利用可视化原位杂交技术研究CSFV在猪脾脏和肺脏的分布情况

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• 论文作者：孙骏翔 ; 孙永芳 ; 张玉杰 ; 徐璐 ; 张乾义 ; 赵启祖 ; 王琴
• 年：2016
• 作者机构：中国兽医药品监察所;
• 论文关键词：猪瘟病毒(CSFV) ; 原位杂交 ; 肺脏 ; 脾脏
• 会议召开时间：2016-09-18
• 会议录名称：第六届中国兽药大会论文集
• 英文会议录名称：Proceedings of 2016 the 6th China Congress of Veterinary Medicine
• 语种：中文
• 分类号：S852.651
• 学会代码：ZGXJ
• 会议名称：第六届中国兽药大会
• 会议地点：中国四川成都
• 主办单位：中国兽医药品监察所、中国兽药协会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会
• 页数：2
• 文件大小：126k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

猪瘟又称经典猪瘟(Classical Swine Fever,CSF),是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的高度致死性、接触性传染病。CSFV是单股正链RNA病毒。RNA原位杂交基本原理是在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交中碱基互补配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段杂交,所形成的杂交体经显色反应后在显微镜下观察其细胞或组织内相应的RNA分子。该检测方法可以准确的、可视化的检测感染细胞中的CSFV RNA,且该方法的灵敏度优于单抗免疫荧光法、免疫组化法,实现了对细胞中病毒RNA的准确定位。本实验利用可视化原位杂交技术分析CSFV在感染猪组织器官的分布规律及组织嗜性,为CSFV致病机理研究奠定了重要的理论基础。实验选取在河北省分离的中等致病力HeBHH1/95株攻毒40日龄的CSFV抗原、抗体阴性猪,分别采集第1、3、6、10、12、13、18、20、24dpi和28dpi脾脏、肺脏两个病变组织器官。采用优化后的可视化原位杂交技术检测其病毒RNA在其组织中的分布情况。在1dpi即可在肺脏中检测出病毒RNA,3dpi在脾脏中检测到病毒RNA;肺脏中,病毒RNA主要集中在细支气管周围及粘膜上皮细胞。1dpi在细支气管附近的肌层检测到病毒RNA;3dpi在胸膜脏层上皮细胞处检测到病毒RNA;4dpi细支气管粘膜处检测到病毒RNA;6dpi在淋巴小结处有病毒RNA出现;4dpi~7dpi细支气管粘膜上皮细胞处病毒RNA逐渐增多。12dpi在混合腺出现病毒RNA,同时,在胸膜脏层也有少量病毒RNA存在。脾脏中,病毒RNA主要集中在小梁上皮细胞及小梁周围,尤其是脾小结,细胞密集的地方病毒RNA富集较多。3dpi即在被膜上皮细胞和红髓内检测到病毒RNA,6dpi被膜的上皮细胞及红髓内检测到大量的病毒RNA;7dpi在脾小结及小梁周围处检测到大量的病毒RNA。随着病程的延长,6dpi~28dpi各组织器官中的病毒RNA含量逐渐增加,尤其是18dpi之后各组织中的病毒RNA明显增多。在整个感染过程中,脾脏病毒RNA含量明显多于肺脏中的含量。研究结果说明CSFV主要在淋巴系统中分布,而免疫器官是CSFV非常易感的靶组织。

引文