犬旋毛虫肌幼虫体外培养及其排泄分泌物抗原的制备
|
摘要
本试验首次系统地探讨了影响犬旋毛虫肌幼虫体外培养的多种因素。通过试验确定了犬旋毛虫肌幼虫最适体外培养条件，成功地体外连续培养24天，并且制备了犬旋毛虫肌幼虫排泄分泌物抗原（Excretory seeretory antigens ESAg）。
每ml培养液虫体接种量、培养温度、气体条件、培养液pH值等对虫体的体外培养都有不同程度的影响。试验结果表明，从人工感染犬旋毛虫的实验动物中分离肌幼虫的最适日龄为50天，最适虫体消化时间为37℃时17h、38℃时14h、39℃时12h、40℃时10h，每ml培养液最适虫体接种量为6000条，最佳培养温度为37℃，最适培养气体条件为CO_2二氧化碳培养箱、最适培养液pH值为7.0，最适培养基为RPMI—1640，最佳培养液附加营养成分为蛋白胨，最佳培养液更换时间间隔为24h，最适观察虫体时间间隔为24h。通过体外培养所收集到的排泄分泌物抗原经SDS-PAGE分析，出现了比较明显的2条蛋白带，其分子量为45KDa、49KDa。经琼脂扩散试验，ES抗原与犬旋毛虫阳性血清出现了明显清晰的沉淀线，而与犬蛔虫阳性血清、犬绦虫阳性血清之间未出现沉淀线，ES抗原具有较强的特异性。本研究为制备大量的排泄分泌物抗原，开展ES抗原的分子生物学的研究、诊断疾病奠定了基础。
By the first time, We discussed systermly the various factors affected the cultivation in vitro of the Larva in muscle of canine Trichinella in the research. The most suitable conditions of the Larva in vitro were decided by the experiments and succeeded in culturing for 24 days continuely. We prepared the excretory secretory antigens (Excretory Seeretory Antigens ESAg) of the Larva in muscle of canine Trichinella.
The quantity of inoculation per millilitre, the temprature, the gas condition, the pH of culture medium,all can affect the cultrue of the Larva in muscle of canine Trichinella in vitro by diferent degree. The results showed that the most suitable time to isolating the Larva from the experiment animals, which were experimentally infected with canine Trichinella was on the fiftith day; the most suitable time of degesting was at 37℃ for 17 hours; 38℃ for 14 hours; 39℃for 19 hours; 40℃ for 10 hours; the most suitable inquantity to inoculate per millilitre was 6000 strips; the best temperature was at 37℃; the best gas condition was in the CO2gas incubator and the concentration of CO2 was 8 per cent; the most suitable pH was at 7.0; the most suitable medium was RPMI-1640; the best nourishment component was peptone; the most appropriate time interval of changing medium was about 24 hours; the best time to observe was at 24 hours. The analyse of collected excretory secretory antigens in vitro by SDS-PAGE, there were two transparent bands, which have the molecular weight of 45Kda and 49Kda. The transparent distinct deposit line appeared between ESAg and positive serum of canine Trichinella by the double immunodibut test, but the deposit line couldn't be observed between the ESAg and serum of canine ascarid and cestode. All of these shows that the ESAg has a high specificity. The research established the background to prepare mass excreting secretion antigen and to develop the study of molecular bilogy and the diagnosis of the disease.
每ml培养液虫体接种量、培养温度、气体条件、培养液pH值等对虫体的体外培养都有不同程度的影响。试验结果表明，从人工感染犬旋毛虫的实验动物中分离肌幼虫的最适日龄为50天，最适虫体消化时间为37℃时17h、38℃时14h、39℃时12h、40℃时10h，每ml培养液最适虫体接种量为6000条，最佳培养温度为37℃，最适培养气体条件为CO_2二氧化碳培养箱、最适培养液pH值为7.0，最适培养基为RPMI—1640，最佳培养液附加营养成分为蛋白胨，最佳培养液更换时间间隔为24h，最适观察虫体时间间隔为24h。通过体外培养所收集到的排泄分泌物抗原经SDS-PAGE分析，出现了比较明显的2条蛋白带，其分子量为45KDa、49KDa。经琼脂扩散试验，ES抗原与犬旋毛虫阳性血清出现了明显清晰的沉淀线，而与犬蛔虫阳性血清、犬绦虫阳性血清之间未出现沉淀线，ES抗原具有较强的特异性。本研究为制备大量的排泄分泌物抗原，开展ES抗原的分子生物学的研究、诊断疾病奠定了基础。
By the first time, We discussed systermly the various factors affected the cultivation in vitro of the Larva in muscle of canine Trichinella in the research. The most suitable conditions of the Larva in vitro were decided by the experiments and succeeded in culturing for 24 days continuely. We prepared the excretory secretory antigens (Excretory Seeretory Antigens ESAg) of the Larva in muscle of canine Trichinella.
