摘要
近年来,中药及其制剂的毒性报道不断增多。中药引起的肝损伤为药物性肝损伤的四大常见原因之一。
实验目的：分别观察中药活性抗癌成分斑蝥酸钠、没食子酸、熊果酸对人正常肝细胞LO2的影响,为寻找有效的减毒增效拮抗剂提供线索。
实验方法：采用MTT法检测这三种抗癌活性成分对细胞的增殖抑制,倒置显微镜、荧光染色、电镜检测细胞形态学改变,吉姆萨染色检测细胞微核率,流式细胞术检测细胞凋亡率,western blot检测各用药组细胞内蛋白表达的变化。
实验结果：发现0.625μg/ml组、1.25μg/ml组、2.5μg/ml组斑蝥酸钠作用24h,对LO2细胞的抑制率分别为为9.1%、17.1%、23.9%；对SMMC-7721的抑制率分别为11.2%、23.5%、30.7%。荧光显微镜下0.625μg/ml组无明显改变,1.25、2.5μg/ml组LO2出现细胞染色体的断裂；吉姆萨染色后在光镜下计数0.625μg/ml组无明显改变,1.25μg/ml组微核率为46.0‰、2.5μg/ml组为52.2‰；0.625μg/ml组凋亡率为5.08%,1.25μg/ml为16.31%,2.5μg/ml组为21.86%,呈剂量依赖关系；电镜证实2.5μg/ml组出现细胞皱缩、表面微绒毛减少,线粒体肿胀、脊断裂,细胞内空泡增多,细胞核固缩碎裂,呈凋亡特征性改变。1.25ug/ml和2.5ug/ml组Caspase-3、Bcl-2含量下降,Bax升高,与阴性对照组相比有统计学意义(P<0.05),NFkb也有所升高,与阴性对照组相比无差异。熊果酸作用24h,12.5μmol/L组、25μmol/L、50μmol/L组对LO2细胞的抑制率分别为为5.4%,21.4%,49.8%,对SMMC-7721的抑制率分别为17.6%、36.1%、60.9%。荧光显微镜下50μmol/L组出现细胞核浓缩,亮度增高,形成弯月状,偏向细胞一侧,甚至出现细胞碎片及凋亡小体。流式结果显示细胞凋亡率为48.76%。没食子酸作用24h,各剂量组均对LO2和SMMC-7721细胞显示出增殖抑制作用,但是到72h后,对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用超过了对LO2细胞的增殖抑制。没食子酸作用24h后100μmol/L组细胞出现明显的形态学改变,细胞凋亡,凋亡率为12.53%,Caspase-3和P53的表达升高。
实验结论：斑蝥酸钠、熊果酸和没食子酸对肝癌细胞和正常肝细胞均有抑制作用。斑蝥酸钠对正常肝细胞的抑制低于对肝癌细胞的抑制；在中剂量时可引起正常肝细胞增殖抑制、细胞染色体的损伤和细胞的凋亡；斑蝥酸钠引起的细胞凋亡,可能与Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达的改变有关。熊果酸对正常肝细胞的抑制低于对肝癌细胞的抑制；熊果酸在25μmol/L时即可引起正常肝细胞增殖抑制,50μmol/L时不仅抑制肝细胞的增殖,还可以引细胞的凋亡；熊果酸引起的细胞凋亡,与Caspase-3蛋白的表达的改变有关。没食子酸给药给药72h后对对肝癌细胞的抑制才超过正常肝细胞的抑制；没食子酸100μmol/L时引起人正常肝细胞凋亡,考虑和P53及Caspase-3蛋白的改变有关。
In recent years,toxicity reported for traditional Chinese medicine and its preparation is increasing,traditional Chinese medjcine-induced liver injury,is one of the four common causes of drug-induced liver injury.
objective:To observe the traditional Chinese medicine actiVe anticancer ingredient djsodium cantharidinate,gallic acid,ursolic acid on normal human hepatocytes LO2.provide clues to find efffectiVe attenuated efficiency antagonist..
Methods:MTT assay of these three anticancer constltuents of cell proliferation inhibition. inverted microscope, fluorescent staining and electron microscopy to determine the morphological changes of cells,Giemsa staining to detect micro-nuclear rate,flow cytometry to measure the apoptosis rate,Western blot to determine the expression changes of proteins within the cells of each administration group.
