二硫键的氧化还原状态对Trx融合赤霉酸诱导富含半胱氨酸蛋白内源荧光及变性过程影响

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• 出版年：2010
• 作者：张腾；冯娟；李阳；陈锐；汤丽霞；庞小峰；任正隆
• 单位1：电子科技大学生命科学与技术学院
• 出生年：1985
• 学历：硕士研究生
• 语种：中文
• 作者关键词：赤雷酸诱导的富含半胱氨酸蛋白；内源荧光；二硫键；变性
• 起始页：395
• 总页数：6
• 经费资助：国家自然科学基金项目（30730065，20973034）和（973计划）项目（2007CB936103）资助
• 刊名：光谱学与光谱分析
• 是否内版：否
• 刊频：月刊
• 创刊时间：1981
• 主管单位：中国科学技术学会
• 主办单位：中国光学学会
• 主编：黄本立
• 地址：北京市海淀区魏公村学院南路76号钢铁研究总院
• 邮编：100081
• 电子信箱：chngpxygpfx@vip.sina.com
• 网址：http://www.gpxygpfx.com
• 卷：30
• 期：2
• 期刊索取号：P342.06 220
• 数据库收录：物理类、化学类核心期刊
• 核心期刊：物理类、化学类核心期刊

摘要

在采用亲和层析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对原核表达的赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白（Trx-GcGASA）进行纯化、鉴定的基础上，运用稳态荧光光谱手段研究了二硫苏糖醇（DTT）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）、过氧化氢、盐酸胍（GdnHCl）对Trx-GcGASA内源荧光及变性过程的影响，发现（1）在中性缓冲体系中融合蛋白的内源荧光以305nm的酪氨酸的荧光发射为主；（2）伴随着二硫键还原，融合蛋白中色氨酸和酪氨酸的相对荧光强度比值从0.7变化至1.8倍左右；（3）经过0.5mmol·L^-1GSSG、5mmol·L^-1过氧化氢处理后，酪氨酸和色氨酸的荧光强度下降约12～21%；（4）无论是否采用1mmol·L^-1DTT处理，6mol·L^-1盐酸胍均不能诱导融合蛋白彻底变性；（5）二硫键的存在与否影响了盐酸胍诱导的变性过程。通过两态模型拟合获得Trx-GcGASA变性过程Gibbs自由能变化△G约为3.7kJ·mol^-1。相关工作不仅为深入研究融合伴侣Trx对GcGASA变性热力学、动力学及复性过程影响奠定了基础；同时，也为通过光谱手段获取GcGASA的结构信息提供了基础的数据。