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牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的免疫保护作用机制研究
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摘要
为阐明牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的免疫保护作用机制,本研究应用SOE-PCR技术获得1482 bp的NcSRS2-NcGRA7复合基因;制备了牛源犬新孢子虫pV AX1-NcSRS2-NcGRA7核酸疫苗;构建了pCR259-NcSRS2-NcGRA7重组腺病毒穿梭质粒和重组腺病毒表达质粒,制备了滴度为109 TCID50/mL的Ad5-NcSRS2-NcGRA7重组腺病毒疫苗;应用核酸疫苗和重组腺病毒疫苗建立了Prime-Boost免疫策略,经对Prime-Boost和单疫苗接种小鼠的抗体水平、T淋巴细胞亚群变化及细胞因子水平等指标的检测分析,证实Prime-Boost诱导小鼠的免疫应答水平显著优于重组腺病毒疫苗和核酸疫苗;经对攻虫小鼠的临床症状观察,主要脏器组织虫体含量、病理学变化及其生殖机能等各项指标的检测表明,Prime-Boost和Ad5-NcSRS2-NcGRA7免疫保护率最高,pV AX1-NcSRS2-NcGRA7次之;证实Prime-Boost和Ad5-NcSRS2-NcGRA7在提高机体免疫水平的同时,有效抑制了虫体对脏器组织细胞的侵袭,尤其Prime-Boost免疫保护作用优势显著。本项目为新孢子虫病新型疫苗的临床应用及该病的防控研究奠定了基础。
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