猪瘟野毒株与兔化弱毒疫苗株RT-LAMP检测方法的建立

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• 论文作者：贾蕊 ; 祁艳华 ; 牛艳 ; 王彦伟 ; 杨庆宝 ; 周景明 ; 王爱萍
• 年：2016
• 作者机构：郑州大学;
• 论文关键词：猪瘟病毒 ; 环介导等温扩增 ; 快速检测
• 会议召开时间：2016-11-04
• 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编
• 英文会议录名称：Abstracts of 2016 CSI Congress on Immunology
• 语种：中文
• 分类号：S852.651
• 学会代码：IGMD
• 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
• 会议地点：中国安徽合肥
• 主办单位：中国免疫学会
• 学会名称：中国免疫学会
• 页数：1
• 文件大小：1146k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

背景:猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的接触性传染病,以高热性、出血性和高死亡率为特征。猪瘟病毒是单股正链核糖核酸病毒,病毒粒子呈圆形球状,基因组大小约为12.3 kb。目前,针对猪瘟的诊断方法主要包括病毒病原学检测,血清学检测和分子生物学检测三大类。环介导等温扩增(LAMP)属于分子生物学检测法,是利用自循环链置换反应原理在恒温条件下实现对DNA的特异、高效和快速扩增,其操作简单,不需要昂贵的仪器设备,易于监控,同时对生物污染物的耐受性强,可有效克服PCR反应中常见的酶失活的问题,在病毒等病原微生物的临床检测上应用广泛。方法:为了建立猪瘟野毒株与兔化弱毒疫苗株RT-LAMP检测方法,本研究根据猪瘟标准强毒株(shimen等)、疫苗株(HCLV等)、不同基因亚型的CSFV野毒株以及牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)和牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)的全基因组序列,利用DNAman软件系统对猪瘟强弱毒株的序列进行比对,设计一套分别针对猪瘟弱毒株与强毒株的特异性环介导等温扩增引物,优化RT-LAMP反应体系与反应条件,分别建立猪瘟强毒株和弱毒疫苗株的RT-LAMP检测方法。结果:结果表明65℃恒温作用1h即可完成RT-LAMP扩增,RT-LAMP扩增产物用罗丹明B指示剂观察颜色变化,阳性呈黄色,阴性呈橙红色;用琼脂糖凝胶电泳进行检测,阳性扩增有特异性梯形条带产生。经检测,猪瘟强弱毒株的RT-LAMP检测方法,特异性良好,同时建立的RT-LAMP检测方法比RT-PCR灵敏度高出1000倍,且重复性稳定性良好。结论:本试验建立的猪瘟强毒株与弱毒疫苗株的RT-LAMP检测技术是一种快速准确,特异性好,灵敏度高,适合基层使用的方法,实现了对猪瘟强毒株和兔化弱毒株核酸的特异、高效和快速检测,为猪瘟的现场快速检测提供更加简便、快速的方法,可以满足基层检疫的需要。

引文