摘要
实验目的:研究艾炷灸膻中、膈俞穴益气活血法预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤心肌细胞凋亡基因的影响。为临床防治心肌缺血-再灌注损伤提供新的思路和方法。
实验方法:通过结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)造成心肌缺血再灌注模型,取心脏进行心肌病理学观察,免疫组化法测caspase-3、bcl-2、bax、fas、TNF-α及NF-_kB蛋白表达。
实验结果:
(1)心肌缺血-再灌注损伤后心肌细胞数量减少,细胞直径变小,细胞体积变小。艾炷灸膻中、膈俞穴益气活血法预处理可以使心肌细胞数量增多,细胞直径变大,细胞体积变大。
(2)凋亡标志因子caspase-3在心肌缺血再灌注损伤后表达增多,艾炷灸膻中、膈俞穴益气活血法预处理可降低其表达。
(3)抑凋亡基因bcl-2在心肌缺血再灌注损伤后表达减少,艾炷灸膻中、膈俞穴益气活血法预处理可使bcl-2表达增多。
(4)促凋亡基因bax和fas在心肌缺血再灌注损伤后表达增高,艾炷灸膻中、膈俞穴益气活血法预处理可使bax和fas表达降低。
(5)肿瘤坏死因子TNF-α在心肌缺血再灌注损伤后表达增多,艾炷灸膻中、膈俞穴益气活血法预处理可使TNF-α表达减少。
(6)诱发凋亡的核转录因子NF-_kB在心肌缺血再灌注损伤后表达增多,艾炷灸膻中、膈俞穴益气活血法预处理可使NF-_kB表达减少。
实验结论:艾炷灸膻中、膈俞穴益气活血法预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤起抑制作用。其作用可能通过降低caspase-3表达,增高bcl-2表达,降低bax和fas表达,减少TNF-α和NF-_kB表达来表现。
Objective:To study the effects of nourishing the Qi and remove the blood pretreatment by moxibustion on myocardial apoptosis induced by ischemia-reperfusion.
Methods:The left anterior descene coronary artery was ligated to establish the ischemia-reperfusion heart model in rat.
Immunohistochemical staining was used to detect the changes of apoptosis and protein expression of caspase-3、bcl-2、bax、fas、TNF-αand NF_(-k)B.Histopathological changes in myocardium was also observed.
Result:(1) The number and size of cardiomyocyte cell reduced after ischemia-reperfusion and increased by nourishing the Qi and remove the blood pretreatment of moxibustion.
(2) The expression of caspase-3 gene increased by ischemia-reperfusion and decreased by nourishing the Qi and remove the blood pretreatment of moxibustion.
(3) The expression of bcl-2 gene decreased by ischemia - reperfusion and increased by nourishing the Qi and remove the blood pretreatment of moxibustion.
(4) The expression of bax and fas gene inregulating after schemia-reper fusion and downregulating after nourishing the Qi and remove the blood pretreatment of moxibustion.
(5) The expression of TNF-αand NF_(-k)B increased by ischemiareperfusion and decreased by nourishing the Qi and remove the blood pretreatment of moxibustion.
Conclusions:Nourishing the Qi and remove the blood pretreatment by moxibustion had obviously preventive and therapeutic effects on reperfusion injury and could inhibit cardiomyocyte apoptosis.The mechanism might be that bcl-2 gene expression was increased,caspase-3 gene、bax gene、faa gene、TNF-αand NF_(-k)B were decreased following ischemia and reperfusion.
引文
1.杨彦玲,师养荣,李建龙等.心肌缺血再灌注损伤研究进展[J].心血管病学进展,2003,24(2):116-12l
2.张春芳,周亚滨,韩佳瑞等.益新胶囊对家兔急性心肌缺血模型细胞凋亡的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志,2003,1(8):459
3.周仲瑛主编,中医内科学,北京,中国中医药出版社,2003.1
4.卢艳翠.川芎嗪黄芪注射液并用气虚血瘀型胸痹心痛30例分析[J].中医药学刊,2004,22(3):534
5.陈俊文.略论冠心病的病机与治则[J].陕西中医,1996,17(9):407-408
