HSV-1碱性脱氧核糖核酸酶在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定
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- 论文作者：胡金 ; 陈恬 ; 张文秋 ; 张燕 ; 王永洪 ; 兰婉莹
- 年：2016
- 作者机构：成都医学院病原生物学教研室;四川大学华西药学院;
- 论文关键词：HSV-1 ; UL12基因 ; AN ; 毕赤酵母 ; 酶活性
- 会议召开时间：2016-09-09
- 会议录名称：第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编
- 语种：中文
- 分类号：R440
- 学会代码：WSWZ
- 会议名称：第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
- 会议地点：中国浙江宁波
- 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、医学参考报社、宁波大学、宁波大学医学院附属医院
- 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：51k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
目的在毕赤酵母中表达HSV-1复制的关键酶——碱性脱氧核糖核酸酶(alkaline deoxyribonuclease,AN),检测其核酸外切酶活性,从而进一步研究AN的抑制剂。方法以GenBank发表的HSV-1的17株UL12基因为模板,选择毕赤酵母偏好密码子,合成UL12基因,定向克隆进毕赤酵母表达载体pPIC9K中,经酶切和测序鉴定证明重组载体构建成功。线性化的重组载体pPIC9K-UL12,电转化至毕赤酵母菌GS115,用组氨酸缺陷平板选择HIS+转化子,并进行表型测定,筛选出高抗性转化子。采取甲醇诱导表达,对诱导表达96h的上清进行离子交换层析,SDS-PAGE检测经纯化的AN,并对AN进行核酸外切酶活性检测。结果重组质粒pPIC9K-UL12在GS115中成功分泌表达,表达产物纯化后SDS-PAGE检测可见目的蛋白条带,目的蛋白显示出核酸外切酶活性。结论毕赤酵母成功表达了具有核酸外切酶活性的碱性核酸酶AN,为抗HSV-1新药的研发奠定了基础。
引文