The quantity of inoculation per millilitre, the temprature, the gas condition, the pH of culture medium,all can affect the cultrue of the Larva in muscle of canine Trichinella in vitro by diferent degree. The results showed that the most suitable time to isolating the Larva from the experiment animals, which were experimentally infected with canine Trichinella was on the fiftith day; the most suitable time of degesting was at 37℃ for 17 hours; 38℃ for 14 hours; 39℃for 19 hours; 40℃ for 10 hours; the most suitable inquantity to inoculate per millilitre was 6000 strips; the best temperature was at 37℃; the best gas condition was in the CO2gas incubator and the concentration of CO2 was 8 per cent; the most suitable pH was at 7.0; the most suitable medium was RPMI-1640; the best nourishment component was peptone; the most appropriate time interval of changing medium was about 24 hours; the best time to observe was at 24 hours. The analyse of collected excretory secretory antigens in vitro by SDS-PAGE, there were two transparent bands, which have the molecular weight of 45Kda and 49Kda. The transparent distinct deposit line appeared between ESAg and positive serum of canine Trichinella by the double immunodibut test, but the deposit line couldn't be observed between the ESAg and serum of canine ascarid and cestode. All of these shows that the ESAg has a high specificity. The research established the background to prepare mass excreting secretion antigen and to develop the study of molecular bilogy and the diagnosis of the disease.
引文
[1] 牛炳享，潘光武，何惟等. 应用酶联免疫吸附试验诊断猪旋毛虫病的研究[J]. 中国兽医科技. 1985，2（3）：3-6
[2] 朱兴全. 浅谈旋毛虫病的免疫诊断. 中国兽医科技[J]. 1988，4：54-56
[3] 阎玉河，卢景良等. 旋毛虫病检测技术及检测抗原研究新进展. 黑龙江畜牧兽医[J]. 1996，6：41-43
[4] 丛恕增. 旋毛虫病综述. 中国兽医杂志[J]. 1985，6：46-49
[5] 窦兰清. 我国旋毛虫病流行与研究进展.中国农业大学学报[J].1998，增刊：98-101
[6] 刘明远. 我国旋毛虫病流行病学概况与研究前瞻. 中国农业大学学报[J]. 1998，增刊：102
[7] 顾有方. 旋毛虫病免疫诊断方法研究进展. 黑龙江畜牧兽医[J].1992，1：41
[8] 李爱民、袁鸿锦. 肌旋毛虫功能性抗原实验研究. 兽医大学学报[J]. 1989，3：270-273
[9] 李爱民、袁鸿锦. 肌旋毛虫体外培养实验研究. 中国人兽共患病杂志[J]. 1992，8（1）：63
[10] Grandall RB. et al：Am J Trop Med Hyg 17：747. 1968
[11] Philip M et al：Nature 287：538. 1980
