2个家蝇类几丁质酶基因的克隆、表达及序列分析
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- 论文作者：杨尉锦 ; 国果 ; 付萍 ; 吴建伟
- 年：2016
- 作者机构：贵州医科大寄生虫学教研室;
- 论文关键词：家蝇 ; 类几丁质酶 ; 原核表达 ; 序列分析
- 会议召开时间：2016-08-08
- 会议录名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会论文摘要集
- 英文会议录名称：The Abstracts of the Tenth Symposium for Yong Scientists of China Society of Parasitology
- 语种：中文
- 分类号：R384.2
- 学会代码：JISC
- 会议名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国动物学会寄生虫学专业青年委员会
- 学会名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：565k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
目的:从家蝇的基因组数据库中筛选获得2个类几丁质酶基因(chitinase-likeⅠ、Ⅱ),分别克隆这两个基因,对其进行序列分析,构建原核表达载体,获得重组蛋白,为进一步研究家蝇类几丁质酶基因的功能奠定一定基础。方法:采用生物信息学相关软件,对家蝇chitinase-likeⅠ、Ⅱ两个基因及其编码蛋白的基本理化性质,信号肽、二级结构等进行分析,预测蛋白质的功能;根据其cD NA序列设计引物,PCR扩增,以p ET28(+)为载体构建重组质粒,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果:家蝇chitinase-likeⅠ基因ORF全长1401bp,编码466个氨基酸,理论分子量为50827.2Da,等电点为6.97,属于疏水性的酸性蛋白。chitinase-likeⅡ基因ORF全长1446bp,编码480个氨基酸,理论分子量为57846.1Da,等电点5.67,属于疏水性的酸性蛋白。成功克隆家蝇chitinase-likeⅠ、Ⅱ基因;所构建的重组质粒经PCR、测序鉴定成功;SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒在BL21(DE3)中包涵体表达,得到的融合蛋白相对分子量分别为50827.2Da、57846.1Da。结论:本研究对家蝇的两个类几丁质酶基因进行了克隆及序列分析,并成功构建原核表达载体表达出融合蛋白,为进一步研究类几丁质酶基因的功能奠定基础。
引文