玉米大斑病菌有性杂交后代的生物学特性及其毒素组分分析
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摘要
玉米大斑病是玉米生产上的一种重要叶部病害。其病原菌的无性态为Exserohilum turcicum(Pass.)Leonard et Suggs，有性态为Setosphaeria turcica。大量研究表明，该病菌产生的致病毒素(HT-毒素)，是其致病的主要原因。玉米大斑病菌是异宗配合真菌，有性杂交可能会增强其致病力。通过对有性杂交后代生物学性状以及寄生适合度和产毒能力的深入了解，对控制其潜在危害具有重要意义。
本试验通过对产孢量和菌丝生长速度的测定，研究了玉米大斑病菌有性杂交后代的生物学特性。发现后代菌株相互之间以及亲代与后代菌株之间在菌丝生长速率和产孢量上存在差异。后代菌株与亲代菌株在部分生物学性状上出现了性状分离，其性状分离比为27.4％。
对有性杂交后代的寄生适合度研究后发现，有性杂交后代在寄生适合度上有显著的差别。一些后代菌株能在感病寄主上形成较大型的病斑，产孢量相对也很大，属强寄生适合度类型，而另一些菌株不能诱导感病寄主发病。可见，通过有性杂交可以形成寄生适合度强的菌株，也会形成寄生适合度弱的菌株，也可能使一些后代菌株失去寄生能力。
利用离体叶片针刺法，对后代菌株所产毒素的活性进行了测定。发现后代菌株的粗毒素对供试玉米品种均表现出了一定程度的毒性。不同菌株所产之间毒素所致病斑面积不同，说明不同菌株产生的毒素致毒活性不同。另外，生测结果还显示，1／3后代菌株的粗毒素，在带有不同单抗性基因的玉米叶片上，没有表现出活性的差异，2／3的后代菌株的毒素在带有不同单抗性基因的玉米叶片上表现出致毒活性分化的现象。
对高效液相色谱(HPLC)技术分离毒素组分的最佳条件进行了摸索。试验表明，用50％甲醇与50％的超纯水作流动相，可以将毒素各组分较好的分离开来。进样量为15μL时检出峰的数量最多。加入不同浓度的酸试剂(乙酸)对毒素的分离影响很大。但经过比较，不加酸试剂比加入酸试剂的分离效果好。按上述优化条件对亲代及后代菌株的毒素进行HPLC分析，发现后代菌株毒素之间既存在相同的组分又存在不同的组分。后代菌株毒素与两个亲本菌株毒素之间既存在某些相同的组分，又存在不同的组分。两个亲代菌株毒素的某些组分是不同的，后代毒素的组分有的与亲本01-12的某些或某个组分相同，有的与亲本01-15的某些或某个组分相同。另外，后代毒素中还存在两个亲本毒素所不具有的组分。
Northern Leaf Blight of Corn (NLBC) is a major leaf disease of corn. The causual agent is Exserohilum turcicum. Setosphaeria turcica is its sexual stage. The former reseaches indicated that the pathotoxin named HT-toxin produced by its fungal pathology was the important reason causing this disease. The Setosphaeria turcica was sexual stage of this fungal pathogen.
The genetic variation of some biological characteristics including pathogenicity and toxigenicity in the ascospore cultured progenies of isolate 01-12 and 01-15 of Setosphaeria turcica was analyzed in this paper. The results revealed that the character of some progenies was significantly different from their parent isolates and sister isolates in the growth velocity and the amount of conidium. when they were cultured in the PDA medium.
There were significant differences among the progenies of sexual hybridization in infection efficiency,latent period,lesion size,sporulation and fitness index. Some progenies with strong fitness index or weak fitness index emerged. Through the research we found that the progenies of sexual hybridization of this fungal pathogen have higher or lower fitness index than its parent isolates.
The biological activity of progeny isolate toxins were analyzed using acupuncturing leaves in vitro manifested that they had different toxicity to corn. The lesion areas on inhomogeneous species of corn produced by the toxins of some progenies were different. This kind of toxin occupied one third of the total toxins. Other two third of the total toxin did not manifest difference among the inhomogeneous species of corn.
