三氧化二砷抗鸡MD肿瘤效应及其机理的研究
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摘要
本研究主要根据三氧化二砷(As_2O_3)抗肿瘤作用，将其试用于鸡马立克氏病(MD)的防治，以观察As_2O_3对MD肿瘤的抑制效果，为寻求防治鸡MD及其它肿瘤性疾病的化学药物开辟一条新路，与此同时，通过体内、体外多项指标的检测，为阐明其作用机制，提供理论依据。体外实验部分为As_2O_3体外诱导鸡MD肿瘤细胞凋亡的研究，通过体外肿瘤细胞系的培养，在培养液中添加不同浓度的As_2O_3，观察其对MD肿瘤细胞的抑制作用，通过相关指标的检测，揭示体外抗肿瘤的机制。体内实验部分为As_2O_3体内抗MD肿瘤效果的研究，在对1日龄雏鸡人工感染马立克氏病毒(vMDV)的基础上，通过分组实验，观察饲料添加不同剂量As_2O_3对人工感染vMDV雏鸡的临床效果，并通过相关指标的检测，揭示As_20_3抑制鸡MD肿瘤的机制。研究结果表明：
1．首次证明As_2O_3能够诱导体外培养的MD肿瘤细胞发生凋亡。荧光显微镜检查可见凋亡肿瘤细胞的细胞核或细胞质内呈浓染黄绿色的块状或颗粒状荧光，并见有许多黄绿色碎片，有的细胞膜向外突伸形成凋亡小体。流式细胞计数仪检测在细胞周期G1期前出现明显的亚二倍体峰，结果证明As_2O_3能够诱导MD肿瘤细胞系发生凋亡。
2．首次发现As_2O_3能够诱导体外培养的MD肿瘤细胞系产生细胞因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNT)，此结果可能是引起细胞凋亡的原因和机理之一。
3．As2O3能够改善感染vMDV的SPF雏鸡血清中细胞因子的含量。SPF雏鸡感染vMDV后血清中细胞因子IL-1和IL-2含量减少，IL-6和TNF含量升高，饲料中添加As2O3能够降低感染雏鸡体内IL-6和TNT的含量而提高IL-2和IL-1的含量。
4．As2O3能够改善感染vMDV的SPF雏鸡的抗氧化功能。SPF雏鸡感染vMDV后，体内抗氧化功能降低，表现为超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性降低，丙二醛(MDA)含量增加，饲料添加As2O3能够增强感染雏鸡体内抗氧化功能，表现为SOD、GSH-Px活性升高和MDA含量减少。实验结果为阐明机体抗氧化系统与MD发病机制的关系以及As2O3对机体抗氧化功能的影响，提供某些理论依据。
5．SPF雏鸡感染vMDV后，体内氧自由基和NO含量升高，饲料添加As2O3在初期能够提高体内氧自由基和NO的含量，至24～36日龄后体内自由基含量开始下降。实验结果为阐明自由基与肿瘤病变的发生机理，提供了某些理论依据。
6．雏鸡感染vMDV后，红细胞免疫功能降低，口服As2O3能够提高机体红细胞免疫功能，提高红细胞肿瘤花环率和红细胞C3b受体花环率，降低红细胞免疫复合物花环率。
Arsenic trioxide (As_2C_3) was used experimentally to treat and protect the Marek's disease of chicken, for observing the antagonistic effect of As2O3 on tumor resulted from vMDV and trying to find the way to treat and protect MD and other rumor, based on the antagonistic effect of As_2C_3 on tumor. Meanwhile some internal and external indexes were detected to expound the antagonistic mechanism of As_20_3 on tumor. The external trial was on inducing effect on apoptosis of tumoral cell resulted from vMDV by As_2O_3. MDCC桵SB1 was cultured with different concentration of As2O3 for detected the antagonistic effect on MDCC桵SB1. The relative indexes were detected for expound the antagonistic mechanism of As2C>3 on tumor externally. The internal trial was on antagonistic effect of As203on tumor in clinic. 1 days chickens were infected by vMDV. The chickens were divided into 5 groups. The antagonistic effect of As2O3 on chickens with MD was observed in clinic by adding different dose of As2O3 hi daily feed. The relative indexes were detected for revealing the antagonistic mechanism of As2O3 on MD. The result showed that:
It was testified for first time that As2O3 was active to induce the apoptosis of MDCC桵SB1 in external culture. The yellow-green chunk and pellet with dense fluorescence in nucleus and plasma of apoptosis cell of tumor was observed and some yellow-green broken segment was found with fluorescence microscope. The apoptosis body was found with local cell membrane protruding out Flow cytometry analysis showed mat there was a obvious diploid peak in front of Gl peak.
It was found for first time that As2O3 was active to induce MDCC桵SB Ito produce IL-1, IL-2, IL-6 and TNF in external culture. This was the cause and mechanism of apoptosis occurred possibly.
As2O3 was active to adjust the content of cytokines in plasma of SPF chickens with MD. The content of IL-1, IL-2 decreased, the content of IL-6 and TNF increased in plasma of chickens with MD. But by adding As2O3 in daily feed, the content of IL-1, EL-2 increased, the
content of IL-6 and TNF decreased in plasma of SPF chickens with MD.
As2O3 was active to adjust the antioxidant function of SPF chickens with MD. The antioxidant function of SPF chickens with MD debased, the activity of SOD, GSH-Px decreased and the content of MDA increased. But by adding As2Os in daily feed, The antioxidant function of SPF chickens with MD increased, the activity of SOD, GSH-Px increased and the content of MDA decreased. The result provided some theoretical basis for demonstrating the relationship between antioxidant system and the mechanism of MD as well as for expounding the effect of As2C>3 on antioxidant function.
