云芝子实体多糖和菌丝体多糖的分离纯化研究
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摘要
云芝,学名为彩绒革盖菌Corilus versicolor(L.ex Fr.)Quel,属多孔菌科革盖菌属的一种珍贵的药用真菌,现代植物化学及药理学研究表明云芝主要含蛋白质、脂肪、多糖、多糖肽、氨基酸及无机盐等成分,其主要活性成分是云芝多糖(Polysaccharide)或云芝糖肽(Polysaccharidiopeptide),云芝多糖具多种生理活性,可抑制肿瘤、提高免疫功能,保肝,抗溃疡等,对正常细胞基本没有毒副作用。临床上用于治疗慢性气管炎、慢性肝炎等疾病,还是一种新型的抗肿瘤免疫调节剂。
     本研究利用多种色谱技术及现代光谱、波谱技术,对云芝子实体多糖和云芝菌丝体多糖的分子量、组成、结构进行了较为系统的比较:经乙醇分级沉淀、DE-52纤维素柱层析、葡聚糖凝胶柱层析分离纯化,得到4个水溶性多糖组分,分别命名为CVP-a、CVP-b、CVP-c、PSP-a。本文分别采用HPGPC法分析纯度并测定其分子量,通过水解产物的TLC及衍生物的GC-MS确定其单糖组成,并经光谱及波谱数据分析(IR、~1H-NMR、~(13)C-NMR等)确定了糖苷键的类型。结果表明,四种多糖均由葡萄糖组成,其中CVP-a、CVP-b、CVP-c分子量分别约为1.5×10~4、1.2×10~4、1.1×10~4,均含β-糖苷键。PSP-a分子量为1.7×10~4,由α-糖苷键构成。
     本研究通过对云芝子实体多糖和云芝菌丝体多糖的系统比较,以保留时间为参照,初步建立了云芝多糖分子量测定的方法。经对不同浓度的醇沉淀物质进行考察,确定60%的醇沉部分,通过DE-52纤维素层析处理,高效凝胶色谱分析,已可初步区分不同厂家、不同品种的菌类多糖。此为以菌类多糖为原料及其产品——多糖类药物的质量控制提供了思路与方法。
Coriolus versicolor(L.ex Fr.) Quel is a traditional Chinese medicine and edible fungus which is a Polyporaceae fungus belonging to the Basidiomycetes. The modern Phytochemistry and Pharmacology research show that it contains many chemical compositions,such as protein,fat,polysaccharides(CVP), Polysaccharidiopeptide(PSP),dextran,lignin,amino acids and mineral salt,ect. The CVP or PSP are its active components.CVP or PSK with a wide range of physical activity,can inhibit the tumor and improve immune function,protect liver, anti-ulcer,and cause no toxic or side effects to normal cells.It is also a new anti-tumor immunoregulant.
     This research mainly focused on the molecular,component and structure characterization of Coriolus Versicolor Polysaccharide(CVP) and Coriolus versicolor mycelium polysaccharide(PSP) by means of many kinds of modern chromatograph and spectrum technologies.Four water-soluble homogeneous polysaccharides,named CVP-a,CVP-b,CVP-c and PSP-a were purified from Coriolus Versicolor Polysaccharide(CVP) and Coriolus versicolor mycelium polysaccharide(PSP) through grading precipitation with ethanol,DE-52 cellulose chromatography and gel-filtration chromatofraphy repeatedly.HPGPC was used to analyze their purity and determine their molecular weight(Mw).Thin layer chromatography(TLC),GC-MS,infrared spectrum(IR),and NMR were applied to analyze the configuration of glucose..It was showed by the HPGPC that each peak of the four fractions was a smooth balanced single one.So it was deduced that CVP-a,with Mw is about 1.5×10~4,CVP-b,with Mw is about 1.2×10~4 and CVP-c, with Mw is about 1.1×10~4,were all composed of glucose,meanwhile the configuration of glucose wasβ.And PSP-a,with Mw is about 1.7×10~4,was also a composition of glucose,but the configuration of glucose wasβ.