The best isolating conditions for the toxins of the progenies had been studied using high performance liquid chromatography(HPLC). The results were as follows:50%methanol and 50% hyperpure water could be used as mobile phase to isolate the toxin of the progenies. Add acid reagent had largely effect on separating degree of the toxin. The quantity of peak was the bigest when the injection quantity was 15 uL.The experiment manifest the toxin could be isolate effectively with no
acid reagent added. The peak had good separating degree in the condition. We found
the toxin of the progenies was different they had same fractions and dissimilar
fractions. The some fractions of progeny isolate toxins were same with the fraction
of the toxin of their parents,some did not exist in the toxin of their parents.
本试验通过对产孢量和菌丝生长速度的测定，研究了玉米大斑病菌有性杂交后代的生物学特性。发现后代菌株相互之间以及亲代与后代菌株之间在菌丝生长速率和产孢量上存在差异。后代菌株与亲代菌株在部分生物学性状上出现了性状分离，其性状分离比为27.4％。
对有性杂交后代的寄生适合度研究后发现，有性杂交后代在寄生适合度上有显著的差别。一些后代菌株能在感病寄主上形成较大型的病斑，产孢量相对也很大，属强寄生适合度类型，而另一些菌株不能诱导感病寄主发病。可见，通过有性杂交可以形成寄生适合度强的菌株，也会形成寄生适合度弱的菌株，也可能使一些后代菌株失去寄生能力。
利用离体叶片针刺法，对后代菌株所产毒素的活性进行了测定。发现后代菌株的粗毒素对供试玉米品种均表现出了一定程度的毒性。不同菌株所产之间毒素所致病斑面积不同，说明不同菌株产生的毒素致毒活性不同。另外，生测结果还显示，1／3后代菌株的粗毒素，在带有不同单抗性基因的玉米叶片上，没有表现出活性的差异，2／3的后代菌株的毒素在带有不同单抗性基因的玉米叶片上表现出致毒活性分化的现象。
对高效液相色谱(HPLC)技术分离毒素组分的最佳条件进行了摸索。试验表明，用50％甲醇与50％的超纯水作流动相，可以将毒素各组分较好的分离开来。进样量为15μL时检出峰的数量最多。加入不同浓度的酸试剂(乙酸)对毒素的分离影响很大。但经过比较，不加酸试剂比加入酸试剂的分离效果好。按上述优化条件对亲代及后代菌株的毒素进行HPLC分析，发现后代菌株毒素之间既存在相同的组分又存在不同的组分。后代菌株毒素与两个亲本菌株毒素之间既存在某些相同的组分，又存在不同的组分。两个亲代菌株毒素的某些组分是不同的，后代毒素的组分有的与亲本01-12的某些或某个组分相同，有的与亲本01-15的某些或某个组分相同。另外，后代毒素中还存在两个亲本毒素所不具有的组分。
Northern Leaf Blight of Corn (NLBC) is a major leaf disease of corn. The causual agent is Exserohilum turcicum. Setosphaeria turcica is its sexual stage. The former reseaches indicated that the pathotoxin named HT-toxin produced by its fungal pathology was the important reason causing this disease. The Setosphaeria turcica was sexual stage of this fungal pathogen.
The genetic variation of some biological characteristics including pathogenicity and toxigenicity in the ascospore cultured progenies of isolate 01-12 and 01-15 of Setosphaeria turcica was analyzed in this paper. The results revealed that the character of some progenies was significantly different from their parent isolates and sister isolates in the growth velocity and the amount of conidium. when they were cultured in the PDA medium.
There were significant differences among the progenies of sexual hybridization in infection efficiency,latent period,lesion size,sporulation and fitness index. Some progenies with strong fitness index or weak fitness index emerged. Through the research we found that the progenies of sexual hybridization of this fungal pathogen have higher or lower fitness index than its parent isolates.