Results:Found0.625μg/ml group1.25μg/ml group,the the2.5μg/ml grouUp cantharides of sodium for24hours,inhibition of LO2cells were9.1%,17.1%,23.9%；SMMC-7721,The inhibition rates were11.2%,23.5%,30.7%,respectiVely.No significant change in the nuorescence microscope0.625μg/ml group of1.25,2.5μg/ml group LO2cells chromosome breakage；Giemsa staining under light microscope counting0.625μg/ml group no significant changes in1.25μg/ml group of micro-nuclear rate of46.0‰,52.2‰2.5μg/ml group；0.625μg/ml apoptotic rate of5.08%and16-31%in1.25μg/ml the2.5μg/ml group21.86%,a dose dependent manner；electron microscopy confirmed that the2.5μg/ml group,cell shrinkage, surface microvilli,mitochondrial swelling,spinal fracture,intracellular vacuoles increased nuclei condensation and fragmentation,characterislic change was apoptosis.1.25ug/ml and2.5ug/ml groups of Caspase-3,Bcl-2content decreased,Bax increased with the negatiVe contro1group was statistically significant(P<0.05),NFkb increase slightly,with the negative contro1group Compared to no difference.Ursolic acid for24h,the inhibitory rate of12.5μmol/L group,25μmol/L,50μmol/L group LO2cells were5.4%,21.4%,49.8%inhibition of SMMC-7721rate of17.6%,respectively,36.1%,60.9%.50μmol/L group,nuclear condensation under a fluorescence microscope,the brightness increased,the formation of crescent-shaped,bias cell side,and even cell debris and apoptotic bodies.Streaming results showed that the apoptosis rate of48.76%.Gallic acid for24h,each dose group showed LO2and SMMC-7721cell proliferation inhibition,but affer72h,the inhibition of proliferation of SMMC-7721cells than LO2celJ proliferation inhibition.Gallic acid for24h,100μmol/L,group of cells appears obviOUS morphological changes of cell apoptosis rate was12.53%,elevated Caspase-3and P53 expression.
Conclusions:The cantharides sodium, ursolic acid and gallic acid on hepatoma cells and normal liver cells was inhibited. The cantharides sodium inhibition of normal liver cells is lower than the inhibition of hepatoma cells; in dose can cause inhibition of proliferation of normal liver cells, chromosome damage and cell apoptosis; the cantharides sodium caused cell apoptosis, which may and Caspase-3, Bcl-2and Bax protein expression related to the change. Ursolic acid inhibition of the normal liver cells is lower than the inhibition of hepatoma cells; ursolic acid can be caused by the normal liver cell proliferation inhibition at25μmol/L,50μmol/L not only inhibit the proliferation of liver cells, can also lead cells apoptosis; ursolic acid-induced apoptosis, Caspase-3protein expression changes related. Gallic acid administered administered72h after the inhibition of liver cancer cells more than the suppression of the normal liver cells; gallic acid100μmol/L, caused by human normal liver cell apoptosis, consider changes in P53and Caspase-3protein.
引文
[1]杨啸白,史录文.中成药及中药饮片使用安全性分析[J].中国药房,2012,(07)：650-652.
[2]刘栗言,刘思源,向梅,等.2007年至2009年我院中药注射剂不良反应报告分析[J].中国药业2011,(06)：54-55.
[3]崔筱莉,邱葵,崔筱燕.抗肿瘤中药不良反应浅析[J].中国中医药信息杂志,2002,9(11)：71-72.
[4]王青.药物性肝病[M].北京：军事医学科学出版社,2010.
[5]谭毓治.药物毒理学[M].北京：科学出版社,2010.
[6]刘国廉.细胞毒理学[M].北京：军事医学科学出版社,2001.
[7]李涛,江振洲,王涛,等.柴胡皂苷d对人肝细胞L-O2体外毒性机制探讨[J].中国临床药理学与治疗学,2007,(04)：396-400.
[8]吴刚,巫国谊,张建军,等.N-乙酰半胱氨酸抑制人肝细胞凋亡的实验研究[J].重庆医学2005,(01)：80-82.
[9]王加志.黄药子致肝毒性/配伍当归后减毒的亚细胞机制及毒性成分体外代谢研究[D]：黑龙江中医药大学,2009.
[10]苗明三.实用中药毒理学[M].上海：第二军医大学出版社,2007.
[11]李钟文.中药学[M].北京：中国中医药出版社,1993.
[12]杜友贵.有毒中药现代研究与合理应用[M].北京：人民卫生出版社,2003.
[13]杨仓良.毒药本草[M].北京：中国中医药出版社,1993.
[14]刘鲁明.肿瘤科中西医药物手册[M].北京：人民卫生出版社,2003.
[15]李雪飞.对中药的毒性的认识[J].中国伤残医学,2007,1 5(6)：73-73.
[16]张琦.十八反“半萎贝蔹芨攻乌”物质基础及毒性研究[D]：长春中医药大学,2010.
[17]李锋,程庆砾,董柯.对13例木通中毒导致急性肾功能衰竭的分析[J].中国中药杂志1999,24(7)：435.