The content of free radiant and NO increased in SPF chickens with MD. Adding AsaOs in daily feed, the content of free radiant and NO increased in primary trial period, but then reduced after 24-36days. The results provided some theoretical basis for relationship between the content of free radiant and the mechanism of MD.
The erythrocyte immune function decreased in SPF chickens with MD. But the function was enhanced by oral treat with AsjOs.
1．首次证明As_2O_3能够诱导体外培养的MD肿瘤细胞发生凋亡。荧光显微镜检查可见凋亡肿瘤细胞的细胞核或细胞质内呈浓染黄绿色的块状或颗粒状荧光，并见有许多黄绿色碎片，有的细胞膜向外突伸形成凋亡小体。流式细胞计数仪检测在细胞周期G1期前出现明显的亚二倍体峰，结果证明As_2O_3能够诱导MD肿瘤细胞系发生凋亡。
2．首次发现As_2O_3能够诱导体外培养的MD肿瘤细胞系产生细胞因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNT)，此结果可能是引起细胞凋亡的原因和机理之一。
3．As2O3能够改善感染vMDV的SPF雏鸡血清中细胞因子的含量。SPF雏鸡感染vMDV后血清中细胞因子IL-1和IL-2含量减少，IL-6和TNF含量升高，饲料中添加As2O3能够降低感染雏鸡体内IL-6和TNT的含量而提高IL-2和IL-1的含量。
4．As2O3能够改善感染vMDV的SPF雏鸡的抗氧化功能。SPF雏鸡感染vMDV后，体内抗氧化功能降低，表现为超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性降低，丙二醛(MDA)含量增加，饲料添加As2O3能够增强感染雏鸡体内抗氧化功能，表现为SOD、GSH-Px活性升高和MDA含量减少。实验结果为阐明机体抗氧化系统与MD发病机制的关系以及As2O3对机体抗氧化功能的影响，提供某些理论依据。
5．SPF雏鸡感染vMDV后，体内氧自由基和NO含量升高，饲料添加As2O3在初期能够提高体内氧自由基和NO的含量，至24～36日龄后体内自由基含量开始下降。实验结果为阐明自由基与肿瘤病变的发生机理，提供了某些理论依据。
6．雏鸡感染vMDV后，红细胞免疫功能降低，口服As2O3能够提高机体红细胞免疫功能，提高红细胞肿瘤花环率和红细胞C3b受体花环率，降低红细胞免疫复合物花环率。
Arsenic trioxide (As_2C_3) was used experimentally to treat and protect the Marek's disease of chicken, for observing the antagonistic effect of As2O3 on tumor resulted from vMDV and trying to find the way to treat and protect MD and other rumor, based on the antagonistic effect of As_2C_3 on tumor. Meanwhile some internal and external indexes were detected to expound the antagonistic mechanism of As_20_3 on tumor. The external trial was on inducing effect on apoptosis of tumoral cell resulted from vMDV by As_2O_3. MDCC桵SB1 was cultured with different concentration of As2O3 for detected the antagonistic effect on MDCC桵SB1. The relative indexes were detected for expound the antagonistic mechanism of As2C>3 on tumor externally. The internal trial was on antagonistic effect of As203on tumor in clinic. 1 days chickens were infected by vMDV. The chickens were divided into 5 groups. The antagonistic effect of As2O3 on chickens with MD was observed in clinic by adding different dose of As2O3 hi daily feed. The relative indexes were detected for revealing the antagonistic mechanism of As2O3 on MD. The result showed that:
It was testified for first time that As2O3 was active to induce the apoptosis of MDCC桵SB1 in external culture. The yellow-green chunk and pellet with dense fluorescence in nucleus and plasma of apoptosis cell of tumor was observed and some yellow-green broken segment was found with fluorescence microscope. The apoptosis body was found with local cell membrane protruding out Flow cytometry analysis showed mat there was a obvious diploid peak in front of Gl peak.
It was found for first time that As2O3 was active to induce MDCC桵SB Ito produce IL-1, IL-2, IL-6 and TNF in external culture. This was the cause and mechanism of apoptosis occurred possibly.
As2O3 was active to adjust the content of cytokines in plasma of SPF chickens with MD. The content of IL-1, IL-2 decreased, the content of IL-6 and TNF increased in plasma of chickens with MD. But by adding As2O3 in daily feed, the content of IL-1, EL-2 increased, the
content of IL-6 and TNF decreased in plasma of SPF chickens with MD.
As2O3 was active to adjust the antioxidant function of SPF chickens with MD. The antioxidant function of SPF chickens with MD debased, the activity of SOD, GSH-Px decreased and the content of MDA increased. But by adding As2Os in daily feed, The antioxidant function of SPF chickens with MD increased, the activity of SOD, GSH-Px increased and the content of MDA decreased. The result provided some theoretical basis for demonstrating the relationship between antioxidant system and the mechanism of MD as well as for expounding the effect of As2C>3 on antioxidant function.
The content of free radiant and NO increased in SPF chickens with MD. Adding AsaOs in daily feed, the content of free radiant and NO increased in primary trial period, but then reduced after 24-36days. The results provided some theoretical basis for relationship between the content of free radiant and the mechanism of MD.
The erythrocyte immune function decreased in SPF chickens with MD. But the function was enhanced by oral treat with AsjOs.
引文
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