The biological activity of progeny isolate toxins were analyzed using acupuncturing leaves in vitro manifested that they had different toxicity to corn. The lesion areas on inhomogeneous species of corn produced by the toxins of some progenies were different. This kind of toxin occupied one third of the total toxins. Other two third of the total toxin did not manifest difference among the inhomogeneous species of corn.
The best isolating conditions for the toxins of the progenies had been studied using high performance liquid chromatography(HPLC). The results were as follows:50%methanol and 50% hyperpure water could be used as mobile phase to isolate the toxin of the progenies. Add acid reagent had largely effect on separating degree of the toxin. The quantity of peak was the bigest when the injection quantity was 15 uL.The experiment manifest the toxin could be isolate effectively with no
acid reagent added. The peak had good separating degree in the condition. We found
the toxin of the progenies was different they had same fractions and dissimilar
fractions. The some fractions of progeny isolate toxins were same with the fraction
of the toxin of their parents,some did not exist in the toxin of their parents.
引文
[1] 白金铠．杂粮作物病害[M]．北京：中国农业出版社．1995．1～2．
[2] 董金皋，黄梧芳．玉米叶斑病菌毒素的研究现状[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．102～126．
[3] 晋齐鸣，任金平，张秀文，等．1991年吉林省中部地区玉米病害发生危害情况[J]．吉林农业科学，1992，(2)：40～42．
[4] Raymundo A D,Hooher A L. Measuring the relationship between northern corn leaf blight and yield losses[J]. Plant Diease,1981, 65: 325～327.
[5] Levy Y. The overwintering of Exserohilum turcicum in Israe[J]. Phytoparasitica,1984,12: 177～182.
[6] Perkins J M,Pederson W L. Disease developmeng and yield losses associated with northern leaf blight on corn[J].Plant Disease, 1987, 71: 940～943.
[7] 赵桂东，刘荆，未海波，等．夏玉米大小斑发生规律及防治技术[J]．玉米科学，1996，4(1)：74～75．
[8] 董金皋．农业植物病理学(北方本)[M]．北京：中国农业出版社，2001．84～85．
[9] 周大荣，王崇仁．“八五”玉米主要病虫害及综合防治技术[J]．植物病理学报，1995(增刊)：1～84．
[10] 高卫东，戴发超．玉米大斑病研究的新进展[J]．植物病理学报，1993，23(3)：193～195．
[11] Mitra M. Helminthosporium spp.on Cereals and Sugarcance in India.part Ⅰ(Diseases of zeamays and Sorghum Vulgare Caused by Species of Helminthosporium.) [J], Bot. Ser. 1923, 6(10): 219～242.
[12] Levy Y, Pataky J K. Epidemiology of Northern Leaf Blight on Sweet corn. Phytoparasitica. 1992,20:53～56.
[13] Luttrell E S. Leptosphaeria perfect stage for Helminthosporurm turcicum and H rostratum[J]. Phytopathology, 1957, 47:313.
[14] 周增．色谱分析[M]．纺织工业出版社，1993．
[15] 章育中．薄层层析法利薄层扫描法[M]．中国医釣科技出版社，1990．
[16] 刘虎威．气相色谱方法及应用[M]．化学工业出版社，2000．
[17] 于世林．高效液相色谱方法及应用[M]．化学工业出版社，2000．
[18] LR 施奈德，JL 格莱吉克，JJ 柯克兰．实用高效液相色谱法的建立[M]．北京：科学出版社，1998．
[19] 林炳承，邹雄，韩培祯．高效液相色谱在生命科学中的应用[M]．山东科学技术出版社，1992．
[20] 达世禄．色谱学导论(第二版)[M]．武汉大学出版社，1999．
[21] 张利辉，董金皋，刘云惠．植物病原真菌毒素的分离与纯化技术[J]．现代科学仪器，
2001，2：56～59．
[22] 崔洋．反相高效液相色谱法制备HMC毒素纯品[J]．微生物学通报，1999，26(1)：47～49．
[23] 王朝华．玉米大斑病特异性毒素组分的纯化及化学结构[D] 保定：河北农业大学，2002
[24] 安鑫龙．玉米大斑病菌生理小种的鉴定和有性态的诱导[D]．河北农业大学，保定，2001．
[25] 桂秀梅．玉米大斑病遗传多态性与有性态诱导[D]．河北农业大学，保定，2002．
[26] 马继芳．玉米大斑病菌有性杂交后代的遗传多态性与原生质体制备[D]．河北农业大学，保定，2003．
[27] Nelson R R. Evaluating genetic protentials in Helminthosporium turcicum[J]. Phytopathology, 1965,55(8): 418～420
[28] Rodriguez A E, Ullstrup A J. Pathogenicity of monoascosporic progenies of Trichometasphaeria turcica[J]. Phytopathology, 1962,52(5): 599～601
[29] Fallah M P, Pataky J K. Reactions of isolates from matings of races 1 and 23N of Exserohilum turcicum[J]. Plant Disease,1994,78(8): 767～771
[30] Hamid A H,Aragaki M.Inheritance of pathogenicity in setosphaeria turcica[J].Phytopathology, 1975,65(3):280～283.