[18]郜红利.导致中药不良反应的因素及预防[J].湖北民族学院学报：医学版,2005,22(3)：64-65.
[19]黄精送.药物性肝炎62例临床分析[J].内科,2011,(06)：578-579.
[20]张丽祥.抗结核治疗引起药物性肝炎56例临床分析[J].疾病监测与控制,2012,(01)：49-50.
[21]李志东.急性药物性肝病112例临床分析[J].内蒙古医学杂志,2011,(11)：1327-1328.
[22]杨洪英.69例药物性肝炎的临床分析[J].黑龙汀医药,2011,(05)：787-789.
[23]马琳,刘波.85例老年药物性肝炎患者临床分析[J].实用肝脏病杂志,2011,(01)：45-46.
[24]吴怡玲,李志伟.抗结核药物致药物性肝炎210例临床分析[J].实用临床医学,2011,(11)：22-24.
[25]尚兰琴,张洁,郝卫东.黄药子水煎剂灌胃对小鼠的肝毒性及其机制[J].北京大学学报(医学版： 2007,(02)：200-202.
[26]池肇春.加强慢性药物性肝病的防治[J].中西医结合肝病杂志,2007,(04)：193-195.
[27]中华人民共和国药典[M].北京,2010.
[28]李晓飞,侯晓晖,陈祥盛.芫菁斑蝥素对喉癌细胞和胃癌细胞的抑制作用[J].昆虫学报,2009,52(9)：946-951.
[29]张卫东,赵惠儒,阎影,等.斑蝥素诱导人肺癌A549细胞凋亡及其分子机制的研究[J].中华肿瘤杂志,2005,27(6)：330-334.
[30]胡和平,应康,吴红梅,等.基因芯片技术分析斑蝥素对肝癌细胞细胞毒作用的分子机制[J].第二军医大学学报,2003,(06)：645-649.
[31]张恒,李晓飞,陈祥盛.斑蝥素、斑蝥素酸钾及斑蝥素酸钠作用胃癌细胞的研究[J].山地农业生物学报,2011,30(1)：52-55.
[32]孙震晓,魏育林,赵天德,等.斑螯素及去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的细胞学研究[J].解剖学报,2000,31(1)：56-60.
[33]何太平,莫丽儿,梁念慈.斑蝥素诱导高转移卵巢癌细胞HO-8910PM凋亡的研究[J].中国药科大学学报,2005,36(2)：164-167.
[34]李伟,陈政,宗洋,等.斑蝥素对胰腺癌细胞系PANCI. CFPAC-1的凋亡诱导作用及机制研究[J].中华胰腺病杂志,2011,11(4)：255-258.
[35]王晓华,马萍,尹元琴,等.斑蝥素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖的研究[J].中国医科大学学报,2007,36(2)：201-202.
[36]崔东来,陈卫,姚希贤.斑蝥索及其衍生物治疗乙型肝炎及消化系肿瘤的研究进展[J].世界华人消化杂志,2008,16(5)：498-502.
[37]张茂芬,樊兰娟.斑蝥素乳膏加贞芪扶正颗粒治疗尖锐湿疣50例[J].浙江中医药大学学报,2009,33(6)：813-814.
[38]张宏,郑晓霞,杨秋红.斑蝥素乳膏抗宫颈HPV感染的临床疗效观察[J].中国妇幼保健,2010,25(14)：1998-1999.
[39]曾微丹,张志勇,杨宝东,等.斑蝥素及去甲斑蝥素对七种植物病原真菌的抑制作用[J].植物保护学报,2008,35(1)：63-68.
[40]刁绍东,王菁,顾明洁,等.天然源农药0.1%斑蝥素水溶剂的应用技术[J].农药,2003,42(8)：36-37.
[41]张志勇,袁锋,张兴,等.斑蝥素对菜蛾的毒杀作用研究初报[J].植物保护学报,1998,25(2).
[42]李晓飞,陈祥盛,侯晓晖.斑蝥素对6种害虫的毒杀作用[J].贵州农业科学,2008,36(3)：65-66.
[43]侯晓晖,陈祥盛,李晓飞.天然产物斑蝥素对两种稻飞虱的毒杀作用[J].湖北农业科学, 2008,47(3)：296-297.
[44]亢菊侠,胡祖庆,康克功.斑蝥素对粘虫胃毒机理的初步研究[J].杨凌职业技术学院学报2005,4(1)：4-5,11.
[45]唐伏秋,马姗.喜疗妥霜剂预防斑蝥素所致静脉炎的疗效观察[J].解放军护理杂志2005,22(1)：24-25.
[46]陆惠民.毒物分析[M].北京：警官教育出版社.
[47]李巧萍.斑蝥中毒37例观察与护理[J].健康大视野：医学分册,2006,14(1)：83-83.