[12] 李燎. 地方病通报[J]. 1996，（11）：15
[13] Silberstein Ds：J Immunology 132：893. 1984
[14] Gamble HR et al：Am Jvet Iees 45：67. 1984
[15] 王光耀,彭先江. 旋毛虫与旋毛虫病. 中国人兽共患病杂志[J]. 1988，4（1）：59-61
[16] 朱兴全,牛炳亨,窦兰清等. 间接荧光抗体试验检测猪旋毛虫病的研究. 中国兽医科技[J]. 1989，（4）：8-10
[17] 窦兰清. 应用微量间接血凝试验检测实验感染猪旋毛虫病的研究. 中国兽医科技[J]. 1987，（1）：8-11
[18] 张淑文. 应用酶联免疫吸附试验检测猪旋毛虫病. 中国兽医科技[J]. 1989，（6）：31-33
[19] 许威光，袁文甫，李春华等. 旋毛虫炳McAb快速ELISA诊断盒的研制与应用. 畜牧兽医学报[J]. 1993，24（6）：550-553
[20] 张月清，吴赵永，温艳等. SPA-ELISA检测感染旋毛虫猪血清中的特异性抗体. 中国兽医科技[J]. 1993，23（3）：28-29
[21] 朱兴全，薛福汉. 旋毛虫病.科学出版社.1993，第一版
[22] 魏财文. 旋毛虫抗原研究进展. 中国兽医寄生虫病[J]. 2001，9（1）45-48
[23] 贾世玉，党勃，刁有祥等. 旋毛虫病免疫诊断抗原的筛选研究. 畜牧兽医[J]. 1993，（3）：109-110
[24] 何希君，宋建臣，董梅 我国旋毛虫病检测技术的进展. 延边大学农学学报[J]. 1999，（4）：317-319
[25] 朱兴全. 国内旋毛虫病研究概况. 中国人兽共患病杂志[J]. 1988，4
（3）：47-49
[26] 朱兴全. 国内人兽共患旋毛虫病检测技术现状. 上海畜牧兽医通讯[J]. 1988，5：27-29
[27] 杨锡林. 旋毛虫病研究的国际动向. 中国兽医科技[J]. 1983，7：56-57
[28] 张桂红. 猪旋毛虫DNA限制性片段长度多太性分析. 中国预防兽医学报[J]. 2000，22（2）：146 -148
[29] Sleeman HK et al：Am J Trop Med Hyg 10：821. 1961
[30] Ruitenberg.E.J.et.al.Serodiagnosis of T.spiralis infections in pigs by ELISA.Bull.W.H.O.1974.51：108-109
[31] Van lcnapen F.Franchimont.JH.Ruiten berg.E.J.etal.Comparison of four metthods for the early deteetion of Trichinella spioalisinfeetion pigs.J.Imnuno Methods. 1976.10：67-83
[32] Gamble.H.R.et al.Diagnosis of swine trichinellosis by ELISA using an E-Santigen.1983.13：349-361
[33] 朱兴全，牛炳亨，窦兰清等. Dot-ELISA诊断猪旋毛虫病的研究. 中国兽医科技[J]. 1988，（3）：57-59
[34] 许威光，袁文甫，王家祥等. 旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诊断猪旋毛虫病的研究与应用. 华北农学报[J]. 1989，4（4）：133-139
[35] 王春仁，仇建华. 旋毛虫病免疫研究进展. 中国畜禽传染病[J]. 1994，4：60-62
[36] 窦兰清，朱兴全，孙学勤等. 旋毛虫病免疫预防的研究. 中国兽医科技[J].1992，22（3）：9-11
[37] 窦兰清，朱兴全，史晓红等. 猪旋毛虫病免疫方法的研究. 中国兽医寄生虫病[J]. 1995，3（4）；1-4
[38] Despommier.D.D.et al：J.Parasito. 1981，63：332
[39] 窦兰清，孙学勤，史晓红等. 旋毛虫肌幼虫及成虫表面抗原对小鼠的免疫保护作用. 中国兽医科技[J].1995，25（2）：10-11
[40] Ortega-pirres G et al：parasitol Res. 1984，75：563
[41] Su X. Prestwood AK. McGrawRA. Cloning and expression of complementary DNA. Encoding an antigen of Trichinella spiralis.Mol Biochem.Parasitol. 1991. 45：331-336
[42] Sugane K Matsuura T，Maekawa H.Translationproducts of mRNA frominfective larvae of Trichinella spiralis include an antigenicpolypeptide.J.Helminthol，1987，61：1-8