[31] Smith D R,Kinsey J F.Further physiologic specialization in Helminthosporium turicum[J].Plant Disease, 1980,65(8):779～781.
[32] Thakur RP,Leonard K J,Jines R K.characterization of a New Race of Exserohilum turcicum Virulent on corn with Resistance Gene HtN[J].Plant Disease, 1989,73(2): 151～155.
[33] Windes J M,Pedersen W L.An isolate of Exserohilum turcicum virulent on Maize Inbreds with resistence gene HtN[J].Plant Disease,1991,75(4):430
[34] Nelson R R.The geneics of compatibility in carbonum[J]. Phytopathology, 1960,50(2):158～160.
[35] Levy Y.Overwintering of Exserohilum turcium in Israel[J].Phytoparasitica,1984,12:177～182.
[36] Turner M T, Johnson E R.Race of Helminthosporium turcicum not controlled by Ht genetic resistance in corn in the American corn belt[J].Plant Desease, 1980,64:216～217.
[37] Welz H G, Geiger G G.Virulence variation in Setosphaeria turcicum populations collected from maize in China, Mexico, Uganda, and Zambia. (Abst.)[J]. Phytopathology, 1993, 83:1335.
[38] Bahat R G, CHMITTHENNER A F, Genetic crosses between physiological races of Phytophthora sojae[J],Exp.My-col., 1993,17:122～129.
[39] 游春平，于源超，郑小波等．恶疫霉有性杂交后代的生物学研究[J]．植物病理学报，2001(2)，31(1)：78～83．
[40] Hawes M C, Wheeler H. Detection of effects of nuclear genes on susceptibility to Helminthosporium maydis race T by a root cap cells bioassay for HMT-toxin[J]. Physiological Plant Pathology, 1984, 24(2): 163～168.
[41] 董金皋，朱希．真菌毒素生物测定方法研究概况Ⅰ：植株和组织器官水平的生物测定[J]．河北农业大学学报，1992，15(4)：99～103．
[42] 董金皋．玉米大斑病菌 HT-毒素组分Ⅰ的提纯、结构鉴定及致病活性研究[D]．北京：中国农业大学，1998．
[43] 董金皋，王江柱．植物病原菌毒素活性测定方法[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．61～74．
[44] 张利辉．玉米大斑病菌2号小种毒素的分离与纯化研究[D]．保定：河北农业大学，2001．
[45] [35]Arntzen CI, et al.The effect of pathotoxin from Helminthosporurm maydis (race T) on energy-linked processes of corn seedlings. Physiological Plant Pathology, 1975, 3(1):79.
[46] 陆仕华．水稻尾孢霉毒素[J]．真菌学报，1985，4(4)：240～245
[47] 董金皋，黄梧芳，康绍兰．改良根冠细胞法生测及其应用前景[J]．植物保护，1992，18(5)：32～40．
[48] 董金皋，黄梧芳．根冠细胞法及其应用[J] 作物杂志，1992，4：34
[49] Hawes M C.Technique for using isolated corn cap cells in a sample, quantitative assay for the pathotoxin produced by Helminthosporium maydis T [J].Phytopathology, 1983, 73 (8): 1184～1187
[50] Hawes M C.Sensitivity of isolated oat cap cells and protoplasts to victorin[J]. Physiological Plant Pathology, 1983, 22(1):65～76.