6.郑国伟,陈少如,黄邦汉.舒心口服液治疗心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国中西医结合急救杂志,2002,7(3):165-167
7.韩明向,丁东,周宜轩.人参皂甙与川芎嗪合用对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国中医基础医学杂志,2000,6(1):17-21
8.唐旭东,姜建青,刘宝玉等.三七总皂甙对心肌缺血再灌注损伤保护作用的分子机制[J].安徽中医学院学报,2003,22(1):34-37
9.周苏宁,邵伟,张文高等.黄芪注射液配伍川芎嗪抗心肌缺血再灌注损伤的临床研究[J].中国中西医结合杂志,2000,20(7):504-507
10.史昕云,夏正远,方建国等.复方丹参注射液对心内直视手术心肌缺血再灌注后血清内皮素及前列环素/血栓素A2比值的影响[J].中国中西医结合杂志,2000,20(7):504-507
11.韩国杰,马增香,薛秀荣等.黄芪注射液对心肌梗死溶栓治疗再灌注的影响[J].中国中西医结合急救杂志,2000,7(2):107-108
12.刁利红.针刺内关为主治疗冠心病心绞痛临床观察[J].辽宁中医杂志,2003,30(8):667-568
13.王家恩.针刺治疗冠心病的临床研究[J].中国针灸,1987,7(2):5
14.刘富强.针刺对冠心病血流变学及血脂的影响[J].针灸学报,1989,5(2):5
15.吴华慧,王晓丽,张霁.针药结合治疗冠心病心绞痛的临床观察[J].针灸临床杂志,2005,21(12):21
16.赵艳玲,唐晨光,黄洁等.针药并用治疗冠心病心绞痛临床疗效观察及对血浆ET、cGRP 影响研究[J].中国针灸,2001,21(2):70-72
17.曹毅,王琳琳,胡燕明.针灸配合中药治疗冠心病30例[J].牡丹江医学院学报,1994,15(1):59-60
18.Schulze CJ,Wang W,Kunari R,et al.lm balance between tissue inhibitor ofmetalloproteinase-4 and metalloproteinases during acute correction of myocardial ischemia-reperfusion injury[J].C ir'culation,2003,107(19):2487"--2492
19.刘士廉,郑德先.细胞凋亡及其基因调控[J].基础医学与临床,1994,14(3):1-4
20.汪学军,董传仁.细胞凋亡与缺血再灌注损伤[J].国外医学生理病理学与临床分册,1997,17(1):32
21.Kawano H,Okada R,Kawano Y,et al.Apoptosis in acute and chronic myoearditis.J Clin Invest,1985,76:1713-1719
22.Yaoita H,Ogawa K,et al.Attenuation of ischemia reperfusion injury in rats by a caspase inhibitor.Circulation,1998,97(3):276
23.田素民.不同时段的心肌缺血后再灌注损伤与心肌细胞凋亡的实验研究[J].解剖学研究,2003,25,2:97-99
24.谢志泉,刘伊丽.细胞凋亡与缺血性心脏病[J].临床心血管杂志,1999,15(10):475
25.Fernade-Alnemri T,Litwack G,Alnemri ES,et al.CPP32,a novel human apoptotic protein with homology to caenrohabditis elegans cell death protein Ced-3 and mammalian interleukin-1 betaconverting enzyme.J Biol Chem,1994,269:30761
26.姜明,曹士奇,陈锁成等.caspase-3抑制剂对兔体外循环心肌细胞凋亡的影响[J].江苏大学学报(医学版),2007,17(3):205-208
27.Higuchi M,Aggarwal BB,Yeh ET.Activation of CPP 32-like protease in tumor necrosis factor-induced apoptosis is dependent on mitochondrial function[J].J Clin envest,1997,99(7):1751
28.病理生理学,第六版,金惠铭、王建枝主编,人民卫生出版社:142
29.Jiann SX,Sato l,Kuwao S,et al.Expression of bcl-2 protein is prevalent in small cell lung carcinomas[J].J Pathol,1995,177(1):135-138
30.lkenaki N,Katsumata M,Minna J,et al.Expression of bcl-2 in small cell lunn carcinoma cell lines[J].Cancer Res,1994,54(1):6-8
31.汪枫,胡永良,李永宏.大鼠急性心肌缺血再灌注Bcl-2蛋白的表达及其法医病理学意义[J].法医学杂志,2003,19(4):207-211
32.冯津萍,赵炳让,卢奕等.心肌缺血.再灌注是细胞凋亡及相关基因调控,天津中医,2002, 19(3):38-40
33.Zhao ZQ et ai.Ce!1,1993;75;241
34.Oltral,Melliman CL,Korsmeyer SJ,et al.Bal-2 heterodi merizes in vivo with a consered homdog,bax,that accelertes propramed cell death.Cell,lOO3,74(4):609.19
35.徐明,曾庆云,丁成萦.大鼠急性心肌缺血再灌注的心肌细胞凋亡研究[J].解剖学报,2002,33(2):180-184
36.周艳玲,徐明,张玉芹等.大鼠急性心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax蛋白的表达[J].武警医学,2001,11,3:131-134
