环形泰勒虫裂殖体感染淋巴细胞转化相关基因的克隆表达及兔源多克隆抗体的制备

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• 论文作者：赵帅阳 ; 刘军龙 ; 李有全 ; 刘爱红 ; 李四通 ; 何欣 ; 殷宏 ; 关贵全 ; 罗建勋
• 年：2016
• 作者机构：家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
• 论文关键词：环形泰勒虫 ; 裂殖体 ; 转化 ; 蛋白功能
• 会议召开时间：2016-08-08
• 会议录名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会论文摘要集
• 英文会议录名称：The Abstracts of the Tenth Symposium for Yong Scientists of China Society of Parasitology
• 语种：中文
• 分类号：S855.9
• 学会代码：JISC
• 会议名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会
• 会议地点：中国四川成都
• 主办单位：中国动物学会寄生虫学专业青年委员会
• 学会名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会
• 页数：1
• 文件大小：601k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

环形泰勒虫病是一种由环形泰勒虫引起的蜱传性血液原虫病,其临床症状主要表现为淋巴结肿大、高热、贫血等。其裂殖体阶段虫体能够感染宿主巨噬细胞、树突状细胞(DC)细胞及B淋巴细胞,直接影响宿主动物的免疫功能。在体外培养过程中,被感染的淋巴细胞能够无限增殖(转化特性),表现出癌细胞特性,因而对于这种生物学现象的研究具有重要意义。目的:本研究依据当前环形泰勒虫基因组及蛋白组数据,并结合小泰勒虫、疟原虫及癌症相关研究数据,选择裂殖体阶段虫体的SVSP2、EMM(erythrocyte membrane-associated malaria antigen-like),GLU(glutaredoxin)3个可能参与宿主细胞转化的基因,并制备它们的兔源多克隆抗体,为后续蛋白功能的研究提供实验材料。方法:以感染的淋巴细胞总RNA为模板,扩增目的片段,构建p ET30a重组载体,将测序正确的重组载体导入BL21(DE3)进行原核表达。以anti-His标签蛋白的抗体为一抗进行的Western blot分析。为获得大量纯度较高的抗原,通过蛋白切胶回收、电洗脱及丙酮沉淀的方法纯化重组蛋白,按照每只兔子1mg的剂量,与佐剂混合乳化后,进行皮下多点注射免疫,第三次免疫后心脏采血,进行抗体检测。结果:3个蛋白都获得了正确表达,最终获得的重组蛋白浓度分别为1mg/ml(SVSP2),1.5mg/ml(EMM)和2.3mg/ml(GLU)。Western blot结果显示,天然蛋白及3个纯化重组蛋白均能与相应的多克隆抗体发生反应。结论:制备的兔源多克隆抗体为后续蛋白功能研究提供了很好的生物学材料:一方面可用于亚细胞定位;另一方面也可以将抗体纯化后开展co-ip实验,经过质谱分析,获得可能与SVSP2、EMM及GLU发生相互作用的分子,为其功能的深入分析奠定基础。

引文