     This paper compared the Coriolus Versicolor Polysaccharide(CVP) and Coriolus versicolor mycelium polysaccharide(PSP) systematically.Methods of detecting the average molecular weight were established by means of HPGPC using the index of retention time.Precipitated with 60%ethanol,dealed with DE-52 cellulose chromatography and analyzed by HPGPC,CVP and PSP coming form different manufactories and variaties could be distinguished..The method brought up ideas and ways for quality control of Fungi polysaccharide drugs.
引文
[1]李玉主编.药用菌物学.吉林科技出版社,1996年,1版,45.
    [2]刘尚喜,李静.云芝多糖组分的分离、鉴定及生物学活性的初步研究.第一军医大学学报,1997.17(4):317.
    [3]雷鹏程,洪纯,余聪,等.云芝多糖药理作用研究进展.微量元素与健康研究,2006,23(2):53-54.
    [4]章红.抗癌中药大全.浙江科学技术出版社.2000.83.
    [5]陈海生,梁荣能.野生云芝中水溶性多糖的分离鉴定.解放军药学学报,2000,16(10):268-270.
    [6]杨晓彤,糜可,冯慧勤,等.不同云芝菌株及其提取工艺所得结合蛋白多糖的分析比较.中国医药工业杂志,2000.31(12).545-548.
    [7]范云鹏,李十中,刘冬梅,等.超滤法分离与纯化香菇多糖.中草药,2004,35(12):1357-1358.
    [8]李波,李江良,赵森,等.酶法提取香菇多糖工艺研究.食品科学,2007,28(09):274-277.
    [9]袁义涛,陈洪章.超微粉碎云芝子实体对云芝多糖提取的影响.中药材,2005,28(9):821-822.
    [10]冯婷,何聪芬,赵华.之舞多糖研究概况.北京工商大学学报(自然科学版),2004,2(5):1-4.
    [11]张惟杰.糖复合物生化研究技术.上海科技出版社,1987,212.
    [12]李亚清,杨海波,刘艳.螺旋藻多糖的提取分离纯化结构研究初步研究.海洋环境科学,2004,23(2):75-77.
    [13]陈谦,陈小明,蔡育军,等.南沙参多糖理化性质的研究.中药材,2002,25(1):25-26.
    [14]黄纯,马驰,宋慧智,等.亮菌多糖提取物中脱蛋白和脱色方法比较.药学与临床研究,2007,15(1):45-46.
    [15]黄桂宽,李毅.广西绿茶多糖的分离与分析.中国茶叶,1995,17(3):18-19.
    [16]余晓斌,尤蓉.云芝菌丝体多糖的分离纯化研究.天然产物研究与开发,2003,15(1):29-31.
    [17]张劲松,韩炜炜,潘迎捷.云芝子实体多糖(CVP)化学结构的研究Ⅲ.菌物系统,2001,20(4):531-535.
    [18]查娟,刘坐镇,邬行彦.云芝糖肽的硼酸亲和色谱纯化,中国医药工业杂质,2003,34(2):66-69.
    [19]张志花,杨晓彤,方积年.云芝糖肽在高效液相凝胶柱上色谱行为的研究.色谱,1997,15(2):150-152.
    [20]邹巧根,王伟,宋喆,等.云芝糖肽的结构组成分析.中国药科大学学报,2004,35(4):371-373.
    [21]张喆,邹巧根,宋喆,等.云芝糖肽的单糖组成分析.中国药科大学学报,2001,32(2):137-140.
    [22]陈海生,梁荣能.野生云芝中水溶性多糖的分离鉴定.解放军药学学报,2000,16(10):268-270.
    [23]雷引林,王晓东,刘坐镇.亲和层析云芝糖肽.中成药,2001,23(1):8-10.
    [24]张劲松,韩炜炜.云芝子实体多糖(CVP)化学结构的研究(Ⅰ).药学学报,1996,3(2):28-30.
    [25]董群,方积年.寡糖及多糖甲基化方法的发展现状.天眼产物研究与开发,1995,7(2):60-65.