[51] 康绍兰，张浩，黄梧芳，等．诱发玉米抗小斑病突变体的研究Ⅲ：影响玉米小斑病菌致病毒素作用的因素与生物测定[J]．河北农业大学学报，1986，7～16．
[52] 郑祖玲，褚启人．稻瘟病菌粗毒素对水稻的致病性[J]．上海农业学报，1985，1(2)：85～90
[53] 王金陵，许文耀．水稻品种(系)对稻瘟病凶粗毒素的抗性[J]．福建农学院报，1990，19(4)：426～432
[54] 王金陵，许文耀．稻瘟病粗毒素的制备及其对水稻毒性的测定[J]．福建农学院报，1988，1(4)：318～322．
[55] 陈全庆，张繁琴．稻瘟病菌株间培养液的毒性差异[J]．上海农业学报，1989，5(2)：85～88．
[56] 杨家书，刘建华．小麦根腐病菌毒素的研究现状[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．87～92．
[57] 吴经纶，孙兵，王玉琴，等．小麦对根腐病菌毒素的抗性与电阻变化关系研究[J]．微生物学报，1981，(21)：344～349．
[58] 章元寿，王建新，顾本康．用棉花黄萎病菌毒素检测棉花抗病性的研究[J]．植物保护，1991，17(4)：2～4．
[59] 夏正俊，顾本康，吴蔼民．毒素法苗期快速检测棉花品种抗黄萎病性研究[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．200～204．
[60] 王裕中．禾谷镰刀菌粗毒素的生物活性及其在小麦品种抗赤霉病鉴定中的应用[J]．中国
农业科学，1989，22(4)：54～57．
[61] 陈怀谷．应用小麦赤霉菌毒素—芽鞘生测法鉴定小麦品种的抗赤霉病性[J]．江苏农业科学，1990，(6)：23～24．
[62] 张秋英．小麦赤霉病病粒浸出液在小麦抗赤霉病鉴定中的应用研究初报[J]．福建农科院学报，1994，9(2)：58～61．
[63] 周凯南．植物致病镰刀菌毒素滤液浸苗鉴定作物苗期抗病性[J]．山东农业大学学报，1989，20(4)：45～49．
[64] 董金皋，黄梧芳．玉米叶斑病菌毒素的研究现状．[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．102～126．
[65] 严红，李明远，蒋有绎，等．利用真菌毒素筛选抗早疫病番茄材料的研究[A]．董金皋、李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．222～226．
[66] 孔凡伦．杂交水道抗稻瘟病细胞突变体育种[J]．植物杂志，1994(5)：30．
[67] 郑祖玲，褚启人．利用水稻花药培养筛选稻瘟病抗病突变体[J]．植物学通报，1984，2(4)：41～43．
[68] 李朝灿，杨惠杰．水稻抗稻瘟病突变体的离体筛选与鉴定[J]．福建农科院学报，1987，2(2)：1～9
[69] 陆维忠．小麦抗赤霉病无性系变异的研究与应用[J]．农业生物技术学报，1995，3(2)：7～11
[70] 周楠．抗小麦赤霉病体细胞突变体筛选研究[J]．江苏农业学报，1993，9(2)：22～27．
[71] 黄德崇．小麦体细胞无性系的抗赤霉病变异[J]．上海农业学报，1991，7(增)：60～64．
[72] 母秋华．玉米花粉母胚状体无性系的筛选及其在育种上的应用[J]．实验生物学报，1983，16(2)，223．
[73] 康绍兰，郭丽娟，黄梧芳，等．诱发玉米抗小斑病突变体的研究Ⅲ[J]．河北农业大学学报，1986，9(3)，7～17．
[74] 刘国胜，董金皋，黄梧芳．植物组织培养技术在抗玉米小斑病育种中的应用[J]．河北农业大学学报，1990，13(1)104～108．
[75] 翟国英，黄梧芳．玉米大斑病致病毒素及其应用的初步研究[J]．河北农业大学学报．1991，14(4)：65～70．
[76] 孟翠勉．我国玉米大斑病菌有性世代及其致病毒素应用的初步研究[D] 保定：河北农业大学，1990．
[2] 董金皋，黄梧芳．玉米叶斑病菌毒素的研究现状[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．102～126．
[3] 晋齐鸣，任金平，张秀文，等．1991年吉林省中部地区玉米病害发生危害情况[J]．吉林农业科学，1992，(2)：40～42．
[4] Raymundo A D,Hooher A L. Measuring the relationship between northern corn leaf blight and yield losses[J]. Plant Diease,1981, 65: 325～327.