37.丁延峰,张蔓蔓,张爱子.缺血/再灌注所致心肌细胞凋亡的综合检测[J].河北医科大学学报,2002,21(3):129-132
38.Nagata Set al.Science,1995;267:1449
39.Yue TL,Wang X,et al.Possible involvement of stressactivated protein kinase signaling pathway and Fas receptor exepression in prevention of ischemia/reperfusion-induced cardiomyocyte apoptosis by carvedio[J].Circ Res.1998.82:163/174
40.徐强,司良毅,张红.大鼠心肌再灌注不同时相Fas表达和半胱胺酸蛋白酶_3活性变化规律[J].中国临床康复,2004,8(27):5828-5829
41.赵明中,陈运贞,李嫒嫒等.大鼠心肌缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡与fas、fasL基因表达的变化[J].中华心血管病杂志,2001,29(10):605-608
42.徐少东,马礼坤,屈朝法等,犬急性心肌梗死晚期再灌注对心肌Fas/FasL系统的影响及其可能的氧化应激机制[J].中国病理生理杂志,2007,23(2):307-310
43.Parrillo J E,Butch C,Shelhamer JH et al.A circulation myocardial depressant substance in human with septic shock.J Clin Invest,1985;76:1539-1553
44.陈红,连林,陈力.肿瘤坏死因子和心脏疾病中国药理学通报[J].2001,8,17(4):380-382
45.刘丽乔,章洁,杨晓红等.川芎嗪对严重烧伤大鼠心肌细胞凋亡的影响[J].江西医学院学报,2007,47,5:9-13
46.唐旭东,贷常文.核因子NF-_κB与心肌缺血再灌注损伤[J].西南国防医药,2001,11(4):296-298
47.张弧峰,王骏飞,蒋青.NF-_κB信号转导途径与炎症性疾病,国际免疫学杂志,2007,9,5: 288-291
48.汪永义,薛松,萧明第等.NF-_κB激活在大鼠心肌细胞缺血-再灌注损伤中的意义[J].中国胸心血管外科临床杂志,2004,5,(11):127-130
49.梁煜,林代华,王清.气虚血瘀是冠心病的病机关键释义[J].中医药学刊,2003,21(4):588,599
50.何建成.老年冠心病中医药治疗再思考[J].中医研究,1999,12(2):5-7
51.罗永芬.腧穴学[M].上海科学技术出版社,2001,46
52.周玮,朱建萍.针刺治疗冠心病心绞痛临床疗效观察[J].针灸推拿,2007,7:31-32
53.罗永芬.腧穴学[M].上海科学技术出版社,2001,149
54.蔡国伟.膈俞穴位注射川芎嗪对冠心病血液流变学的影响[J].中国针灸,1999,19(1):1
55.谢莉莉,刘光谱.艾灸的治疗作用和机理研究进展[J].针灸临床杂志,2000,5:55-57
56.丛越鹏,许广里.艾灸膈俞穴治疗气滞兼胃寒型呃逆1例[J].吉林中医药,2007,27(5):45
57.石学敏.针灸学[M].天津:中国中医药出版社,2002.
1.孔灵芝.慢性非传染性疾病的流行现状、发展趋势及防治策略.中国慢性病预防与控制,2002,10(1):1-2,9
2.伍佩仪,吴海翔.某些感染因子与冠状动脉粥样硬化性疾病的关系.湖北预防医学杂志,2003,14(2):18-19
3.王启才主编《针灸治疗学》,新世纪全国高等中医药院校规划教材,中国中医药出版社,2003年1月第一版:83
4.刁利红.针刺内关为主治疗冠心病心绞痛临床观察[J].辽宁中医杂志,2003,30(8):667-668
5.熊芳丽,肖亚平,黄慧.针灸治疗冠心病心绞痛130例[J].上海针灸杂志,2000,19,(4):18
6.刘光亭.巨刺内关穴对冠心病病人左心功能的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志,2005,7(7):594,595
7.王霭平.针灸减少胸痹心痛再发作25例[J].Chinese Acupuncture&Moxibustion,2004,10:712
8.周仲瑛主编《中医内科学》,中国中医药出版社,2003年1月第一版:146-148
9.胡德胜,郭伟星,于杰.心血管疾病活血化瘀论治[J].中西医结合心脑血管杂志,2006,4(1):66-67
10.曲少华,许德云.中药针剂治疗冠心病概况[J].中医研究,2006,2(19):2
11.袁中君,于淼.针药结合治疗冠心病心绞痛临床观察[J].辽宁中医学院学报,2002,12(4):306
12.吴华慧,王晓丽,张霁.针药结合治疗冠心病心绞痛的临床观察[J].针灸临床杂志,2005,21(12):21
13.赵艳玲,唐晨光,黄洁,刘剑勇,王群.针药并用治疗冠心病心绞痛临床疗效观察及对血浆ET、cGRP影响研究[J].中国针灸,2001,21(2):70-72
14.曹毅,王琳琳,胡燕明.针灸配合中药治疗冠心病30例[J].牡丹江医学院学报,1994,15(1):59-60
15.梁春雨,盛丽娟.针药结合治疗冠心病心绞痛46例临床观察[J].针刺研究,1998,4:303-305
16.苑志军,艾炳蔚.针药结合治疗冠心病临床观察[J].甘肃中医学院学报,1999,6(2):41-42
17.吕梅,王玲玲.针药结合的临床应用及机理研究概述(之一)[J].针灸临床杂志,2004,5(20):59-61
18.绕洪.对针药结合作用的探讨[J].河南中医,2003,10(10):10,11
19.成泽东,陈以国,张利泰.针刺对大鼠体内中药成分趋向性影响的实验研究[J].中国针灸,2002,22(1):51-53
20.胡玲,李梦,陈卫华,等.针刺合独参注射液对实验性家兔急性心衰竭心肌力学参数影响[J].安徽中医学院学报,2000,19(6):33-34
21.王威.针灸与中药协同作用的合理性[J].Chinese Acupuncture&Maxibustion,2004,4:296