叶下珠药材指纹图谱的研究
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摘要
叶下珠药材指纹图谱的研究
中药指纹图谱是指运用现代分析技术对中药化学信息以图形(图像)的方式进行表征并加以描述。通过反映中药内在化学成分的种类和数量，提供全面的、综合的信息以控制中药材及中药制剂的质量，是目前国际上能认可的、较好的反映了中药材及中药制剂质量的质量控制方法。
叶下珠(又名珍珠草)，为大戟科植物叶下珠(Phyllanthus urinaria L.)的全草，民间常用于治疗腹泻、下痢、尿路感染、肾炎水肿和黄疸性肝炎等疾病，近年来国内外均将其用于治疗病毒性乙型肝炎，被认为是一种有广阔发展潜力的安全有效的抗乙肝病毒植物药。本文以叶下珠药材中所含的酚酸类成分柯里拉京和没食子酸为对照品，针对其中的水溶性成分和脂溶性成分采用不同的提取方法，考察了甲醇—水流动相系统和乙腈—水流动相系统，并通过加入小分子有机酸(如乙酸、三氯乙酸)以及四氢呋喃等优化流动相系统，以改善色谱峰的峰形和分离度，通过反复摸索确定了流动相洗脱梯度，使药材中的水溶性和脂溶性成分在取得良好分离度的基础上保持适当峰数和稳定的色谱峰峰面积积分值，经过制备、分析、比较、评价和校验过程，建立了叶下珠药材的高效液相色谱指纹图谱和标准，同时比较了不同产地出产的叶下珠药材之间的差异。结果表明，叶下珠药材指纹图谱能够反映药材之间的相似性，为叶下珠药材的质量控制提供了可靠依据。同时，通过比较不同产地的叶下珠药材的指纹图谱之间的差异，可以看出不同产地的叶下珠药材之间的差异较小。造成差异的原因可能是药材生长环境，采收季节、贮藏时间的长短不同，以及取样均匀性、提取条件不能保持完全一致。
The fingerprint reserch of medical material of Phyllanthus urinaria L.
The modern analytical technique is applied to the reserch of fingerprint by using figures to describe the internal chemical information of the traditional Chinese medicine. The fingerprint can reflect the different of description and quantity of chemical information. It can be used to control the quality of the traditional Chinese medicine and drugs preparati on through the full-scal e and integrative information. It' s a better method to control the quality of traditional Chinese medicine which could be ratified in the international.
In Chinese civil, Phyllanthus urinaria L. is used to treat the coprorrhea, alv laxat, urinary tract infection, oedema nephriticum, icterohepatitis, and so on. In the past few years , it is mainly used to cure the Type B viral hepatitis and known as a potential, safe and effective plant amedica. In this articles, we used two of the internal phenolic acid ingredient-cotilagin and gallic acid-as control article. We used different extract methods and considerated two mobile phase systems-MeOH-H2O and acetonitrile-H2O.For the purpose of optimize the mobile phase systems, we added micromolecule organic acid, such as acetic acid, trichloracetic acid and tetrahydrofuran to improve the peak shape and resolution. We ascertained the the mobile phase systems and elution grad. The water-solubility and liposolubi1ity ingredient were maintained proper resolution under the circumstance. All chromatographic peak area score are stable. Through the process of evelopment analysis, comparision evaluation,andverification,we estab
lished the HPLC fingerprint of Phyllanthus urinaria L. and compared Phyllanthus urinaria L. which yielded from diferent places. The consequence indicate that the fingerprint can reflect the resemblance of the medical material and provide re I iable evidence to control the quality of Phyllanthus urinaria L. At the same time ,we compared the distinction of fingerprint of Phyl lanthus urinaria L. which yielded from different places and found that
there are no significant difference. These minor difference may he caused by the different living surrounding, collected season, the period of provision, and the homogeneity of taking of samples and the condition of extraction which we can't hold completely at equal pace.
中药指纹图谱是指运用现代分析技术对中药化学信息以图形(图像)的方式进行表征并加以描述。通过反映中药内在化学成分的种类和数量，提供全面的、综合的信息以控制中药材及中药制剂的质量，是目前国际上能认可的、较好的反映了中药材及中药制剂质量的质量控制方法。
叶下珠(又名珍珠草)，为大戟科植物叶下珠(Phyllanthus urinaria L.)的全草，民间常用于治疗腹泻、下痢、尿路感染、肾炎水肿和黄疸性肝炎等疾病，近年来国内外均将其用于治疗病毒性乙型肝炎，被认为是一种有广阔发展潜力的安全有效的抗乙肝病毒植物药。本文以叶下珠药材中所含的酚酸类成分柯里拉京和没食子酸为对照品，针对其中的水溶性成分和脂溶性成分采用不同的提取方法，考察了甲醇—水流动相系统和乙腈—水流动相系统，并通过加入小分子有机酸(如乙酸、三氯乙酸)以及四氢呋喃等优化流动相系统，以改善色谱峰的峰形和分离度，通过反复摸索确定了流动相洗脱梯度，使药材中的水溶性和脂溶性成分在取得良好分离度的基础上保持适当峰数和稳定的色谱峰峰面积积分值，经过制备、分析、比较、评价和校验过程，建立了叶下珠药材的高效液相色谱指纹图谱和标准，同时比较了不同产地出产的叶下珠药材之间的差异。结果表明，叶下珠药材指纹图谱能够反映药材之间的相似性，为叶下珠药材的质量控制提供了可靠依据。同时，通过比较不同产地的叶下珠药材的指纹图谱之间的差异，可以看出不同产地的叶下珠药材之间的差异较小。造成差异的原因可能是药材生长环境，采收季节、贮藏时间的长短不同，以及取样均匀性、提取条件不能保持完全一致。
The fingerprint reserch of medical material of Phyllanthus urinaria L.
