摘要
目的
通过试验观察人结肠癌细胞(the human colon carcinoma cell line，Caco-2)对酸枣仁皂苷A(Jujuboside A，JuA)摄取与转运过程，探明JuA在Caco-2细胞模型中的吸收特性，为深入研究JuA的药理学作用机制提供理论和试验依据。
方法
① 建立并采用高效液相(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)方法检测JuA的浓度，评价Caco-2细胞吸收JuA的能力。
② 建立与评估Caco-2细胞模型，由于Caco-2细胞来源和培养条件差异，不同克隆Caco-2细胞之间增殖和生化特性不尽相同。即使在相同的培养条件下，细胞模型的某些生物物理和生化特征也会有一定的差异，所以各实验间的数据只具参考价值，不可直接套用。因此本实验室在Caco-2细胞模型建立之初对一些参数如光镜检查，电镜检查，跨上皮细胞电阻(transepithelial elect rical resistance，TEER)，葡聚糖的通透性等指标进行测定，以确证单层Caco-2细胞模型的特异性。
③ 通过MTT法了解不同浓度的JuA对Caco-2细胞的毒性作用。
④ 绘制培养时间-细胞药物摄取量曲线，考察时间对Caco-2细胞摄取JuA的影响，并同时考察pH、浓度及温度对Caco-2细胞摄取JuA的影响。
⑤ 研究P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)抑制剂维拉帕米(Verapamil，Ver)及代谢抑制剂叠氮化钠(Sodium azide)，2，4-二硝基酚(2，4-Dinitrophenol)对Caco-2细胞摄取JuA的影响，探讨JuA的吸收机制。
⑥ Caco-2细胞在Transwell上培养21天后，分别在顶侧(Apical，AP)和基底侧(Basolateral，BL)加入100μg·ml~(-1)的JuA，通过表观通透系数(Apparent permeability coefficient，Papp)的测定来探导JuA的转运机制。
OBJECTIVE
To explore the absorption and transport mechanism of JuA in human
intestinal by uptake and transport experiment in Caco-2 cell model and to offer the theoretics and experimental gist for lucubrate of pharmacological mechanism of JuA.
METHODS
① Establishing the HPLC analyse method for JuA.
② The establishment and evaluation of Caco-2 cell model:Because of the difference between source and culture condition, different Caco-2 cell line have different characteristic in multiplication and biochemistry. Even in the same culture condition, there are some difference between biology and bilchemistry, So the data of different laboratory only have reference worthiness, and they can not be apply mechanically. Thus we had determine some parameter such as normal microscope, transmission electron microscope, transepithelial elect rical resistance,the permeability of dextran before the establishment of Caco-2 cell model in order to insure the reliability of monolayer .
③ acquainting the toxicity of JuA on Caco-2 cell by MTT method.
④Seeing about the time, pH,concentration course for the uptake of JuA by Caco-2 cell, we protract the curve of culture time-uptake by Caco-2 cell. We also observe different pH、 concentration and temperature course for the uptake of JuA by Caco-2 cell.
⑤To study Verapamil, the inhibitor of P-glycoprotein (P-gp), Sodium azide and 2,4-Dinitrophenol ,the inhibitor of metabolism,course for the uptake of JuA by Caco-2 cell, and explore the absorption mechanism of JuA.
⑥Caco-2 were seeded on Transwell and grew for about 21 days for using,
引文
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