PCV2靶向性多表位疫苗构建与免疫活性鉴定
详细信息 查看官网全文
- 论文作者：董林 ; 王艳萍 ; 吕素芳 ; 王金良 ; 莫玲 ; 沈志强
- 年：2016
- 作者机构：山东省滨州畜牧兽医研究院;山东绿都生物科技有限公司;
- 论文关键词：PCV2 ; 靶向性 ; 表位疫苗 ; 免疫活性
- 会议召开时间：2016-09-18
- 会议录名称：第六届中国兽药大会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of 2016 the 6th China Congress of Veterinary Medicine
- 语种：中文
- 分类号：S852.4
- 学会代码：ZGXJ
- 会议名称：第六届中国兽药大会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国兽医药品监察所、中国兽药协会
- 学会名称：中国畜牧兽医学会
- 页数：1
- 文件大小：57k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
基于Ii内体靶向和CLIP区定向锚定MHCⅡ抗原结合域特征,设计、构建新型PCV2靶向性多表位疫苗,并进行免疫活性鉴定。方法:选取7个PCV2中和表位,组成表位串联体,DNAstarProtean优化组合方式及密码子优化,合成ep cDNA,定向插入pEGX-4T-1;通过三轮PCR重叠延伸构建ep置换CLIP区的ep+Ii重组体,经xhoI、xbaI位点定向克隆至pCI-neo多克隆位点处,构建真核表达载体pCI-neo-ep+Ii;转染COS-7细胞,免疫荧光、Westernblot鉴定Ii内体靶向功能与ep表达蛋白免疫活性;提取pCI-neo-ep+Ii免疫Balb/c小鼠,ELISA方法测定血清抗体,评价其免疫效力。优化确定PCV2ep串联体cDNA大小300bp,编码100位氨基酸残基,并成功构建了pEGX-4T-1-ep重组体;三轮PCR置换构建了ep完整替换CLIP区ep+Ii重组体,大小为873bp,无Ii、ep基因缺失和突变。免疫荧光抗体检测显示,Ii内体靶向功能不受置换ep影响;Western blot鉴定表明,ep+Ii重组蛋白获得有效表达,目的蛋白大小约32.1ku,其与PCV2阳性血清具有良好免疫反应性。小鼠免疫试验显示,pCI-neo-ep+Ii免疫ELISA抗体效价可达1:1600,明显优于非靶向性pCI-neo-ep的1:1200。本研究构建了具有内体靶向性PCV2多表位疫苗,明显提高表位疫苗免疫抗体效价,为PCV2新型疫苗研究奠定了基础。
引文