[43] Sugane K，Matsuura T.Molecular analysis of the gene cncoding anantigenic polypeptide of Trichinellaspiralis infective larvae.J.Helminthol，1990，64：1-8
[44] Arasu P.Ellis L A.Iglesias R.et al.Molecalar analysis of antigenstargeted by protective antibodies in rapid expulsion of Trichinellas piralis.Mol.Biochem.parasitol. 1994. 65：201-211
[45] Karapetyan.A.E.（1962）. Invitro cultivotion of Giardia duoder.alis.Journal of parasitology 48：337-340
[46] 蔡海松. 旋毛虫病P49抗原相关抗体的ELISA检测. 中国人兽共患病杂志[J]. 2001，17（1）：45-46
[47] 温艳. 聚合酶联反应技术检测旋毛虫DNA的实验研究. 中国人兽
共患病杂志[J]. 2001，17（1）：61-64
[48] 张桂红. 旋毛虫各隔离种快速诊断方法的研究. 中国预防兽医学报[J]. 2000，22（3）：230-232
[49] 宋铭忻，周源昌. 用DNA限制性片段长度多太性鉴定旋毛虫各隔离种. 中国兽医寄生虫病[J]. 2001，9（1）：5
[50] 张伟光，蔡海松，林新坚等..旋毛虫P49抗原基因克隆体外表达条件的研究.中国人兽共患病杂志[J].1998，14（2）：7-9
[51] 阎玉河，童光志，卢景良等..旋毛虫肌幼虫ES抗原特异性蛋白2个结构基因的分子克隆及其高效表达.中国兽医学报[J].1997，17（6）：581-587
[52] 石磊，史晓红，窦兰清等. 旋毛虫新生幼虫的体外培养. 中国兽医科技[J]. 1993，23（9）：23-24
[53] 董述组. 人工胃液消化肌肉法在旋毛虫检验中的应用. 兽医科技杂志[J].1983，（1）：40-44
[54] 何希君. 微孔滤膜免疫紧银染色法检测犬旋毛虫病血清IgG抗体的研究. 延边大学硕士论文. 2000年，9
[55] 许应天. 三抗体间接法Dot-ELISA检测犬旋毛虫病IgG抗体的研究.延边大学硕士论文. 1999年，8
[56] 范积达，佟世德. ELISA检测猪旋毛虫病的研究.畜牧与兽医[J].1988，12：11-12
[57] 武苏平，于庆全，谢醒民等. 组织切片间接免疫酶染色法诊断旋毛虫病的实验研究. 中国人兽共患病杂志[J]. 1988，4（5）：28-29
[58] 窦兰清，牛炳亨，何惟等. 应用ABC-ELISA诊断实验感染猪旋毛虫病的研究. 中国兽医科技[J]. 1987，12：13-15
[59] 徐守魁. 家畜寄生虫病学. 黑龙江科学技术出版社. 1989年，159-164
[60] 宋铭忻，周源昌，王洪法等. 哈尔滨地区猪旋毛虫对猪、犬的感染性试验. 畜牧兽医学报[J]. 1998，29（3）：267-270
[61] 史晓红，石磊，窦兰清等. 旋毛虫成虫、新生幼虫及肌幼虫的收集方法. 中国兽医科技[J]. 1993，23（12）；26-27
[62] 刘明远，陈贵连，柳增善等. S3抗原的饿免疫学特性及其在诊断中的应用. 兽医大学学报[J]. 1992，12（3）：276-277
[63] 刁有祥，袁鸿锦，陈贵连等. 肌旋毛虫免疫亲和层析抗原的制备及其特性. 兽医大学学报[J]. 1991，4：369-372
[64] 贾世玉，刁有祥，付兴伦等.抗旋毛虫循环抗原单抗的制备及初步应用. 中国兽医学报[J]. 1995，15（1）：70-73
[65] 朱兴全，窦兰清，史晓红等. 旋毛虫肌幼虫可溶性抗原、排泄分泌物抗原的电泳分析. 畜牧兽医学报[J].1995，26（2）：168-171
[66] 阎玉河. 旋毛虫ES抗原特异性成分的分离和鉴定. 中国兽医杂志[J]. 1993，19（10）：14
[2] 朱兴全. 浅谈旋毛虫病的免疫诊断. 中国兽医科技[J]. 1988，4：54-56
[3] 阎玉河，卢景良等. 旋毛虫病检测技术及检测抗原研究新进展. 黑龙江畜牧兽医[J]. 1996，6：41-43
[4] 丛恕增. 旋毛虫病综述. 中国兽医杂志[J]. 1985，6：46-49
[5] 窦兰清. 我国旋毛虫病流行与研究进展.中国农业大学学报[J].1998，增刊：98-101
[6] 刘明远. 我国旋毛虫病流行病学概况与研究前瞻. 中国农业大学学报[J]. 1998，增刊：102