[48]王觅柱,邬彩虹,孟宪梅.斑蝥中毒1例[J].国际消化病杂志,2009,(3)：232-232.
[49]凯维坤.斑蝥中毒1例报道[J].中国现代医生,2009,(32)：118-118,143.
[50]汤梦娟,刘虹,成梅初,等.斑蝥中毒致多器官功能损害一例报道[J].医学临床研究2005,22(10)：1494-1495.
[51]徐秋惠,赵新红.斑蝥中毒致多脏器功能衰竭死亡1例[J].现代医药卫生,2004,20(16)：1641-1641
[52]李蕴辉,李帆平,程文斌.斑蝥素中毒检验1例[J].刑事技术,2008,(2)：76-77.
[53]郭舜民,齐萍,林绥,等.斑蝥酸钠的合成[J].海峡药学,2009,21(1)：88-89.
[54]Huland E, Huland H. Local continuous high dose interleukin 2:a new therapeutic model fo thetreatment of advanced bladder carcinoma[J]. Cancer Res,1989,49(19):5469-5474.
[55]Wang GS. Medical uses of mylabris in ancient China and recent studies[J]. J Ethnopharmacol 1989,26(2):147-162.
[56]刘春霞,马建国.斑蝥酸钠对膀胱癌EJ细胞株毒性作用的研究[J].江苏大学学报：医学版2010,20(5)：395-397,407.
[57]刘展华,曹洋,陈锐深,等.斑蝥酸钠对人肺癌LAC细胞增殖的抑制作用[J].中药新药与临床药理,2008,19(1)：32-33.
[58]梁枫,王明艳.斑蝥酸钠的研究进展[J].江西中医学院学报,2006,18(1)：67-68.
[59]魏索菊,时爱春.斑蝥酸钠维生素B6注射液对人白血病K562／AO2细胞的逆转作用及机制的研究[J].中华肿瘤防治杂志,2007,14(16)：1220-1222.
[60]魏素菊,时爱春.斑蝥酸钠逆转K562/AO2细胞多药耐药的机制初探[J].实用肿瘤杂志2007,22(5)：401-404.
[61]陈武进,廖斌,陈禹略,等.斑蝥酸钠联合介入治疗原发性肝癌临床观察[J].新疆中医药2004,22(3)：13-15.
[62]易受南,孙骏奇.去甲斑蝥酸钠增加白细胞机理初探[J].湖南医学院学报,1988,(04)：327-330.
[63]庞杰,曹洋,陈锐深.斑蝥酸钠维生素B6注射液作用肝癌H22的实验研究[J].实用肿瘤杂志2010,25(6)：693-697.
[64]刘义冰,魏素菊,苑素云.斑蝥酸钠维生素B_6注射液抗肿瘤的免疫调节作用[J].实用临床医药 杂志,2009,13(12)：56-57.
[65]殷飞,姚树坤,蔡怀阳,等.斑蝥酸钠维B_6注射液对肝癌患者肝纤维化指标及临床体征的影响[J].肝胆胰外科杂志,2009,21(4)：296-297.
[66]工昆,李飞,刘屏,等.我院住院病人65535例次中药制剂应用及不良反应报告分析[J].中国药物应用与监测,2010,(02)：97-99.
[67]唐世芳,朱蓉,时翠云,等.循证原理在预防斑蝥酸钠维生素B_6所致静脉炎中的应用[J].护理研究：上旬版,2011,(9)：2303-2304.
[68]王玉文,葛建文,张联丽,等.斑蝥酸钠维生素B_6致过敏反应一例[J].临床误诊误治,2011,(02)：10.
[69]余前锋.口服斑蝥酸钠引起休克死亡一例[J].云南中医杂志,1985,(02)：37.
[70]卢宝廉,张玉华.斑蝥酸钠在小鼠体内抗癌作用的研究[J].药学学报,1980,(02)：78-80+130.
[71]房德芳.斑蝥酸钠体外抗肝癌的实验研究[D]：南京中医药大学,2007.
[72]熊果酸抗肿瘤作用及其机制的研究[D].
[73]李希波,孙雪飞,尹秋伟,等.熊果酸体内抗肺癌作用机制探讨[J].山东大学学报(医学版),2007,(02)：188-191.
[74]谢艳茹,周月芬.熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究[J].中西医结合肝病杂志,2011,(03)：154-155+172+193.
[75]王琼,陈建军,向谨逸.熊果酸对人胃癌细胞株MGC-803的抑制作用及其机制[J].山东医药,2007,(27)：30-31.
[76]沈岚,谭洁.熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡与凋亡相关基因的关系[J].实用诊断与治疗杂志,2006,(11)：784-786+860.
