摘要
本文的目的是研究健脾止遗片的有效成分，分离纯化得到有生物活性的、纯度较高的组分，分析其理化性质、探讨活性组分对动物膀胱明胶酶活性的影响。明确健脾止遗片有效成分的组成，为改进该药生产工艺、减少服用剂量提供科学的实验依据，为临床应用研究及尿失禁的发病机理研究提供必要的物质基础。
健脾止遗片是国家批准的用于治疗小儿遗尿症的中成药，主要成分是鸡肠和鸡内金，经动物急性毒性和慢性毒性实验证实无任何毒性及不良反应。临床已应用十几年，取得了良好的效果。该药虽批准用于小儿遗尿症，但近些年，不少中老年尿失禁患者使用，也取得满意效果。由健脾止遗片的基础研究得知，显示生物活性的组分主要来自鸡肠提取物，鸡肠用于治疗尿失禁，我国许多古代中医药书籍如《本经》、《别录》、《本草纲目》等都有记载，但有效成分是什么?一直未见详细报道。
本课题参照健脾止遗片的生产工艺，以新鲜鸡肠为原料，经水提取制得提取物，该提取物分别在一定条件下用甲醇和水进一步提取，得到甲醇提取物和水提取物。甲醇提取物依次用Sephadex G-10及CM Sephadex C-25柱层析分离纯化，水提取物依次用CM Sephadex C-25及Sephadex G-25柱层析分离纯化，采用生物活性检测的方法跟踪分离纯化过程，对所得活性组分通过紫外检测、薄层、电泳、质谱、氨基酸分析等技术进行了理化性质测定。
The purpose of this study is to investigate the effective components of Jianpizhiyi tablet, separate and purify these effective components, determine its physical and chemical properties, and analyze their effects on the activity of animal gelatinases. The identifying of the effective components of Jianpizhiyi tablet, will provide the scientific experimental evidences for improving the production techniques of this medicine, and decreasing the dosage when patients take this medicine. It also provides some insights into the clinical application research and the study of the pathogenesis of urinary incontinences. Jianpizhiyi tablet is a Chinese traditional patent medicine, approved by the State Food and Drug Administration of China, for the management of nocturnal enuresis (NE), commonly known as bed-wetting, in child patients from five to nine years old. The main compositions of Jianpizhiyi tablet are chicken intestine and corium stomachium galli. After the clinical application for more than ten years, it has been proved as an ideal drug for treating NE. Although the drug was approved for child bed-wetting, in recent years it also has been used for treating urinary incontinence in many elderly people. The other studies of Jianpizhiyi tablet showed that its biological active components mainly came from the extractive of chicken intestines. Chicken intestine have been used to treat urinary incontinences long before, as was recorded in many ancient Chinese medical literatures, such as
引文
[1] 罗新．尿失禁的社会卫生经济学问题[J]．实用妇产科杂志，2003，19(2)：68-69．
[2] Schulman SL, Strokes A, Salzman PM. The efficacy and safety of oral desmopression on children with primary nocturnal enuresis[J]. J Urol, 2001, 166: 2427-2431.
[3] Yeung CK. Nocturnal enuresis(bed wetting)[J]. Current Opim Uml, 2003, 13: 337-343.
[4] 逢健，赵丽嫣．尿失禁的分类标准及压力性尿失禁的诊断[J]．实用妇产科杂志，2003，19(2)：71-73．
[5] 徐虹，曹琦．儿童遗尿症病因病机的研究和治疗进展[J]．中国中西医结合杂志，2003，23(10)：792-794．
[6] 吕胜启，张杰．老年性尿失禁[J]．世界临床药物，2003，24(11)：672-676．
[7] 李炎唐．泌尿外科高科技[M]．北京：军事医学科学出版社，1998，172-173．
[8] Skoog SJ, Stokes A, Turner KL. Oral desmopressin: a randomized double blind placebo controlled study of effectiveness in children with primary nocturnal enuresis[J]. J Urol, 1997, 158: 1035-1039.