The modern analytical technique is applied to the reserch of fingerprint by using figures to describe the internal chemical information of the traditional Chinese medicine. The fingerprint can reflect the different of description and quantity of chemical information. It can be used to control the quality of the traditional Chinese medicine and drugs preparati on through the full-scal e and integrative information. It' s a better method to control the quality of traditional Chinese medicine which could be ratified in the international.
In Chinese civil, Phyllanthus urinaria L. is used to treat the coprorrhea, alv laxat, urinary tract infection, oedema nephriticum, icterohepatitis, and so on. In the past few years , it is mainly used to cure the Type B viral hepatitis and known as a potential, safe and effective plant amedica. In this articles, we used two of the internal phenolic acid ingredient-cotilagin and gallic acid-as control article. We used different extract methods and considerated two mobile phase systems-MeOH-H2O and acetonitrile-H2O.For the purpose of optimize the mobile phase systems, we added micromolecule organic acid, such as acetic acid, trichloracetic acid and tetrahydrofuran to improve the peak shape and resolution. We ascertained the the mobile phase systems and elution grad. The water-solubility and liposolubi1ity ingredient were maintained proper resolution under the circumstance. All chromatographic peak area score are stable. Through the process of evelopment analysis, comparision evaluation,andverification,we estab
lished the HPLC fingerprint of Phyllanthus urinaria L. and compared Phyllanthus urinaria L. which yielded from diferent places. The consequence indicate that the fingerprint can reflect the resemblance of the medical material and provide re I iable evidence to control the quality of Phyllanthus urinaria L. At the same time ,we compared the distinction of fingerprint of Phyl lanthus urinaria L. which yielded from different places and found that
there are no significant difference. These minor difference may he caused by the different living surrounding, collected season, the period of provision, and the homogeneity of taking of samples and the condition of extraction which we can't hold completely at equal pace.
引文
1、周玉新，雷海明，魏璐雪，等．主编，中药指纹图谱研究技术，北京：化学工业出版社，2002，8．
2、江苏新医学院．中药大辞典[M]，下册，下册：上海人民出版社，1997．
3、方蕾，任丽娟．叶下珠属植物化学和药理作用研究概况[J]，国外医药-植物药分册，1992，7(6)：249-255．
4、牛晓峰，赵锐山，李维凤，等．叶下珠不同生长期及贮存期总黄酮含量测定，西北药学杂志，2000，15(2)：60．
5、张兰珍，王晓强，贾辉，等．高效液相色谱法测定叶下珠中没食子酸的含节北京中医药大学学报，2000，23(6)：46-47．
6、张岚，任丽娟，李克明．同产地和采集季节叶下珠中鞣料云实精含量的比较，中草药，2002，33(2)：157-159．
7、郭志军，刘艳萍．浅谈中医药现代化的误区和出路，天津中医药，2003，20(1)：55．
8、任德权．中药指纹图谱质控技术的意义与作用，新药与临床药理，2001，12(3)：1：35．