[7] 顾有方. 旋毛虫病免疫诊断方法研究进展. 黑龙江畜牧兽医[J].1992，1：41
[8] 李爱民、袁鸿锦. 肌旋毛虫功能性抗原实验研究. 兽医大学学报[J]. 1989，3：270-273
[9] 李爱民、袁鸿锦. 肌旋毛虫体外培养实验研究. 中国人兽共患病杂志[J]. 1992，8（1）：63
[10] Grandall RB. et al：Am J Trop Med Hyg 17：747. 1968
[11] Philip M et al：Nature 287：538. 1980
[12] 李燎. 地方病通报[J]. 1996，（11）：15
[13] Silberstein Ds：J Immunology 132：893. 1984
[14] Gamble HR et al：Am Jvet Iees 45：67. 1984
[15] 王光耀,彭先江. 旋毛虫与旋毛虫病. 中国人兽共患病杂志[J]. 1988，4（1）：59-61
[16] 朱兴全,牛炳亨,窦兰清等. 间接荧光抗体试验检测猪旋毛虫病的研究. 中国兽医科技[J]. 1989，（4）：8-10
[17] 窦兰清. 应用微量间接血凝试验检测实验感染猪旋毛虫病的研究. 中国兽医科技[J]. 1987，（1）：8-11
[18] 张淑文. 应用酶联免疫吸附试验检测猪旋毛虫病. 中国兽医科技[J]. 1989，（6）：31-33
[19] 许威光，袁文甫，李春华等. 旋毛虫炳McAb快速ELISA诊断盒的研制与应用. 畜牧兽医学报[J]. 1993，24（6）：550-553
[20] 张月清，吴赵永，温艳等. SPA-ELISA检测感染旋毛虫猪血清中的特异性抗体. 中国兽医科技[J]. 1993，23（3）：28-29
[21] 朱兴全，薛福汉. 旋毛虫病.科学出版社.1993，第一版
[22] 魏财文. 旋毛虫抗原研究进展. 中国兽医寄生虫病[J]. 2001，9（1）45-48
[23] 贾世玉，党勃，刁有祥等. 旋毛虫病免疫诊断抗原的筛选研究. 畜牧兽医[J]. 1993，（3）：109-110
[24] 何希君，宋建臣，董梅 我国旋毛虫病检测技术的进展. 延边大学农学学报[J]. 1999，（4）：317-319
[25] 朱兴全. 国内旋毛虫病研究概况. 中国人兽共患病杂志[J]. 1988，4
（3）：47-49
[26] 朱兴全. 国内人兽共患旋毛虫病检测技术现状. 上海畜牧兽医通讯[J]. 1988，5：27-29
[27] 杨锡林. 旋毛虫病研究的国际动向. 中国兽医科技[J]. 1983，7：56-57
[28] 张桂红. 猪旋毛虫DNA限制性片段长度多太性分析. 中国预防兽医学报[J]. 2000，22（2）：146 -148
[29] Sleeman HK et al：Am J Trop Med Hyg 10：821. 1961
[30] Ruitenberg.E.J.et.al.Serodiagnosis of T.spiralis infections in pigs by ELISA.Bull.W.H.O.1974.51：108-109
[31] Van lcnapen F.Franchimont.JH.Ruiten berg.E.J.etal.Comparison of four metthods for the early deteetion of Trichinella spioalisinfeetion pigs.J.Imnuno Methods. 1976.10：67-83
[32] Gamble.H.R.et al.Diagnosis of swine trichinellosis by ELISA using an E-Santigen.1983.13：349-361
[33] 朱兴全，牛炳亨，窦兰清等. Dot-ELISA诊断猪旋毛虫病的研究. 中国兽医科技[J]. 1988，（3）：57-59
[34] 许威光，袁文甫，王家祥等. 旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诊断猪旋毛虫病的研究与应用. 华北农学报[J]. 1989，4（4）：133-139
[35] 王春仁，仇建华. 旋毛虫病免疫研究进展. 中国畜禽传染病[J]. 1994，4：60-62
[36] 窦兰清，朱兴全，孙学勤等. 旋毛虫病免疫预防的研究. 中国兽医科技[J].1992，22（3）：9-11
[37] 窦兰清，朱兴全，史晓红等. 猪旋毛虫病免疫方法的研究. 中国兽医寄生虫病[J]. 1995，3（4）；1-4
[38] Despommier.D.D.et al：J.Parasito. 1981，63：332
[39] 窦兰清，孙学勤，史晓红等. 旋毛虫肌幼虫及成虫表面抗原对小鼠的免疫保护作用. 中国兽医科技[J].1995，25（2）：10-11
[40] Ortega-pirres G et al：parasitol Res. 1984，75：563