    [26]陆德培,黄克武,李荣春.糖的高效液相图谱分析研究.生物化学与生物物理学报,1982,14(5):501-506.
    [27]陶乐平,丁在富,张郭昌.气相色谱在多糖结构测定中的应用.色谱,1994,12(5):351.
    [28]焦佩平,方积年.女儿茶多糖NLC-A的分离纯化及化学结构.药学学报,1989,24(5):353.
    [29]Bradrury J H,Jenking G A.Determination of the structures of trisaccharides by ~(13)C-NMR spectroso-copy.Carbohydrate Research,1984,12(6):125.
    [30]严琳,方一苇.单糖立体异构体的测定.正丁基硼酸衍生物的快原子轰击质谱.化学学报,1988,46:1001-1006.
    [31]来鲁华,杨星婷.寡糖的构象分析.生物化学与生物物理进展,1995,22(4):290-294.
    [32]缪平,贺峰,金声.罂粟花粉中阿拉伯半乳聚糖的结构及园二色性的研究.高等学校化学学报,1994,15(3):379-382.
    [33]梁忠岩,张翼伸,苗春燕.树舌多糖CF2a溶液中构想行为研究.生物化学与生物物理学报,1994,26(4):411-416.
    [34]方积年.硫酸酯化多糖的研究进展.中国药学杂志,1993,28(7):393-395.
    [35]过一敏.云芝糖肽对晚期恶性肿瘤的治疗作用.镇江医学院学报,2000,10(2):229-231
    [36]刘瑞,候亚义,张韦云,等.云芝子实体提取物的抗肿瘤作用研究.医学研究生学报,2004,17(5):413-415.
    [37]刘燕,林瑞超,李波.云芝多糖抗肿瘤作用研究进展.中成药,2001,23(10):752-757.
    [38]梁中琴,王晓霞.云芝糖肽抗肿瘤的实验研究.苏州医学院学报,1999,19(7):763-765.
    [39]Ishihara,y.,Fuj,T.,Ijima,H.,Ssito,K.The role of neutrophils as cytotoxic cells in lung matastasis:Suppresion of tumor sell metastasis by a biological necponse modifer(PSK),In Vivo.1998,22(2),175.
    [40]Kamei,H.,Hashimoto,Y.,Koide,T.,Kojima,T.Direct tumor group suppressive effect of melanoidin extracted from immunomodulator-PSK,Cancer Biother.Radiopharm.1997,12(5),341.
    [41]刘尚喜,周玫,赵明,等.云芝多糖增强小鼠腹腔巨噬细胞SeGSHPx基因的初步研究.第一军医大学学报.1993,13(4):291-294.
    [42]庞战军,陈瑗,周玫.云芝多糖对巨噬细胞GPx基因表达的影响.生物化学与生物物理学报,1999,31(3):284-288.
    [43]王瑾,陈瑗,周玫.云芝多糖对巨噬细胞氧化LDL的抑制作用与iNOS基因表达.第一军医大学学报,1999,19(4):292-295.
    [44]庞战军,陈瑗,周玫.云芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞锰超氧化物歧化酶基因表达的调控.中国动脉硬化杂志,1999,7(2):106-109.
    [45]庞战军,陈瑗,周玫.云芝多糖增强巨噬细胞M-CSF的表达与分泌.免疫学杂志,1999,15(4):245-248.
    [46]庞战军,陈瑗,周玫.腹腔注射云芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮的影响,1999,7(2):155-157.
    [47]徐嘉红,邓文龙.云芝的益气解毒作用研究.中药药理与临床,1997,13(6):23-27.
    [48]于淑琴,闫淑新.云芝多糖对慢性乙肝的疗效观察.辽宁药物与临床,1999,2(3):12-13.
    [49]宋子贤,梁世文.云芝糖肽胶囊治疗慢性乙型肝炎临床观察.广西医药,2000,22(6):1424-1426.
    [50]莫永炎,陈瑗.云芝多糖对脑、肝组织的抗氧化作用研究.中国药理学通报.2001,17(6):628-631.
