摘要
目的研究广西产何首乌提取物及结构修饰物对人卵巢癌细胞SKOV3侵润转移相关能力的影响,探讨单细胞培养体系与共培养体系在研究肿瘤侵润转移过程的作用。
方法(1)以MTT法检测大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物、没食子酸、卡铂对SKOV3细胞的生长抑制率,确定无细胞毒作用的药物浓度。(2)HE染色实验观察大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物、没食子酸、卡铂对人卵巢癌SKOV3细胞形态学改变的影响;(3)细胞划痕实验检测大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物、没食子酸、卡铂对人卵巢癌细胞SKOV3迁移运动能力的影响(4)MTT实验检测大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物、没食子酸、卡铂对人卵巢癌细胞SKOV3黏附能力的影响。(5)明胶酶谱法分析大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物、没食子酸、卡铂对人卵巢癌SKOV3细胞分泌的基质金属蛋白酶MMP-2 ,MMP-9的表达影响。(6)MTT法检测大黄素乙酰化产物、卡铂在条件共培养体系对SKOV3细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC的生长抑制影响。(7)HE染色实验观察大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物、没食子酸、卡铂在条件共培养体系中对人卵巢癌SKOV3细胞、人脐静脉内皮HUVEC细胞形态学改变;(8)细胞划痕实验检测大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物、没食子酸、卡铂在条件共培养体系中对人卵巢癌SKOV3细胞、人脐静脉内皮HUVEC细胞迁移运动能力的影响(9)明胶酶谱法分析大黄素乙酰化产物、卡铂在条件共培养体系对人卵巢癌SKOV3细胞分泌的基质金属蛋白酶MMP-2 ,MMP-9的表达影响。(10)统计方法。本文数据资料用x±s表示,用SPSS11.5软件统计。组间比较采用配对t检验,以P < 0. 05为有显著性差异, P < 0. 01为有非常显著性差异。
结果(1)MTT实验结果表明大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物、没食子酸、卡铂在一定浓度范围内对SKOV3细胞的生长抑制呈现浓度依赖性,其对SKOV3细胞无细胞毒作用(抑制率在10%左右)的各药物浓度分别为大黄素6.25μg/ml,大黄素甲基化产物6.25μg/ml,大黄素乙酰化产物6.25μg/ml,没食子酸10μg/ml,卡铂12.5μg/ml。
(2)HE染色发现无细胞毒浓度的大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物、没食子酸、卡铂作用SKOV3细胞后,除没食子酸组外,细胞数量减少、其中大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物组部分细胞胞浆出现的空泡化。其余各组无明显改变。
(3)细胞划痕实验表明划痕48h后,空白组细胞划痕基本愈合,各个药物组仍存在明显的窄痕,其中:大黄素甲基化、大黄素乙酰化、没食子酸组窄痕明显大于卡铂组。72 h空白组划痕完全愈合,大黄素甲基化、大黄素乙酰化没食子酸组仍存在窄痕。
(4)大黄素、大黄素乙酰化产物对SKOV3细胞的粘附能力均有不同程度的抑制作用(P<0.05),卡铂、大黄素甲基化产物和没食子酸对SKOV3细胞的粘附能力无抑制作用。
(5)经无细胞毒浓度的大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物及卡铂作用后,基质金属蛋白酶MMP-9的活性完全被抑制。基质金属蛋白酶MMP-2活性部分被抑制。
(6)采用条件培养基共培养体系,在实验浓度范围内,大黄素乙酰化产物和卡铂对细胞的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性。大黄素乙酰化产物对SKOV3细胞的抑制作用大于卡铂。其IC50分别为18.91μg/mL和79.67μg/ml.
(7)从细胞核、细胞浆、细胞膜、细胞的体积大小上看,与单细胞培养体系比较,共培养体系细胞未发生明显的形态学改变。
(8)划痕实验结果表明肿瘤微环境中可能存在抑制细胞迁移的物质。无细胞毒浓度的药物均可对细胞的迁移产生抑制作用,其中没食子酸、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物抑制作用均强于化疗药物卡铂。
(9)共培养体系的基质金属蛋白酶72KD、92KD的条带明显强于单细胞培养体系,表明肿瘤细胞微环境可促进基质金属蛋白酶的分泌,卡铂和大黄素乙酰化产物在该体系中均能抑制基质金属蛋白酶MMP-2的表达。
结论
1、无细胞毒作用浓度的没食子酸、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物能抑制人卵巢癌SKOV3细胞的运动迁移能力;大黄素、大黄素乙酰化产物能抑制人卵巢癌SKOV3细胞的粘附能力;没食子酸、大黄素、大黄素甲基化产物、大黄素乙酰化产物能抑制人卵巢癌SKOV3细胞的基质金属蛋白酶MMP-2 ,MMP-9的分泌。
2、条件共培养体系不仅能客观再现肿瘤细胞生长的微环境,也可应用于体外的药物筛选。
引文
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