[5] Levy Y. The overwintering of Exserohilum turcicum in Israe[J]. Phytoparasitica,1984,12: 177～182.
[6] Perkins J M,Pederson W L. Disease developmeng and yield losses associated with northern leaf blight on corn[J].Plant Disease, 1987, 71: 940～943.
[7] 赵桂东，刘荆，未海波，等．夏玉米大小斑发生规律及防治技术[J]．玉米科学，1996，4(1)：74～75．
[8] 董金皋．农业植物病理学(北方本)[M]．北京：中国农业出版社，2001．84～85．
[9] 周大荣，王崇仁．“八五”玉米主要病虫害及综合防治技术[J]．植物病理学报，1995(增刊)：1～84．
[10] 高卫东，戴发超．玉米大斑病研究的新进展[J]．植物病理学报，1993，23(3)：193～195．
[11] Mitra M. Helminthosporium spp.on Cereals and Sugarcance in India.part Ⅰ(Diseases of zeamays and Sorghum Vulgare Caused by Species of Helminthosporium.) [J], Bot. Ser. 1923, 6(10): 219～242.
[12] Levy Y, Pataky J K. Epidemiology of Northern Leaf Blight on Sweet corn. Phytoparasitica. 1992,20:53～56.
[13] Luttrell E S. Leptosphaeria perfect stage for Helminthosporurm turcicum and H rostratum[J]. Phytopathology, 1957, 47:313.
[14] 周增．色谱分析[M]．纺织工业出版社，1993．
[15] 章育中．薄层层析法利薄层扫描法[M]．中国医釣科技出版社，1990．
[16] 刘虎威．气相色谱方法及应用[M]．化学工业出版社，2000．
[17] 于世林．高效液相色谱方法及应用[M]．化学工业出版社，2000．
[18] LR 施奈德，JL 格莱吉克，JJ 柯克兰．实用高效液相色谱法的建立[M]．北京：科学出版社，1998．
[19] 林炳承，邹雄，韩培祯．高效液相色谱在生命科学中的应用[M]．山东科学技术出版社，1992．
[20] 达世禄．色谱学导论(第二版)[M]．武汉大学出版社，1999．
[21] 张利辉，董金皋，刘云惠．植物病原真菌毒素的分离与纯化技术[J]．现代科学仪器，
2001，2：56～59．
[22] 崔洋．反相高效液相色谱法制备HMC毒素纯品[J]．微生物学通报，1999，26(1)：47～49．
[23] 王朝华．玉米大斑病特异性毒素组分的纯化及化学结构[D] 保定：河北农业大学，2002
[24] 安鑫龙．玉米大斑病菌生理小种的鉴定和有性态的诱导[D]．河北农业大学，保定，2001．
[25] 桂秀梅．玉米大斑病遗传多态性与有性态诱导[D]．河北农业大学，保定，2002．
[26] 马继芳．玉米大斑病菌有性杂交后代的遗传多态性与原生质体制备[D]．河北农业大学，保定，2003．
[27] Nelson R R. Evaluating genetic protentials in Helminthosporium turcicum[J]. Phytopathology, 1965,55(8): 418～420
[28] Rodriguez A E, Ullstrup A J. Pathogenicity of monoascosporic progenies of Trichometasphaeria turcica[J]. Phytopathology, 1962,52(5): 599～601
[29] Fallah M P, Pataky J K. Reactions of isolates from matings of races 1 and 23N of Exserohilum turcicum[J]. Plant Disease,1994,78(8): 767～771
[30] Hamid A H,Aragaki M.Inheritance of pathogenicity in setosphaeria turcica[J].Phytopathology, 1975,65(3):280～283.