[9] Neveus T, Lickgren G, Stenberg A, et al. Sleep and night time behaviour of enuretics and non enuretics[J]. Br J Urol, 1998, 81 (3): 67-71.
[10] Ritting S, Kundsen UB,Sorensen S, et al. Abnormal diural rhythm of plasma vasopressin and urinary output in patients with enuresis[J]. Am J Phystol, 1989, 56: 663-671.
[11] Norgaard JP, Pedersen EB, Djurhuus JC. Diural antidiuretic hormone levels in enuretics [J]. J Urol, 1985, 134: 1029-1031.
[12] 杨霁云．小儿遗尿症临床诊治及研究的现状[J]．中华儿科杂志，2000，38：335-336．
[13] Natochin YV, Kuznetsova AA. Nocturnal enuresis: correction of renal function by desmopressin and diclofenac[J]. Pediatr Nephrol, 2000, 14: 42-47.
[14] Kuznetsova AA, Shakhmatova EI, Prutskova NP, et al. Possible role of prostaglandins in pathogenesis of noc-turnal enuresis in children[J]. Scand J Urol Nephrol, 2000, 34: 27-31.
[15] Nijman RJM, Butler R, Van Gool J, et al. Conservative management of urinary incontinence in childhood. In: Abrams P, casdozo L, Khoury S, et al Incontinence[M] 2nd ed Plymonth, Health Publication Ltd, 2002: 515-552.
[16] Loeys B, Hoebeke P, Raes A, et al. Does monosym ptomatic enuresis exist: A molecular genetic exploration of 32 families with enuresis in continence[J]. BJU Int, 2002, 90: 76-83.
[17] 陈碧玉．盐酸奥昔布宁合成研究[J]．天津药学，2001，13(2)：57-58．
[18] Nilvbrant L, Hallen B, Larsson G. et al. Tolterodine. A new bladder selective muscarinic receptor antagonists: preclinical pharmacological and clinical data [J]. Life Sci, 1997, 60(13P14): 1129-1136.
[19] Kumar Y, Prasad M. Process for the preparation of tolterodine[P]. US: 0249211, 2004-12-09.
[20] Greenfield SP, Fera M. The use of intravesieal oxybutynin chloride in children with neurogenic blander[J]. J Urol, 1991, 146: 532-534.
[21] Mammen M, Oare D. Therapeutic ureas [P]. US: 0054187, 2004-03-18.
[22] 吴士良．曲司氯铵治疗膀胱过度活动症的多中心临床研究[J]．中国新药杂志，2002，11(3)：227-229．
[23] 张海燕，陈桂英．治疗尿失禁的合成药物[J]．中国药物化学杂志，2005，15(3)：180-181．
[24] Graul A, Castaner J. Agent for irritable bowel syndrome agent for urinary incontinence muscarinic M3 antagonist [J]. Drugs Fur, 1996, 21 (11): 1105-1108.
[25] Cross PE, MacKenzie AR. Pyrrolidine derivatives[p]. US: 5096890, 1992-02-17.
[26] Graul AI, Mealy NE, Bayes M, et al. Annual update 2003: urologic drugs[J]. Drugs Fut, 2003, 28(4): 382-414.
[27] Caione P, Arena F, Biraghi M, et al. Nocturnal enuresis and daytime wetting: a multicentric trial with oxybutynin and desmopressin[J]. Eur Urol, 1997, 31 (4): 459-463.
[28] Muller D, Marr N, Ankerman T, et al. Desmopressin for nocturnal enuresis in nephrogenic diabetes insipidus[J]. Lancet, 2002, 359: 495-499.
[29] Muller D, Florkowski H, Chavez-Kattauk, et al. The effect of desmopressin on short-term memory in children with primary nocturnal enuresis[J]. J Uro, 2001, 166(6): 2432-2438.
[30] Smellie JM, Mcgrigor VS, Meadow SR, et al. Nocturnal enuresis: a placebo controlled trial of two antidepressant drugs[J]. Archives of Disease in Childhood, 1996, 75: 62-66.