9、李彩君，林巧玲，谢培山，等．高良姜中黄酮类成分薄层色谱指纹图谱鉴别，中药新药与临床药理，2001，12(3)：183—187．
10、聂孝平，向大雄，李焕德，等．薄层扫描指纹图谱法对克瘾灵胶囊中延胡索和夏天无的鉴别，湖南中医学院学报，2002，22(1)：34—35．
11、钱浩泉，李彩君，谢培山．高良姜及其近缘植物挥发油成分的气相色谱指纹图谱研究，中药新药与临床药理，2001，12(3)：179—182．
12、田吉，冯文宇，邱华荣，等．金银花药材气相指纹图谱研究，泸州医学院学报，2002，25(1)：76—77．
13、赵陆华，刘艳华，张同，等．降香药材GC指纹图谱的建立，中成药，2002，24(11)：825—827．
14、赵燕燕，贾凌云，孙启时．白茅根药材的指纹图谱，沈阳药科大学学报，2002，19(5)：352—354．
15、王雁．三七HPLC指纹图谱的建立，中国中药杂志，2003，28(4)：316-320．
16、邹忠梅，徐丽珍，杨世林．芍药总苷高效液相色谱指纹图谱研究，药学学报2003，38(1)：46-49．
17、谢培山．中药质量控制模式的发展趋势，中药新药与临床药理，2001，12(3)：188．
18、万振先，喻庆禄，易杨华．叶下珠化学成分的研究(Ⅱ)，中草药，1997，28(3)：134—135．
19、张兰珍，郭亚健，涂光忠，等．叶下珠多酚化合物的分离与鉴定，中国中药杂志，2000，25(12)：724—725．
20、张兰珍，郭亚健，涂光忠，等．叶下珠化学成分研究，中国中药杂志，2000，25(10)：615—617．
21、沙东旭，刘英华，王龙顺，等．叶下珠化学成分的研究，沈阳药科大学学报，2000，17(3)：176—178．
22、陈玉武，任丽娟，李克明，等．叶下珠中新多酚化合物的分离与鉴定，药学学报，1999，34(7)：526—529．
23、仲英，左春旭，李风琴，等．叶下珠化学成分及其抗乙肝病毒活性的研究，中国中药杂志，1998，23(6)：363—364．
24、姜素椿，吕占秀主编．传染病基础与临床[M]，北京：军事医学科学出版社，1999．125．
25、Thyagarajan SP, Subramanian S, Thimnalasundari T, et al. Effect of Phyllanthus amams on chronic carriers of hepatitis B vires, Lancet, 1988,2(8614):764-6.
26、贺浪冲，陕西叶下珠药用开发研究，西北药学杂志，1996，11(1)：11．
27、周世文，姚丹帆，徐传福，等．叶下珠和金钱草对乙型肝炎表面抗原的抑制作用，实用中西结合杂志，1995，8(12)：760—761．
28、王岭，张均倡，罗上武，等．叶下珠复方肝丹体外抗作用特点的实验研究，中国中医基础医学杂志，1999，5(7)：29—31．
29、陈压西，郭树华，齐珍元，等．广西叶下珠抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究，重庆医科大学学报，2000，25(1)：39—40．
30、王新华．叶下珠复方体内抗鸭乙型肝炎病毒作用的实验研究，广州中医药大学学报，1997，14(4)：247．
31、张均倡，王岭，罗上武，等．肝康对实验性慢性肝损伤的保护作用，中国中医基础学杂志，1998，4(6)：36—38．
32、谢志春，胡慧宁，谭机永．叶下珠复方对四氯化碳所致小鼠肝损伤的保护作用及影响，广西医学，2002，24(10)：1536—1538．
33、谢志春，胡慧宁．叶下珠复方抗小鼠肝纤维化作用的实验研究，医学文选2002，21(4)：425—428．
34、周世文，徐传福，周宁，等．叶下珠抗肝细胞损伤作用机制，中国中药杂志，1997，22(2)：109—111．
35、王昌俊，袁德，陈伟，等．叶下珠对人肝细胞的影响，时珍国药研究，1997，8(6)：499．
36、郭卫真，邓学龙，董伯振，等．叶下珠属植物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的作用，广州中医药大学学报，2000，17(1)：54—57．
37、Shen ZQ, Dong ZJ, Peng H, et al. Modulation of PAI-1 and tPA activity and thrombolytic effects ofcorilagin. Planta Med. 2003,69(12):1109-12.
38、Notka F. Meier GR, Wagner R. Inhibition of wild-type human immunodeficiency vires and reverse transcriptase inhibitor-resistant variants by Phyllanthus amarus, Antiviral Res,2003,58(2): 175-86.
39、Cheng JT, Lin TC, Hsu FL. Antihypertensive effect ofcorilagin in the rat. Can J Physiol Pharmacol. 1995,73 (10): 1425-9.
40、钟建平，祝桂琅，黄志荣，等．复方苦味叶下珠治疗慢性乙型肝炎的疗效研究，临床肝胆病杂志，2000，16(3)：186—187．
41、王荣国，林锐金。叶下珠复方胶囊合抗乙肝特异性转移因子治疗慢性乙型肝炎40例观察，实用中医药杂志，2003，19(3)：121—122．
42、黄孝全，姚德才，王洪京．叶下珠合剂加拉米夫定联合治疗慢性乙型肝炎80例临床研究，中国实验方剂学杂志，2003，9(6)：48—49．
43、宋允胜，郑步平，孙江伟，等．叶下珠肝片治疗脂肪肝34例临床疗效观察，山东医药，1999，39(6)：24．
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42、黄孝全，姚德才，王洪京．叶下珠合剂加拉米夫定联合治疗慢性乙型肝炎80例临床研究，中国实验方剂学杂志，2003，9(6)：48—49．
43、宋允胜，郑步平，孙江伟，等．叶下珠肝片治疗脂肪肝34例临床疗效观察，山东医药，1999，39(6)：24．