结核分枝杆菌rdESAT-6抗原在耻垢分枝杆菌中的制备及其血清学诊断研究
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- 论文作者：郭建 ; 范齐文 ; 范小勇 ; 马辉 ; 钱雪琴 ; 胡香南 ; 吴文娟
- 年：2013
- 作者机构：同济大学附属东方医院南院检验科;
- 论文关键词：结核分枝杆菌 ; ESAT-6 ; rdESAT-6 ; 融合蛋白 ; 免疫学诊断
- 会议召开时间：2013-09-13
- 会议录名称：第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编
- 语种：中文
- 分类号：R378.911
- 学会代码：WSWZ
- 会议名称：第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
- 会议地点：中国江苏无锡
- 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、医学参考报社、宁波大学医学院附属医院
- 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：43k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
目的:构建结核分枝杆菌融合基因2 esat-6原核表达载体,利用耻垢分枝杆菌诱导表达、纯化融合蛋白rdESAT-6,Western-blot分析其抗原性,并评估其在结核病患者中的血清学诊断价值。方法:以DNA疫苗HG856A2为模板,经PCR扩增2×esat6基因,构建pMF41-2×esat-6原核表达载体。将pMF41-2×esat-6质粒电转化到高效电转耻垢分枝杆菌mc2155,以乙酰胺诱导重组菌株表达融合蛋白rdESAT-6,通过亲和层析纯化融合蛋白,Western-blot分析其抗原性。收集2010年9月~2012年3月,上海市公共卫生临床中心收治的126例确诊为结核病的患者和42例健康检查者的血清;用间接ELISA法和TB-DOT试剂盒检测其血清结核抗体,评估rdESAT-6抗原在结核病患者血清学诊断中的价值。结果:成功构建了pMF41-2×esat-6重组质粒,在耻垢分枝杆菌中融合蛋白rdESAT-6以包涵体形式表达,纯化的蛋白纯度在95%以上,可与rESAT-6小鼠抗血清发生特异性反应。126例结核病患者血清学检测结果表明,rdESAT-6重组蛋白在结核分枝杆菌菌阳性组和菌阴性组患者血清学诊断的敏感性分别为79.75%(63/79),61.70%(29/47);42例健康检查者血清诊断特异性为95.24%(40/42)。TBDOT试剂盒检测对菌阳性和菌阴性组患者血清学诊断的敏感性分别为62.03%(49/79),44.68%(21/47);特异性为95.24%(40/42)。结论:制备的结核分枝杆菌的融合蛋白rdESAT-6,用于结核病血清学检测具有较好的敏感性和特异性,可作为结核血清学诊断的优选抗原。
引文