肺炎链球菌疫苗候选蛋白PepO保护作用的研究

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• 论文作者：崔亚利 ; 张静 ; 江咏梅
• 年：2016
• 作者机构：四川大学华西第二医院检验科;
• 论文关键词：肺炎链球菌蛋白疫苗 ; PepO ; 粘膜免疫 ; 腹腔免疫 ; 免疫保护作用
• 会议召开时间：2016-09-09
• 会议录名称：第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编
• 语种：中文
• 分类号：R392
• 学会代码：WSWZ
• 会议名称：第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
• 会议地点：中国浙江宁波
• 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、医学参考报社、宁波大学、宁波大学医学院附属医院
• 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
• 页数：1
• 文件大小：46k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

目的评估肺炎链球菌疫苗候选蛋白内肽酶O(Endopeptidase O,PepO)对不同肺炎链球菌感染的保护作用。方法利用分子克隆技术,体外表达获得高纯度的肺炎链球菌PepO蛋白,目的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗-PepO抗体,Western Blot分析验证目的蛋白抗血清的特异性。将纯化的PepO蛋白经鼻腔粘膜和腹腔两种途径免疫BALB/c小鼠,构建不同血清型S.pn感染模型,评估其主动免疫保护效果。抗血清进行被动免疫,评估抗血清的被动保护作用。结果成功构建pET28a(+)-pepO重组质粒,测序鉴定构建成功。经IPTG诱导表达菌,纯化后获得纯度>90%的重组蛋白。经Westernblot证实,我们制备的抗血清能特异性识别不同血清型S.pn中的PepO蛋白,提示该疫苗候选蛋白在不同血清型肺炎链球菌中具有高度保守性。重组PepO蛋白抗原经腹腔免疫小鼠后,可产生较高滴度的IgG抗体,但效价低于粘膜免疫,腹腔免疫PepO组小鼠血清中IgG效价为0.34×10~6,粘膜免疫PepO组小鼠唾液中IgA及IgG效价分别为2.7×10~2和1.8×10~2,血清中IgG效价为0.75×10~6。粘膜免疫PepO对S.pn NCTC7466及CMCC31436的保护率分别为58.3%,41.6%。腹腔免疫PepO对S.pn NCTC7466,6B型,14型的保护率分别为50%,41.6%,58.3%。被动免疫结果显示,PepO蛋白抗血清被动保护率达50%,提示PepO蛋白抗原的保护效应与其抗体的作用密切相关。结论通过本研究,我们成功克隆出S.pn疫苗候选因子PepO蛋白,该蛋白在多种血清型S.pn中高度保守。将PepO蛋白经粘膜及腹腔途径免疫小鼠,均可对致死剂量的S.pn感染提供一定的免疫保护作用,经粘膜途径与经腹腔途径免疫的保护效果相当,提示,PepO蛋白疫苗是一组较有开发潜力的蛋白疫苗。

引文