[77]陈波,盛玉文.熊果酸对膀胱癌5637细胞的作用研究[J].中国医学工程,2011,(05)：44-46.
[78]于丽波,王晶,马宝璋,等.熊果酸对卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响[J].四川大学学报(医学版),2010,(06)：986-988+1038.
[79]夏阳,苟欣.熊果酸诱导前列腺癌细胞株PC-3凋亡的实验研究[J].重庆医科大学学报,2009,(12)：1661-1665.
[80]孙亦明,李剑敏.熊果酸诱导A172脑胶质瘤细胞凋亡的初步研究[J].当代医学,2011,(16)：43-44.
[81]李剑敏,周国兴,宋海鹏,等.熊果酸对HL60细胞作用机制的初步研究[J].中国实用医药,2011,(15)：5-6.
[82]王静.熊果酸抗肿瘤作用研究进展[J].临床合理用药杂志,2010,3(6)：120-121.
[83]黄炜,吴其年,黄敏珊,等.五环三萜类单体诱导人乳腺癌细胞凋亡的研究[J].中华中医药学刊,2008,26(7)：1566-1568.
[84]米磊,张斌,王岩松,等.熊果酸对ACC-83增殖抑制和诱导凋亡的观察[J].口腔颌而外科杂志2010,(06)：389-393.
[85]季青,赵晓艳,胡玉娜,等.熊果酸对胃癌细胞中cofilin-1蛋白表达的影响[J].基础医学与临床2011,(02)：192-195.
[86]于丽波,孙文洲,王晶,等.熊果酸联合顺铂抑制卵巢癌生长的实验研究[J].现代肿瘤医学2009,(08)：1410-1412.
[87]赵晓艳,胡玉娜,康向东,等.熊果酸诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其作用机制初探[J].中国癌症杂志,2010,(02)：101-104.
[88]王辉,方全华,李海军.熊果酸诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡的作用及其机制[J].肿瘤基础与临床,2010,(02)：93-95.
[89]刘茜,刁路明,吕秀红.熊果酸对A549细胞增殖、凋亡的影响及其机制[J].肿瘤防治研究2006,(11)：802-804+849.
[90]王杰军,郭静,陈万生.熊果酸体外抑制血管形成的研究[J].第二军医大学学报2000,(11)：1071-1073.
[91]郭万松,周悦,孙任任,等.熊果酸对膀胱癌T-24细胞生长的影响[J].中国老年学杂志2011,(02)：269-270.
[92]于丽波,王晶,孙文洲,等.熊果酸对卵巢癌细胞黏附、运动和侵袭的影响[J].中国老年学杂志2010,(15)：2169-2170.
[93]袁志超,汪芳安,王慧溪,等.皱皮木瓜提取物增强体内免疫活性研究[J].武汉工业学院学报2007,26(2)：22-26.
[94]冯英杰,任会勋,袁育康,等.熊果酸免疫调节作用的初步研究[J].西安交通大学学报(医学版：2006,(06)：541-543.
[95]刘勇,李尧,李超,等.核因子-κB抑制剂熊果酸延长小鼠心脏移植物存活时间[J].武汉大学学报(医学版),2011,(01)：20-23.
[96]董兴高,颜玲,谢珞琨,等.熊果酸对活化T细胞功能的影响[J].湖北民族学院学报(医学版：2007,(02)：18-20.
[97]胡志芳,姜凤良.熊果酸对人外周血单个核细胞分泌Th1/Th2型细胞因子的影响[J].山西医科大学学报,2010,(09)：783-785.
[98]Safadi R, Friedman SL. Hepatic fibrosis--role of hepatic stellate cell activation[J]. MedGenMec 2002,4(3):27.
[99]Senoo H. Structure and function of hepatic stellate cells[J]. Med Electron Microsc,2004,37(1):3-15.
[100]Meng Y, Song Y, Yan Z, et al. Synthesis and in vitro cytotoxicity of novel ursolic acid derivatives[J Molecules,2010,15(6):4033-4040.
[101]戴颖,朱萱.熊果酸抗实验性大鼠肝纤维化作用机制的研究[J].江西医药,2008,43(5)：414-417,410.
[102]Ali MS, Ibrahim SA, Jalil S, et al. Ursolic acid:a potent inhibitor of superoxides produced in the cellular system[J]. Phytother Res,2007,21(6):558-561.
[103]张新华,朱萱.熊果酸药理学的最新研究进展[J].中国中西医结合杂志,2011,31(9)：1285-1289.
[104]欧阳灿晖,朱萱,张焜和,等.熊果酸对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和a-SMA表达的影响[J].世界华人消化杂志,2009,(22)：2237-2243.
