摘要
目的
研究水蛭提取液对P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated proteinkinase,P38MAPK)介导的人视网膜色素上皮细胞(hRPE)跨膜信号转导途径的影响。
方法
(1)购买原代人视网膜色素上皮细胞,复苏后进行体外传代培养。
(2)根据前期实验数据,选择0.5NIHU/ml的凝血酶作为诱导浓度,64mg/ml的水蛭提取液作为药物浓度;水蛭提取液与凝血酶分别(或共同)孵育hRPE30分钟后,采用流式细胞术及免疫细胞化学方法检测孵育hRPE细胞内P38MAPK的表达。
结果
(1)根据各组的P38MAPK流式荧光量比较发现凝血酶组(6.4417±0.072)与正常对照组(5.4567±0.1825)相比,荧光量升高,有显著性差异(P<0.01),水蛭提取液组(4.4483±0.2015)与正常对照组相比,荧光量下降,有显著性差异(P<0.01),合药组(4.1433±0.068)与凝血酶组相比,荧光量下降,有显著性差异(P<0.01)。
(2)根据各组P38MAPK免疫细胞化学平均光密度值比较发现凝血酶组(1.195±0.0226)与正常对照组(1.055±0.0187)相比,OD值上升,有显著性差异(P<0.01),水蛭提取液组(0.7567±0.071)与正常对照组相比,OD值下降,有显著性差异(P<0.01),合药组(0.555±0.065)与凝血酶组相比,OD值下降,有显著性差异(P<0.01);
结论
水蛭提取液能抑制hRPE的增殖,其机制与P38MAPK介导的信号转导通路有关。
Objective
To research the influence of leech extract on human retinal pigment epithelial(hRPE) cell's signal transduction that is guided by P38 mitogen activated protein kinase.
Methods
(1) The primary human retinal pigment epithelial cell that was purchased was anabiosised and then cultured in vitro.
(2) Based on the previous experiments, 64mg/ml leech extract and 0.5NIHU/ml thrombin were used to incubation hRPE 30minutes.The expression of P38MAPK was measured by flow cytometry and immunocytochemistry.
Results
(1)The fluorescence expression of P38MAPK display: thrombin group(6.4417±0.072) compared with normal control group(5.4567±0.1825),the fluorescence quantity increased(P<0.01);leech extract group(4.4483±0.2015) compared with normal control group,the fluorescence quantity decreased(P<0.01);added leech extract and thrombin at equal pace(4.1433±0.068) compared with thrombin group, the fluorescence quantity decreased(P<0.01).
(2)The optical density (OD) value of P38MAPK display: thrombin group (1.195±0.0226) compared with normal control group(1.055±0.0187),OD increased(P<0.01); leech extract group(0.7567±0.071) compared with normal control group,OD decreased(P<0.01);added leech extract and thrombin at equal pace(0.555±0.065) compared with thrombin group, OD decreased(P<0.01);
Conclusion
Leech extract can inhibit the proliferation of hRPE by P38 mitogen activeated protein kinase.
引文
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