[31] Smith D R,Kinsey J F.Further physiologic specialization in Helminthosporium turicum[J].Plant Disease, 1980,65(8):779～781.
[32] Thakur RP,Leonard K J,Jines R K.characterization of a New Race of Exserohilum turcicum Virulent on corn with Resistance Gene HtN[J].Plant Disease, 1989,73(2): 151～155.
[33] Windes J M,Pedersen W L.An isolate of Exserohilum turcicum virulent on Maize Inbreds with resistence gene HtN[J].Plant Disease,1991,75(4):430
[34] Nelson R R.The geneics of compatibility in carbonum[J]. Phytopathology, 1960,50(2):158～160.
[35] Levy Y.Overwintering of Exserohilum turcium in Israel[J].Phytoparasitica,1984,12:177～182.
[36] Turner M T, Johnson E R.Race of Helminthosporium turcicum not controlled by Ht genetic resistance in corn in the American corn belt[J].Plant Desease, 1980,64:216～217.
[37] Welz H G, Geiger G G.Virulence variation in Setosphaeria turcicum populations collected from maize in China, Mexico, Uganda, and Zambia. (Abst.)[J]. Phytopathology, 1993, 83:1335.
[38] Bahat R G, CHMITTHENNER A F, Genetic crosses between physiological races of Phytophthora sojae[J],Exp.My-col., 1993,17:122～129.
[39] 游春平，于源超，郑小波等．恶疫霉有性杂交后代的生物学研究[J]．植物病理学报，2001(2)，31(1)：78～83．
[40] Hawes M C, Wheeler H. Detection of effects of nuclear genes on susceptibility to Helminthosporium maydis race T by a root cap cells bioassay for HMT-toxin[J]. Physiological Plant Pathology, 1984, 24(2): 163～168.
[41] 董金皋，朱希．真菌毒素生物测定方法研究概况Ⅰ：植株和组织器官水平的生物测定[J]．河北农业大学学报，1992，15(4)：99～103．
[42] 董金皋．玉米大斑病菌 HT-毒素组分Ⅰ的提纯、结构鉴定及致病活性研究[D]．北京：中国农业大学，1998．
[43] 董金皋，王江柱．植物病原菌毒素活性测定方法[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．61～74．
[44] 张利辉．玉米大斑病菌2号小种毒素的分离与纯化研究[D]．保定：河北农业大学，2001．
[45] [35]Arntzen CI, et al.The effect of pathotoxin from Helminthosporurm maydis (race T) on energy-linked processes of corn seedlings. Physiological Plant Pathology, 1975, 3(1):79.
[46] 陆仕华．水稻尾孢霉毒素[J]．真菌学报，1985，4(4)：240～245
[47] 董金皋，黄梧芳，康绍兰．改良根冠细胞法生测及其应用前景[J]．植物保护，1992，18(5)：32～40．
[48] 董金皋，黄梧芳．根冠细胞法及其应用[J] 作物杂志，1992，4：34
[49] Hawes M C.Technique for using isolated corn cap cells in a sample, quantitative assay for the pathotoxin produced by Helminthosporium maydis T [J].Phytopathology, 1983, 73 (8): 1184～1187
[50] Hawes M C.Sensitivity of isolated oat cap cells and protoplasts to victorin[J]. Physiological Plant Pathology, 1983, 22(1):65～76.
