雷公藤甲素作用于共培养体系中雄性动物生殖细胞毒性研究
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- 论文作者：李莹 ; 陈颖 ; 桂博 ; 孟祥 ; 孙祖越
- 年：2016
- 作者机构：上海市计划生育科学研究所药理毒理学研究室中国生育调节药物毒理检测中心;
- 论文关键词：精原细胞 ; 支持细胞 ; 共培养 ; 生殖细胞毒性 ; 雷公藤甲素
- 会议召开时间：2016-05-13
- 会议录名称：中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次（2016年）学术交流大会论文集
- 语种：中文
- 分类号：R285.1
- 学会代码：ZGDV
- 会议名称：中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次（2016年）学术交流大会
- 会议地点：中国天津
- 主办单位：中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会
- 学会名称：中国毒理学会
- 页数：2
- 文件大小：158k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
目的:将分离、富集的精原细胞接种于制备好的支持细胞饲养层上进行培养,研究睾丸支持细胞对睾丸生精细胞体外培养的影响,同时检测雷公藤甲素对体外单独培养睾丸支持细胞、生精细胞以及两者体外共培养的毒性。方法:(1)取鼠龄16~22d的雄性ICR小鼠睾丸,采用胶原酶、透明质酸酶、胰蛋白酶和DNA酶消化分离支持细胞,经低渗处理及多次差异贴壁法进行纯化,倒置相差显微镜和苏木精-伊红(HE)染色观察细胞生长和形态,通过Fas-L免疫细胞染色法鉴定支持细胞。(2)另取鼠龄7~8天的雄性ICR小鼠睾丸,相同方法消化制备小鼠睾丸生殖细胞悬液,用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞,差异贴壁法进一步纯化,采用碱性磷酸酶染色和c-kit免疫细胞染色法鉴定精原细胞。(3)以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,观察SSCs的生长情况。(4)采用cck-8法检测不同剂量组雷公藤甲素对支持细胞、精原细胞以及两者体外共培养的毒性,计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果:在体外成功培养出小鼠睾丸支持细胞、精原细胞,并且观察到在以支持细胞为饲养层的共培养体系中精原细胞增殖生长良好。经cck-8试剂盒检测,雷公藤甲素对两种细胞及其共培养细胞都有细胞毒性,均呈剂量递增。细胞半数抑制浓度(IC_(50))分别为4.22×10~5ng/ml、9.96×10~3ng/ml、4.85×10~4ng/m。。结论:采用组合酶消化法、Percoll不连续密度梯度离心法和差异贴壁法,可达到分离、培养、纯化小鼠支持细胞和精原细胞的目的。建立了支持细胞和精原细胞体外单独培养和共培养体系。经丝裂霉素处理制备的支持细胞饲养层,能有效促进精原细胞的生长。雷公藤甲素对小鼠支持细胞、精原细胞及两者共培养体系有细胞毒性,提示其具有一定的生殖毒性。
引文