大豆卵磷脂的分析与精制方法研究
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摘要
本文在对大豆卵磷脂分析方法和提取方法进行综述的前提下，研究了大豆卵磷脂的分析和提纯技术。
经实验研究，确定了大豆磷脂的高效液相色谱—示差折光检测方法(HPLC—RI法)，分析条件如下：色谱柱为Waters Spherisorb~(?) S5W(5μm Silica)4.6×250mm硅胶柱；流动相为正己烷：异丙醇：水(1:4:1，v／v／v)；流速：0.8ml／min；柱温：35℃；示差折光检测器温度：35℃。用大豆PC标样采取外标法对产品进行定量。此条件下PC出峰时间为11min左右，各种磷脂成分可以较好的分离。
通过三种粗提方法的比较，确定了大豆水化油脚的粗提方法为：分别用10倍体积的工业丙酮一次性处理和10倍体积的95％工业乙醇分三次处理，搅拌，抽滤，最后将乙醇提取液合并，蒸干，即可得到PC含量在40～50％大豆磷脂粗提产物，PC收率在65％左右(大豆水化油脚PC含量按15％计算)。
另外还研究了大豆卵磷脂的精制方法：先将粗提产物经过硅胶柱层析，除去PE、LPC和SM等杂质，然后再经过氧化铝柱层析，除去杂质磷脂PI。硅胶柱层析实验条件如下：层析介质为80～120目粗孔Ⅱ号硅胶；洗脱液为石油醚(60～90℃)：乙醇：水=1：1：0.175(V／V)；最佳上样量为0.037g粗提产物／ml床层体积；上样浓度：0.275g粗提产物／ml洗脱液。氧化铝柱层析洗脱液为95％工业乙醇。
大豆磷脂粗提产物通过这种精制方法，可以得到PC纯度为94.51％的产品，柱层析阶段收率为90.88％。
In this text, we studied the separation, purification and determination technology of high purity soybean phosphatidylcholine.
A simple rapid and accurate quantitative method was established for the determination of lecithin by HPLC-RI in this research. Separation was obtained by using Waters Spherisorb S5W (5μm Silica) 4.6 X 250 mm silica column and mobile phase of n-hexane:2-propanol:water(l:4:l,v/v/v) with flow rate of 0.8ml/min. Under this condition, the retention time of PC was about 11 minutes. This method produced data which correlated well with data from the TLC-P method, and this data was highly accurate and exhibited satisfactory reproducibility.
The soy lecithin with 40-50% PC was obtained from soybean raw material by using acetone and 95% ethanol, the yield of PC in this process was about 65%.
High purity soybean phosphatidylcholine can be obtained in this method: first PE LPC SM, etc was separated from PC by silica column chromatography, then the product of silica column chromatography was treated by alumina column chromatogr-aphy, PI can be removed and product with 94.51% PC can be obtained. The yield of this process was 90.88%.
The mobile phase of silica column chromatography: mixed solvent of petroleum ether (60~90℃), ethanol and water(l:l:0.175); the mobile phase of alumina column chromatography :95% ethanol.
经实验研究，确定了大豆磷脂的高效液相色谱—示差折光检测方法(HPLC—RI法)，分析条件如下：色谱柱为Waters Spherisorb~(?) S5W(5μm Silica)4.6×250mm硅胶柱；流动相为正己烷：异丙醇：水(1:4:1，v／v／v)；流速：0.8ml／min；柱温：35℃；示差折光检测器温度：35℃。用大豆PC标样采取外标法对产品进行定量。此条件下PC出峰时间为11min左右，各种磷脂成分可以较好的分离。
通过三种粗提方法的比较，确定了大豆水化油脚的粗提方法为：分别用10倍体积的工业丙酮一次性处理和10倍体积的95％工业乙醇分三次处理，搅拌，抽滤，最后将乙醇提取液合并，蒸干，即可得到PC含量在40～50％大豆磷脂粗提产物，PC收率在65％左右(大豆水化油脚PC含量按15％计算)。
另外还研究了大豆卵磷脂的精制方法：先将粗提产物经过硅胶柱层析，除去PE、LPC和SM等杂质，然后再经过氧化铝柱层析，除去杂质磷脂PI。硅胶柱层析实验条件如下：层析介质为80～120目粗孔Ⅱ号硅胶；洗脱液为石油醚(60～90℃)：乙醇：水=1：1：0.175(V／V)；最佳上样量为0.037g粗提产物／ml床层体积；上样浓度：0.275g粗提产物／ml洗脱液。氧化铝柱层析洗脱液为95％工业乙醇。
大豆磷脂粗提产物通过这种精制方法，可以得到PC纯度为94.51％的产品，柱层析阶段收率为90.88％。
In this text, we studied the separation, purification and determination technology of high purity soybean phosphatidylcholine.
A simple rapid and accurate quantitative method was established for the determination of lecithin by HPLC-RI in this research. Separation was obtained by using Waters Spherisorb S5W (5μm Silica) 4.6 X 250 mm silica column and mobile phase of n-hexane:2-propanol:water(l:4:l,v/v/v) with flow rate of 0.8ml/min. Under this condition, the retention time of PC was about 11 minutes. This method produced data which correlated well with data from the TLC-P method, and this data was highly accurate and exhibited satisfactory reproducibility.
The soy lecithin with 40-50% PC was obtained from soybean raw material by using acetone and 95% ethanol, the yield of PC in this process was about 65%.
High purity soybean phosphatidylcholine can be obtained in this method: first PE LPC SM, etc was separated from PC by silica column chromatography, then the product of silica column chromatography was treated by alumina column chromatogr-aphy, PI can be removed and product with 94.51% PC can be obtained. The yield of this process was 90.88%.
The mobile phase of silica column chromatography: mixed solvent of petroleum ether (60~90℃), ethanol and water(l:l:0.175); the mobile phase of alumina column chromatography :95% ethanol.
引文
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4．王墨林、安红、陈志强等，大豆磷脂的系统研究与开发，精细化工，2001，18(1)；
5．迟尉杰、林淑英，卵黄卵磷脂提取与应用的研究进展，食品与发酵工业，2002，28(5)：50～53；
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13．钮竹安，大豆磷脂国内外市场和开发，粮食与油脂，1999(1)：33～37；
14．马辰、段宏瑾，大豆磷脂中磷脂类成分的含量测定，中国药学杂志，1999，24(11)：671～672；
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