四君子加川牛膝方促进大鼠下肢难愈性创面愈合的机制研究
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摘要
目的:探讨"四君子汤"、"四君子加川牛膝方"促进大鼠下肢难愈性创面愈合的机制,初步探讨引经药川牛膝的作用机制。方法:建立大鼠右下肢难愈性创面模型,将64只雄性SPF级SD大鼠随机分为生理盐水组、四君子加川牛膝方组、四君子汤组、川牛膝方组。各组分别给予生理盐水及相应中药灌胃处理,在创面愈合过程中(造模后的第7天、第14天),取创面新生肉芽组织及血液,应用Elisa、细胞培养、流式细胞仪检测等技术,观察成纤维细胞的S期细胞比例、b FGF以及TGF-β1的水平变化,探讨四君子汤、四君子加川牛膝方、川牛膝促进创面愈合的作用机制和特点。结果:(1)造模后第7天,四君子汤组及四君子加川牛膝方组TGF-β1、b FGF浓度明显高于生理盐水组(分别F=9.64,F=4.09;P<0.05);川牛膝方组与生理盐水组无明显差异(P>0.05);四君子汤组、四君子加川牛膝方组无明显差异(P>0.05)。造模后第14天,四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组,组间比较无明显差异(分别F=0.12,F=0.26;P>0.05)。(2)成纤维细胞S期细胞比例:在造模后第7天,对成纤维细胞G0/G1期细胞比例的表达,四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝方组均明显低于生理盐水组(F=25.50;P<0.01,P<0.05),四君子加川牛膝方组明显低于四君子汤组(F=25.50;P<0.05)。对成纤维细胞G2/M期细胞比例的表达,四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝方组与生理盐水组均无显著性差异(F=1.33;P>0.05)。对成纤维细胞S期细胞比例的表达,四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝方组均明显高于生理盐水组(F=386.14;P<0.01),四君子加川牛膝方组明显高于四君子汤组(F=386.14;P<0.05,P<0.01)。在造模后第14天,对成纤维细胞G0/G1期及G2/M细胞比例的表达,四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝方组与生理盐水组均无显著性差异(F分别为0.27和3.44;P>0.05)。对成纤维细胞S期细胞比例的表达,四君子加川牛膝方组明显高于生理盐水组(F=386.14;P<0.01),亦明显高于四君子汤组(F=386.14;P<0.01)。结论:补虚生肌类中药四君子汤及四君子加川牛膝方,通过上调TGF-β1、b FGF的合成和分泌,加速成纤维细胞由G0/G1期进入S期,促进成纤维细胞的增殖,促进创面肉芽组织增生,填充组织缺损,从而促进创面愈合。川牛膝引经作用的机制可能是通过提高成纤维细胞S期细胞比例,促进成纤维增殖而发挥的协同作用。
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