[51] 康绍兰，张浩，黄梧芳，等．诱发玉米抗小斑病突变体的研究Ⅲ：影响玉米小斑病菌致病毒素作用的因素与生物测定[J]．河北农业大学学报，1986，7～16．
[52] 郑祖玲，褚启人．稻瘟病菌粗毒素对水稻的致病性[J]．上海农业学报，1985，1(2)：85～90
[53] 王金陵，许文耀．水稻品种(系)对稻瘟病凶粗毒素的抗性[J]．福建农学院报，1990，19(4)：426～432
[54] 王金陵，许文耀．稻瘟病粗毒素的制备及其对水稻毒性的测定[J]．福建农学院报，1988，1(4)：318～322．
[55] 陈全庆，张繁琴．稻瘟病菌株间培养液的毒性差异[J]．上海农业学报，1989，5(2)：85～88．
[56] 杨家书，刘建华．小麦根腐病菌毒素的研究现状[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．87～92．
[57] 吴经纶，孙兵，王玉琴，等．小麦对根腐病菌毒素的抗性与电阻变化关系研究[J]．微生物学报，1981，(21)：344～349．
[58] 章元寿，王建新，顾本康．用棉花黄萎病菌毒素检测棉花抗病性的研究[J]．植物保护，1991，17(4)：2～4．
[59] 夏正俊，顾本康，吴蔼民．毒素法苗期快速检测棉花品种抗黄萎病性研究[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．200～204．
[60] 王裕中．禾谷镰刀菌粗毒素的生物活性及其在小麦品种抗赤霉病鉴定中的应用[J]．中国
农业科学，1989，22(4)：54～57．
[61] 陈怀谷．应用小麦赤霉菌毒素—芽鞘生测法鉴定小麦品种的抗赤霉病性[J]．江苏农业科学，1990，(6)：23～24．
[62] 张秋英．小麦赤霉病病粒浸出液在小麦抗赤霉病鉴定中的应用研究初报[J]．福建农科院学报，1994，9(2)：58～61．
[63] 周凯南．植物致病镰刀菌毒素滤液浸苗鉴定作物苗期抗病性[J]．山东农业大学学报，1989，20(4)：45～49．
[64] 董金皋，黄梧芳．玉米叶斑病菌毒素的研究现状．[A]．董金皋，李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．102～126．
[65] 严红，李明远，蒋有绎，等．利用真菌毒素筛选抗早疫病番茄材料的研究[A]．董金皋、李树正．植物病原菌毒素研究进展(第一卷)[C]．北京：中国科学技术出版社，1997．222～226．
[66] 孔凡伦．杂交水道抗稻瘟病细胞突变体育种[J]．植物杂志，1994(5)：30．
[67] 郑祖玲，褚启人．利用水稻花药培养筛选稻瘟病抗病突变体[J]．植物学通报，1984，2(4)：41～43．
[68] 李朝灿，杨惠杰．水稻抗稻瘟病突变体的离体筛选与鉴定[J]．福建农科院学报，1987，2(2)：1～9
[69] 陆维忠．小麦抗赤霉病无性系变异的研究与应用[J]．农业生物技术学报，1995，3(2)：7～11
[70] 周楠．抗小麦赤霉病体细胞突变体筛选研究[J]．江苏农业学报，1993，9(2)：22～27．
[71] 黄德崇．小麦体细胞无性系的抗赤霉病变异[J]．上海农业学报，1991，7(增)：60～64．
[72] 母秋华．玉米花粉母胚状体无性系的筛选及其在育种上的应用[J]．实验生物学报，1983，16(2)，223．
[73] 康绍兰，郭丽娟，黄梧芳，等．诱发玉米抗小斑病突变体的研究Ⅲ[J]．河北农业大学学报，1986，9(3)，7～17．
[74] 刘国胜，董金皋，黄梧芳．植物组织培养技术在抗玉米小斑病育种中的应用[J]．河北农业大学学报，1990，13(1)104～108．
[75] 翟国英，黄梧芳．玉米大斑病致病毒素及其应用的初步研究[J]．河北农业大学学报．1991，14(4)：65～70．
[76] 孟翠勉．我国玉米大斑病菌有性世代及其致病毒素应用的初步研究[D] 保定：河北农业大学，1990．