001,37(2)：122-123.
[35]曹孜义,刘国民.实用植物组织培养技术教程[M].兰州：甘肃科学技术出版社,1999.
[36]徐妙珍,张雅君,李伟等.林木组织培养的障碍因素及其对策[J].林业科技,1992,17(3)：10-12.
[37]李浚明.植物组织培养教程[M].北京：中国农业大学出版社,2002.
[38]王丽娟,田京伟,杨建雄等.植物组织培养的研究进展[J].运城高等专科学校学报,1999,17(3)：8-11.
[39]李海燕,胡国富,胡宝忠.月季组培快繁技术的研究[J].东北农业大学学报,2004,(01)
[40]熊芳,吴安湘,金晓玲,邱慧.月季快速繁殖技术研究[J].中南林学院学报,2006,(04)
[41]唐黎标.月季快繁新法[J].中国花卉园艺,2002,(22)
[42]张红.大花月季的组培快繁技术[J].北方园艺,2008,(04)
[43]王红.抗寒月季组培快繁技术研究[J].园林科技,2007,(04)
[44]杨俊霞,王耀辉.微型月季的组培快繁[J].中国花卉盆景,2004,(10)
[45]吴淑平,马汉云,龚凤萍,蒋双丰,张杰磊,党永超.丰花月季组培快繁技术研究[J].安徽农业科学,2006,(21)
[46]杨永花,朱亚灵.丰花月季组培快繁技术研究初报[J].甘肃农业科技,2000,(05)
[47]吕汰,裴建文,王娟.丰花月季的组培快繁技术[J].甘肃农业科技,2000,(02).
[48]蒋细旺.丰花月季的两步法快速繁殖技术研究[J].黄冈职业技术学院学报,2005,(01)
[49]项艳,江海洋,李卞宗.正交试验法在月季离体快繁中的应用[J].安徽农业大学学报2003,(03)
[50]崔广荣.月季茎段组织培养的研究[J].特产研究,2003,(03).
[51]郭致宽,李方华.玫瑰苗组织快繁技术[J].河北农业科技,2008,(21)
[52]张艳秋,张天静,孙敏杰,温健.玫瑰组织培养快繁技术[J].科技情报开发与经济,2008,(28)
[53]赵一鹏,赵兰枝,周岩,刘弘.玫瑰的组织培养技术[J].西南园艺,2002,(01)
[54]潘立刚.玫瑰组织培养及胚状体诱导技术研究[J].黑龙江八一农垦大学学报,1990,(02)
[55]于福科,张广军.玫瑰组织培养污染控制技术措施[J].陕西农业科学,2002,(11)
[56]孙瑞芳.钻石玫瑰组培快繁技术研究[J].园林科技,2007,(04)
[57]朱翠英,王文莉,孙居文.紫枝玫瑰组培快繁技术的研究[J].山东林业科技,2005,(06)
[58]吴连松,陈桂信.珍珠玫瑰的离体快繁技术初探[J].福建热作科技,2007,(01)
[59]洪燕萍,林顺权.草莓离体培养研究进展[J].福建农业学报,1999,(02)
[60]许淑琼.草莓脱毒苗组培快繁技术研究[J].中国南方果树,2002,(02)
[61]王波,蒋天仪,程晓波,宋碧.重瓣棣棠花的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯,2008,(06)
[62]张茹琴.棣棠花组织培养与快速繁殖技术研究[J].安徽农业科学,2009,(17)
[63]韩一凡.德国林业生物技术研究现状[J].世界林业研究,1993,(2)：23-26.
[64]夏晗.珙桐组织培养技术体系研究.[D].雅安：四川农业大学,2003,7.
[65]林伯年.园艺植物繁育学[M].上海：上海科学技术出版社,2002,344.
[66]陈振光.茶树的花药培养实验[J].福建农业科技,1979,(4)：39.
[67]黄学林,李悠菊.高等植物组织离体培养的形态建成及其调控[M].北京：科学出版社,1995,150.
[68]Gunson H E et al latent bacterial infection:Epiphytes as contaminants of micropagated[A].Inphysiology,growthand development of plants in culture[C].Kluwer Academic Publishers,Dordrecht,Netherlands,1994.379-396
[69]于亚军,代汉萍,李宝江植物激素和生长调节剂在果树组织培养中的应用[J].北方园艺,2002,(6)：68-70.
[70]Leifert C et al.Ecology of microbial sathogens in tissue culture and fieldgrown plants:reasons for contamination problem in vitro[J].critial review in plant science,1994,13:139-183
[71]Smulder M.J.M,Croes A.F,Wallems GJ,Polar transport of 1-naphthaleneacetic acid determines the distribution of flower buds on explants of tobacco[J].Plant Physiol.1988,88:752-756
[72]LiMJ.The influence of different factors on callus induction of Dioscorea opposita[J]. GUIHAIA,2000,20(2):156-160.