    [51]Kariya,K,Nomoto,K.,Nakamura,K.,Shu,D.G.,Kobayashi,Y.Oxidative stress relief for patients by deribatives of chlorophy with SOD-mimicking activity,Int.Congr.ser.-Excerpata med.,1992,998,695.
    [52]滕爱芬,张玉英,顾振伦,等.云芝糖肽镇痛作用的研究.中国药学杂志.1996,31(10):591-594.
    [53]殷伟品,龚珊,蒋星红,等.云芝糖肽的镇痛作用及其机理的初步分析.中成药,2002,24(1):41-43.
    [54]梁永能,陈小君.云芝提取液对辐射的防护作用研究.中草药,1999,30(8):611-612.
    [55]南凤仙,邵伟.云芝多糖对小鼠抗衰老作用的研究.宁夏大学学报(自然科学版),2005,26(3):264-267.
    [56]孙晓波,云芝多糖分离、纯化、药理活性及其作用机制研究.博士论文.
    [57]赵继鼎.中药真菌志(第三卷)[M].北京:科学出版社,1998.
    [58]雷载权.中药学[M].上海:上海科学技术出版社,2001.
    [59]顾学裘,顾茂瑜.抗衰老、抗癌中药的研究及展望.北京:中国中医药科技出版社,1989.
    [60]董晓蓉.高效液相色谱法测定蔗糖铁注射液中蔗糖铁的分子量与分子量分布.药物鉴定,2006,15(4):19-21.
    [61]魏元安,方积年.高效液相色谱法测定多糖的纯度及分子量.药学学报,1989,24,(7):532-536.
    [62]多糖的分子量与分子量分布测定法.中华人民共和国药典二部2005版,附录VH,39:化学工业出版社,2005.
    [63]徐惠,于志洁.螺旋藻粘多糖的分离及其免疫学作用.中国生化药学杂志.1997,18(2):72.
    [64]田庚元,王晨.枸杞子糖蛋白的分离纯化、物理性质及糖肽键特征.生物化学与生物物理学报,1995,27(2):419.
    [65]方积年.多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定.药学通报,1984,19(10):46-49
    [66]中国药典2005年版二部[S].中华人民共和国国家药典委员会.附录VH;北京:化学工业出版社,2005.
    [67]马定远,陈君,李萍,等.柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中单糖组成.分析化,学,2005,30(6):702-705.
    [68]王展,方积年.高场核磁共振波普在多糖结构中的应用.分析化学,2000,28(2):240-247.
    [69]方宣钧.应用FRIR和NMR研究短梗酶多糖分子结构.中国生物化学与分子生物学学报,1999,15(1):109-113.
    [70]于德泉,杨俊山.核磁共振波普分析,化学化工出版社,1999:492-498.
    [71]丛浦珠主编.质 谱学在天然有机化学中的应用.化工大学出版社,1987:914-922.
    [72]S.C.Jeong,B.K.Yang,K.S.Ra,Ra,etal.Characteristics of anti-complementary biopolymer ectraceed from Coriolus verisicolor[J].Carbohydrate Polymers.2004,55:255-263.
    [73]张劲松,韩炜炜,潘迎捷.云芝子实体多糖化学结构的研究.药学学报,2001,36(9):664-667.
    [74]Christ9pher R.Hobbs.Medicine Value of Turkey Tail Fufues Tramete versicolor(L,:Fr) Pilat (Aphyllophoromycetideae).A.Literature Review.International Journal of Medicine Mushrooms,2004,6:195-218.
    [75]T.B.Ng.A Rewiew or Research on the protein -bound polysaccharide (polysaccharopeptide,PSP) from the mushroom Coriolus versicolor (Basidiomycetes:polyoraceae).Gen..
    [76]Ito H,HidataH,Sugiura M.Effects of coriolan,an antitumor polysaccharide,produced by Coriolus vericolor Iwade[J].Jpn J Pharmacol,1979,29(6):953-957.
    [77]腾海艳,张旭,王博,等.单色云芝多糖的结构研究.中国药学杂志,2007,42(14):23-26.