[105]Shyu MH, Kao TC, Yen GC. Hsian-tsao (Mesona procumbens Heml.) prevents against rat liver fibrosis induced by CC1(4) via inhibition of hepatic stellate cells activation[J]. Food Chem Toxicol, 2008,46(12):3707-3713.
[106]吕靖峰,彭仁琇.熊果酸缓解酮康唑肝毒作用及机制[J].武汉大学学报(医学版),2006,(05)：609-612.
[107]Steinkamp-Fenske K, Bollinger L, Voller N, et al. Ursolic acid from the Chinese herb danshen (Salvia miltiorrhiza L.) upregulateseNOS and downregulates Nox4 expression in human endothelial cells[J]. Atherosclerosis,2007,195(1):e 104-111.
[108]王建梅,向敏,凌婧,等.熊果酸对DM大鼠主动脉血管NF-kB表达的影响[J].中药药理与临床,2009,25(1)：11-14.
[109]赵清,魏盟,赵炳辉,等.熊果酸对兔外周血内皮祖细胞数量和功能的影响[J].世界临床药物,2006,(12)：713-717.
[110]Lin Y, Vermeer MA, A TE. Triterpenic Acids Present in Hawthorn Lower Plasma Cholesterol by Inhibitinglntestinal ACAT Activity in Hamsters[J]. Evid Based Complement Alternat Med,2009.
[111]Azevedo MF, Camsari C, Sa CM, et al. Ursolic acid and luteolin-7-glucoside improve lipid profiles and increase liverglycogen content through glycogen synthase kinase-3[J]. Phytother Res,2010,24 Suppl 2:S220-224.
[112]刘志芳,田萌,马跃文,等.熊果酸和齐墩果酸对胰脂肪酶活性及构象的影响[J].时珍国医国药,2009,20(10)：2600-2602.
[113]刘双,王波.熊果酸对血管紧张肽Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响[J].医药导报,2010,(12)：1556-1559.
[114]陈军,柳军,龚彦春,等.新型糖原磷酸化酶抑制剂熊果酸衍生物的合成及其生物活性[J].中国药科大学学报,2006,37(5)：397-402.
[115]Azevedo MF, Camsari C, Sa CM, et al. Ursolic acid and luteolin-7-glucoside improve lipid profiles and increase liverglycogen content through glycogen synthase kinase-3[J]. Phytother Res,2010,24 Suppl 2:S220-224.
[116]Jang SM, Yee ST, Choi J, et al. Ursolic acid enhances the cellular immune system and pancreatic beta-cell function in streptozotocin-induced diabetic mice fed a high-fat diet[J]. Int Immunopharmacol 2009,9(1):113-119.
[117]吴淑艳,张杰,朱德增.熊果酸对胰岛素抵抗大鼠糖代谢及肝脏葡萄糖激酶的影响[J].云南中医学院学报,2011,34(1)：20-24.
[118]张杰,吴淑艳,王琳,等.熊果酸对胰岛素抵抗大鼠肝脏组织PTP-1B,IRS-2mRNA表达的影响[J]江苏中医药,2010,42(4)：69-71.
[119]Zhou Y, Li JS, Zhang X, et al. Ursolic acid inhibits early lesions of diabetic nephropathy[J]. Int J Mo Med,2010,26(4):565-570.
[120]赵龙铉,赵德千,郑昌吉,等.熊果烷-12-烯-2β,3α-二醇-28β-酸的合成与表征及抑菌活性的研究[J].辽宁师范大学学报：自然科学版,2010,33(1)：82-85.
[121]古希波,熊鸿燕,张利军,等.一种植物消毒剂对空气中细菌的杀灭作用观察[J].中国消毒学药杂志,2009,(1)：46-48.
[122]Kazakova OB, Giniyatullina GV, Yamansarov EY, et al. Betulin and ursolic acid synthetic derivative; as inhibitors of Papilloma virus[J]. Bioorg Med Chem Lett,2010,20(14):4088-4090.
[123]Gerhauser C, Klimo K, Heiss E, et al. Mechanism-based in vitro screening of potential cancel chemopreventive agents[J]. Mutat Res,2003,523-524:163-172.
[124]Inoue M, Suzuki R, Sakaguchi N, et al. Selective induction of cell death in cancer cells by gallic acid[J] Biol Pharm Bull,1995,18(11):1526-1530.
[125]没食子酸抗肿瘤作用研究
[126]Folkman J. Tumor angiogenesis:therapeutic implications[J]. N Engl J Med,1971,285(21):1182-1186.
[127]Liu Z, Schwimer J, Liu D, et al. Black raspberry extract and fractions contain angiogenesis inhibitors[J] J Agric Food Chem,2005,53(10):3909-3915.
[128]Ohno Y, Fukuda K, Takemura G, et al. Induction of apoptosis by gallic acid in lung cancer cells[J] Anticancer Drugs,1999,10(9):845-851.
