猪圆环病毒2型Cap蛋白B细胞线性表位的预测及鉴定
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摘要
背景:猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是单链环状无囊膜DNA病毒,该病毒粒子呈二十面体对称结构,是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,并且与猪皮炎与肾炎综合征(PDNS),以及猪呼吸道综合征(PRDC)、先天性震颤(CT)等多种疾病有关,成为世界范围内危害养猪业的重要病原之一。目的:Cap蛋白具有良好的抗原性且与病毒和宿主细胞结合有关,因此对其表位的研究可以为猪圆环病毒的检测以及疫苗的制备奠定基础。方法:本研究利用原核表达系统分段表达了KF株免疫反应性较强的结构蛋白Cap,利用Western-blot免疫学手段,分段筛选其线性B细胞表位。Cap蛋白N端的42个氨基酸序列为其信号肽序列,具有较强的保守性。本文根据生物信息学预测首先将去除信号肽序列Cap蛋白的氨基酸序列分成三段分别为1(43-112aa)、2(107-156aa)、3(151-233aa)。分段扩增DNA序列,与PET32a载体相连接,转化至DH5α感受态细胞中经鉴定测序正确后转化到BL21感受态细胞中,诱导蛋白表达,并对蛋白纯化产物进行western-blot分析及血清分析。结果:结果显示片段1、3为阳性片段。采用同样的方法将1、3片段再次分段4(58-95aa)、5(151-189aa)、6(204-233aa)。实验结果显示片段4、6为阳性片段。再次分段表达7(58-67aa)、8(77-95aa)、9(204-213aa)、10(221-233aa)。血清学分析显示片段10为阳性片段,可将此片段作为表位进行下一步的研究。结论:经分段表达筛选出的表位可以为PCV2的检测建立血清学检测手段,同时也为疫苗的制备及特异性的诊断提供理论依据。
引文