[41] Su X. Prestwood AK. McGrawRA. Cloning and expression of complementary DNA. Encoding an antigen of Trichinella spiralis.Mol Biochem.Parasitol. 1991. 45：331-336
[42] Sugane K Matsuura T，Maekawa H.Translationproducts of mRNA frominfective larvae of Trichinella spiralis include an antigenicpolypeptide.J.Helminthol，1987，61：1-8
[43] Sugane K，Matsuura T.Molecular analysis of the gene cncoding anantigenic polypeptide of Trichinellaspiralis infective larvae.J.Helminthol，1990，64：1-8
[44] Arasu P.Ellis L A.Iglesias R.et al.Molecalar analysis of antigenstargeted by protective antibodies in rapid expulsion of Trichinellas piralis.Mol.Biochem.parasitol. 1994. 65：201-211
[45] Karapetyan.A.E.（1962）. Invitro cultivotion of Giardia duoder.alis.Journal of parasitology 48：337-340
[46] 蔡海松. 旋毛虫病P49抗原相关抗体的ELISA检测. 中国人兽共患病杂志[J]. 2001，17（1）：45-46
[47] 温艳. 聚合酶联反应技术检测旋毛虫DNA的实验研究. 中国人兽
共患病杂志[J]. 2001，17（1）：61-64
[48] 张桂红. 旋毛虫各隔离种快速诊断方法的研究. 中国预防兽医学报[J]. 2000，22（3）：230-232
[49] 宋铭忻，周源昌. 用DNA限制性片段长度多太性鉴定旋毛虫各隔离种. 中国兽医寄生虫病[J]. 2001，9（1）：5
[50] 张伟光，蔡海松，林新坚等..旋毛虫P49抗原基因克隆体外表达条件的研究.中国人兽共患病杂志[J].1998，14（2）：7-9
[51] 阎玉河，童光志，卢景良等..旋毛虫肌幼虫ES抗原特异性蛋白2个结构基因的分子克隆及其高效表达.中国兽医学报[J].1997，17（6）：581-587
[52] 石磊，史晓红，窦兰清等. 旋毛虫新生幼虫的体外培养. 中国兽医科技[J]. 1993，23（9）：23-24
[53] 董述组. 人工胃液消化肌肉法在旋毛虫检验中的应用. 兽医科技杂志[J].1983，（1）：40-44
[54] 何希君. 微孔滤膜免疫紧银染色法检测犬旋毛虫病血清IgG抗体的研究. 延边大学硕士论文. 2000年，9
[55] 许应天. 三抗体间接法Dot-ELISA检测犬旋毛虫病IgG抗体的研究.延边大学硕士论文. 1999年，8
[56] 范积达，佟世德. ELISA检测猪旋毛虫病的研究.畜牧与兽医[J].1988，12：11-12
[57] 武苏平，于庆全，谢醒民等. 组织切片间接免疫酶染色法诊断旋毛虫病的实验研究. 中国人兽共患病杂志[J]. 1988，4（5）：28-29
[58] 窦兰清，牛炳亨，何惟等. 应用ABC-ELISA诊断实验感染猪旋毛虫病的研究. 中国兽医科技[J]. 1987，12：13-15
[59] 徐守魁. 家畜寄生虫病学. 黑龙江科学技术出版社. 1989年，159-164
[60] 宋铭忻，周源昌，王洪法等. 哈尔滨地区猪旋毛虫对猪、犬的感染性试验. 畜牧兽医学报[J]. 1998，29（3）：267-270
[61] 史晓红，石磊，窦兰清等. 旋毛虫成虫、新生幼虫及肌幼虫的收集方法. 中国兽医科技[J]. 1993，23（12）；26-27
[62] 刘明远，陈贵连，柳增善等. S3抗原的饿免疫学特性及其在诊断中的应用. 兽医大学学报[J]. 1992，12（3）：276-277
[63] 刁有祥，袁鸿锦，陈贵连等. 肌旋毛虫免疫亲和层析抗原的制备及其特性. 兽医大学学报[J]. 1991，4：369-372
[64] 贾世玉，刁有祥，付兴伦等.抗旋毛虫循环抗原单抗的制备及初步应用. 中国兽医学报[J]. 1995，15（1）：70-73
[65] 朱兴全，窦兰清，史晓红等. 旋毛虫肌幼虫可溶性抗原、排泄分泌物抗原的电泳分析. 畜牧兽医学报[J].1995，26（2）：168-171
[66] 阎玉河. 旋毛虫ES抗原特异性成分的分离和鉴定. 中国兽医杂志[J]. 1993，19（10）：14