[129]李文,侯华新,吴华慧,等.没食子酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用及机制[J].山东医药2010,(15)：43-44.
[130]何文飞,何大维,马超,等.没食子酸抑制人神经母细胞瘤增殖作用的实验研究[J].第三军医大学学报,2011,(02)：107-110.
[131]王啸,赵安婷,邱树毅.抗氧化剂没食子酸的酶法转化生产研究[J].中国食品添加剂2010,(04)：188-190+237.
[132]没食子酸抗肿瘤作用研究进展[J].
[133]谢晓艳,刘洪涛,张吉,等.没食子酸体外抗氧化作用研究[J].重庆医科大学学报2011,36(3)：319-322.
[134]Inoue M, Suzuki R, Sakaguchi N, et aL Selective induction of cell death in cancer cells by gallic acid[J]. Biol Pharm Bull,1995,18(11):1526-1530.
[135]Yoshino M, Haneda M, Naruse M, et al. Prooxidant action of gallic acid compounds:copper-dependent strand breaks and the formation of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine in DNA[J]. Toxicol In Vitro, 2002,16(6):705-709.
[136]中药抗肿瘤有效成分药理与应用[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社,1998.
[137]安落白.没食子酸抗肿瘤作用研究[D]：吉林大学,2006.
[138]王伽伯,陈雷,王玉,等.RP-HPLC梯度洗脱测定叶下珠中没食子酸的含量[J].中草药,2005,36(1)：126-126,131.
[139]Koide T, Nose M, Inoue M, et al. Trypanocidal effects of gallic acid and related compounds[J]. Planta Med,1998,64(1):27-30.
[140]Nose M, Koide T, Morikawa K, et al. Formation of reactive oxygen intermediates might be involved in the trypanocidal activity of gallic acid[J]. Biol Pharm Bull,1998,21(6):583-587.
[141]张冬英,邵宛芳,刘仲华,等.普洱茶化学成分及体外对α-淀粉酶抑制作用(摘要)(英文)[J].农业科学与技术：英文版,2010,11(1)：130-132.
[142]张冬英,邵宛芳,刘仲华,等.普洱茶功能成分单体降糖降脂作用研究[J].茶叶科学,2009,29(1)：41-46.
[143]张海凤,董亚琳,张琰.没食子酸对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其降糖机制研究[J].中国药业,2011,20(21)：8-10.
[144]冯作化.医学分子生物学[M].北京：人民卫生出版社,2005.
[145]传良敏,黄文芳,饶绍琴,等.甘氨脱氧胆酸盐诱导人正常肝细胞株HL-7702凋亡过程中caspase-3,8活性与mRNA表达水平变化[J].重庆医科大学学报,2009,(10)：1338-1340.
[146]甄军丽,王维平,安立伟,等.戊四氮致痫后大鼠海马中Caspase-3和Hsp70的动态表达变化[J].中风与神经疾病杂志,2009,(06)：664-667.
[147]甄军丽.戊四氮致痫后大鼠海马中Caspase3和Hsp70的动态表达变化[J].神经病学,2010.
[148]田金飞(综述),韩继媛(审校).NFk-B存急性百草枯中毒中的表达及意义[J].医学综述,2011,17(7)：985-987.
[149]金惠铭.细胞分子病理生理学[M].河南：郑州大学出版社,2002.
[150]Cederbaum Al, Lu Y, Wu D. Role of oxidative stress in alcohol-induced liver injury[J]. Arch Toxicol, 2009,83(6):519-548.
[151]Roberts RA, Smith RA, Safe S, et al. Toxicological and pathophysiological roles of reactive oxygen and nitrogen species[J]. Toxicology,2010,276(2):85-94.
[152]Zelko IN, Mariani TJ, Folz RJ. Superoxide dismutase multigene family:a comparison of the CuZn-SOD (SOD1), Mn-SOD (SOD2), and EC-SOD (SOD3) gene structures, evolution, anc expression [J]. Free Radic Biol Med,2002,33(3):337-349.
[153]王君明,崔瑛,申玲玲,等.中药致药源性肝损伤的氧化应激机制研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(5)：247-249.
[154]李沐涵.山茱萸活性成分对肿瘤及衰老细胞模型影响初探[D]：南京中医药大学,2011.
[1]张成铭.大剂量生半夏治疗恶性肿瘤16例[J].辽宁中医药大学学报.2007,9(6)：108-109
[2]张民庆,陈华圣,许爱华等.涤痰祛瘀汤对小鼠肿瘤的抑制作用及其机制探讨.南京中医药大学学报,2001,17(4)：221-222.