[31] Isawa Hidetoshi, Hotei Yukihiko, Kasai Kiyoshi, et al. Crystals of hydroxynorephedrine derivatives [P]. US: 0242686, 2004-12-02.
[32] 马骏．遗尿症治疗新进展[J]．中国儿童保健杂志，2004，12(3)：247-249．
[33] 刘继兰，延汝谦．健脾止遗片的药效学研究山东医科大学学报[J]，1993，31(3)：201-203．
[34] 闫梅，段冶．健脾止遗片治疗小儿功能性遗尿121例[J]．中国民间疗法，2005，8：68-69．
[35] 田更存，王爱香等．健脾止遗片的临床应用[J]．首都医药[J]，1998，5(4)：33-32
[1] 刘继兰，延汝谦．健脾止遗片的药效学研究山东医科大学学报[J]，1993，31(3)：201-203．
[2] 田更存，王爱香，高萍．健脾止遗片的研制及应用[J]．山东医药工业，1997，16(5)：41-41．
[3] 中国药典[S]．2005版Vol Ⅱ．凡例X．
[4] 萧能，余瑞元，袁明秀等．生物化学实验原理和方法(第二版)[M]．北京：北京大学出版社，2005，368-369．
[5] 陈明，张荣．冬虫夏草中核苷及其碱基含量测定方法的研究[J]．中成药，1995，17(4)：40-41．
[6] 李建武，余瑞元，袁明秀等．生物化学实验原理和方法[M]．北京：北京大学出版社，2004，400-402．
[1] 田更存，王爱香，高萍．健脾止遗片的研制及应用[J]．山东医药工业，1997，16(5)：41-41．
[2] 刘继兰，延汝谦，卢文高等．健脾止遗片的药效学研究[J]．山东医科大学学报，1993，31(3)：201-203．
[3] 李建武，余瑞元，袁明秀等．生物化学实验原理和方法[M]．北京：北京大学出版社，2004，400-402．
[4] 李建武，余瑞元，袁明秀等．生物化学实验原理和方法[M]．北京：北京大学出版 社，2004，223-226．
[5] 陆志范，周全宝．赖氨酸的药用功能[J]．药学实践药杂志，1996，14(4)：255-257．
[6] 姚炜，库宝善，李中华等．L-赖氨酸对大鼠脑损伤的作用[J]．青岛大学医学院学报，2001，37(4)：283-284．
[1] 田更存，王爱香，高萍．健脾止遗片的研制及应用[J]．山东医药工业，1997，16(5)：41-41．
[2] 刘继兰，延汝谦，卢文高等．健脾止遗片的药效学研究[J]．山东医科大学学报，1993，31(3)：201-203．
[3] 李建武，余瑞元，袁明秀等．生物化学实验原理和方法[M]．北京：北京大学出版社，2004，400-402．
[4] 萧能，余瑞元，袁明秀等．生物化学实验原理和方法(第二版)[M]．北京：北京大学出版社，2005，264-267．
[5] 何忠效．生物化学实验技术[M]．北京：化学工业出版社，2004，175-180．
[1] 陈荣权，陈香美，崔世维等．明胶酶及其抑制物在衰老大鼠肾组织中的表达及意义[J]．中国老年学杂志，2004，24(2)：129-32．
[2] 蔡广研，陈香美，王兆霞等．MRL／lp r狼疮小鼠肾脏明胶酶表达随增龄变化及意义[J]．中华病理学杂志，2002，31(5)：434-5．
[3] 丁延波，杨渝珍，韩玲等．基质金属蛋白酶活性测定的改良底物胶电泳法[J]．同济医科大学学报，2000，29(1)：42-45．
[4] 李建武，余瑞元，袁明秀等．生物化学实验原理和方法[M]．北京：北京大学出版社，2004，264-267．
[5] 王玉玲，其木格．基质金属蛋白酶及抑制物在妇产科的应用[J]．国外医学妇幼保健分册，2005 16(3)：184-186．
[6] Lovejoy B, Hassell AM, Luther MA.Crystal structures of recombinant 19-kD human fibroblast collagenase complexed to itself[J]. Biochemistry, 1994, 33: 8207-8217.