[3]王明艳,许冬青,刘华东等.涤痰化瘀汤对人食管癌Eca-109细胞ras p21 P53基因表达影响的研究.中华中医药学刊,2009,27(3)：530531.
[4]袁伯俊,廖明阳,李波.药物毒理学实验方法与技术[M].北京：化学工业出版社,2007,294-295.
[1]李啸红,杨柳,姬可平等.中药紫草的遗传毒性研究[J].中国生育健康杂志,2003,14(3)：167-169.
[2]彭树新,李啸红等.桑寄生的遗传毒理学研究[J].中国优生与遗传杂志,2008,16(12)：46-48.
[3]刘冰,庞慧民,武广恒等.几味抗癌中药致突变性研究[J].白求恩医科大学学报,1999,25,(1)：8-9.
[4]宋俊斋,李家亿,杨念等.中药细辛的遗传毒性实验研究[J].中国药物警戒,2010,7(5)：262-264.
[5]刘萍,杜娟,于丽华等.狼毒大戟水提物对小鼠致突变作用的实验研究[J].山东医科大学学报,2000,38(1)：26-
[6]曹向宇,杨雷,宋尧等.生草乌及清蒸草乌遗传毒性检测分析[J].中国公共卫生2009,25(7)831-832.
[7]刘洋,李怡岚,胡利民等.合成冰片对沙门氏菌的诱变作用的观察[J].天津中药,2003,20(6)：61-63.
[8]金建玲,田骁,刘波等.用修正的Ames方法检验三棱水煎液的体外致突变性[J].中草药,2009,40卷增刊,220-224.
[9]Clements J,The Mouse Lymphoma Assay[J],Mutat Res,2000,455:97-110.
[10]Honma M. Momose M, Sakamoto H,et al. Spindle poisons induce allelic loss in mouse lymphoma cells through mitotic non-disjunction[J],MutatRes,1999,493:101-114.
[11]Miiller L, Kikuchri Y,Probst G,et al. ICH-Harmonised guidances ongenotoxicity testing of Pharmaceuticals:evolution, reasoning and impact [J],Mutat Res,1999,436:195-225.
[12]胡艳平,王欣,宋捷等.五味子水煎剂的遗传毒性研[J].究癌变畸变突变,2009,21(4)：0309-0312.
[13]胡艳平,王欣,宋捷等.杜仲水煎剂的遗传毒性研究[J].华西药学杂志,2009,24(5)：490-493.
[14]胡艳平,宋捷,王欣等,麦冬水煎剂的遗传毒性研究[J].中国中医药信息杂志,2009,16(7)：38-40.
[15]陆华,马康目,孙皎等Ames试验与MLA试验检测两味含马兜铃酸中药的致突变性[J].癌变畸变突变,2007,19(6)：0484-0486.
[16]马康目,陈灵.含马兜铃酸中药单方马兜铃及复方龙胆泻肝丸的体外遗传毒性研究[J].复旦学报,2007,46(6)：992-1000.
[17]Organization forEconomicCooperation andDevelopment(OECD).Test fuideline 474 OECD guideline for the testing of chemicals:mammalian erythrocytemicronucleus test[S]. Paris:OECD,2002.
[18]刘冰,庞慧民,武广恒等.几味抗癌中药致突变性研究[J].白求恩医科大学学报,1999,25,(1)：8-9.
[19]李啸红,杨柳,姬可平等.中药紫草的遗传毒性研究[J].中国生育健康杂志,2003,14(3)：167-169.
[20]董菊,唐萌,王姝.牛黄解毒片的遗传毒性研究[J].癌变畸变突变,2009,21(6)：0477-0478.
[21]金建玲,张辉,刘波.猫眼草水煎液体外致突变性的研究[J].中国药理学通报,2010,26(2)：263-266.
[22]陈逸青,刘从云,孙静等.淫羊藿总黄酮对丝裂霉素致小鼠骨髓细胞突变的保护作用[J].毒理学杂志,2008,22(5)：368-370.
[23]张新旺,杨建一,杜圣家等SCGE和染色体畸变分析用于遗传毒性检测的比较[J].山西医科大学学报,2008,39(3)：276-278.
[24]Fairbairn DW, Olive PL, O'Neill KL. The comet assay:acomprehensive review[J]. Mutat Res,1995, 339(1):37-59.
[25]刘斌,艾刚,岑小波等.关木通两种提取液对V细胞DNA的损伤作用[J].华西医学杂志,2003,18(1)：13～15.
[26]王金勇,王亚其,张建军.鸟头类中药对CHL细胞的DNA损伤作用[J].现代预防医学,2007,34(7)：1204-1206.
[27]董菊,詹臻,王明艳.彗星试验检测雄黄对中国仓鼠肺细胞DNA的损伤作用[J].上海中医药杂志,2009,43(3)：79-82.