肾敷灵外敷配合雷公藤多甙治疗难治性肾病大鼠肾损害机理的研究
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摘要
目的：
本实验观察肾敷灵外敷配合雷公藤多甙对难治性肾病大鼠的疗效；探讨其对炎症因子NF-κB及TGF-β、nephr in蛋白及脂代谢的影响,为临床进一步的推广应用提供理论依据。
方法：
按照随机化的原则分为4组,为正常组、模型组、对照组(雷公藤多甙灌胃)、治疗组(肾敷灵外敷加雷公藤多甙灌胃)。模型组、对照组,治疗组大鼠尾静脉一次性注射阿霉素6.0mg/kg(阿霉素按2mg/ml溶于生理盐水中,即3.Oml/kg)。正常组大鼠注射等量生理盐水。实验第7天开始灌胃,正常组、模型组每天灌胃生理盐水,剂量1ml/100克；对照组每天灌胃雷公藤多甙混悬液(浓度为2mg/ml),剂量1ml/100克；治疗组在对照组治疗基础上外敷肾敷灵于大鼠神阙、肾腧、脾腧穴位。实验前和实验开始后2周、4周收集大鼠24小时尿液检测24尿蛋白定量；实验结束后收集血清检测白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、总胆固醇(CHOL)和甘油三脂(TG)；Western Blot方法检测肾组织中跨膜糖蛋白(nephrin)、核因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β(TGF-β)的水平；PCR方法检测肾组织中nephrin;免疫组化方法检测肾组织中载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-I)及核心蛋白聚糖(decorin)的水平。
结果：
1.实验第14天、第28天,模型组、对照组及治疗组大鼠体重明显低于正常组(P<0.01)；模型组大鼠体重均明显低于对照组和治疗组(P<0.01),治疗组与对照组比较,体重无明显差异(P>0.05)。
2.实验第14天、28天,模型组、对照组及治疗组大鼠24h尿蛋白显著高于正常组；与模型组相比,对照组及治疗组24h尿蛋白量均显著受到抑制(P均<0.01)；治疗组24h尿蛋白量28天低于对照组(P<0.01)；
实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组血清白蛋白水平明显降低P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显升高(P均<0.01)；治疗组则明显高于对照组(P均<0.01)；
实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组血清胆固醇、甘油三酯水平明显升高(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显降低(P均<0.01)；治疗组则明显低于对照组(P均<0.01)；
血清尿素氮和肌配各组间无统计学差异；
光镜下发现正常组大鼠肾小球系膜区无增生、沉积物,基底膜未见病变,毛细血管开放佳；模型组大鼠可见弥漫性肾小球系膜区增宽,系膜细胞、系膜基质增生,毛细血管腔狭窄；对照组和治疗组组病变均不同程度减轻。
电镜下,正常组大鼠肾小球基底膜结构完整,系膜未见增生,足突清晰完整；模型组肾小球足细胞足突的广泛融合,系膜基质增多,肾小球基底膜增厚,系膜细胞及基膜内未见明显电子致密物沉积,肾小球毛细血管开放,内皮细胞轻度肿胀等。对照组和治疗组病理改变较模型组明显减轻,足突的部分融合,系膜基质轻度增多,肾小球基底膜增厚减轻。
3.实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组大鼠肾组织中NF-κB、TGF-β的表达明显上调(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显降低(P均<0.01)；其中NF-κB的水平治疗组则明显低于对照组(P均<0.01)；
4.与正常组相比,模型组、对照组、治疗组大鼠肾组织中nephrin蛋白表达明显下调(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显升高(P均<0.01)；治疗组则明显高于对照组(P<0.01)；
5.实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组大鼠肾组织中apoA-Ⅰ表达明显降低(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显升高(P均<0.01)；治疗组与对照组有明显差异(P均<0.01)；
实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组大鼠肾组织中decorin表达明显升高(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显降低(P均<0.01)；治疗组与对照组有明显差异(P均<0.01)。
结论：
1.肾敷灵外敷合并雷公藤多甙在改善难治性肾病大鼠营养状况,降低蛋白尿和血清胆固醇及甘油三酯,升高血清白蛋白方面有良好作用。并且可以减轻大鼠肾脏病理改变,为肾敷灵治疗难治性肾病大鼠,减轻肾脏损害提供了组织病理学上的依据。
2.肾敷灵外敷配合雷公藤多甙可通过抑制NF-κB、TGF-β表达,减轻难治性肾病大鼠肾小球的炎症反应,从而抑制肾小球的损伤。
3.肾敷灵外敷配合雷公藤多甙可通过调控足细胞分子nephrin蛋白,从而保护肾小球裂孔隔膜的结构和功能的完整性,以降低难治性肾病大鼠蛋白尿。
4.本研究证明肾敷灵外敷配合雷公藤多甙能可改善apoA-Ⅰ/decorin表达,体现了在改善脂质代谢方面的良好作用,以保护难治性肾病大鼠肾脏免受损伤。
Objective:
The experimental study observes the curative effect of Shen-fu Ling application cooperated with Tripterygium wilfordii poly glucosidlum treat for the refractory nephropathy rat with renal damage; And to investigate the inflammation factors, nephrin and the influence of the lipid metabolism, provides the theory basis for clinical application.
Methods:
According to the principle of random divided into four groups, for normal group, the model group, the control group (tripterygium wilfordii more filling glucoside stomach), the treatment group (renal apply spirit with external tripterygium wilfordii more filling glucoside stomach). Model group, the control group, the treatment group big rat tail vein one-time injection doxorubicin6.0mg/kg (doxorubicin press2mg/ml soluble in saline, or3.0ml/kg). Normal rats, injection amount saline.7day began to fill the stomach, normal group, the model group stomach saline solution filling every day, dose1ml/100g; The control group stomach tripterygium wilfordii filling every day more glucoside suspension liquid (concentration for2mg/ml) dose1ml/100g; The treatment group in the control group based on treatment in rat god Shu, spleen and kidney que feishu on a topical renal apply spirit. Before and after the experiment began two weeks, four weeks collecting rat urine testing24hours24urine protein quantitative; After collecting the serum albumin detection (ALB), urea nitrogen (BUN), creatinine (Scr), total cholesterol (CHOL) and triglycerides (TG); Western Blot methods detection in kidney tissues across a cell membrane glycoprotein (nephrin), nuclear factor-K B, transformation growth factor-β level; Polymerase chain reaction detection in kidney tissues nephrin; Immunohisto chemical method in detecting kidney tissues apolipoprotein A-I (apoA-I) and decorin protein level.
Results:
1. The experiment day14, the28days, the model group, the control group and the treatment group was significantly lower than the normal rats weight group (P<0.01), model rats, weight and the treatment group was significantly lower than the control group (P<0.01), and the control group and the treatment group, weight is no obvious difference (P>0.05);
2. The experiment day14and28days, model group, the control group and the treatment rats,24h urine protein was significantly higher than normal group; And model group, compared to the control group and the treatment group24h urine protein quantity is restrained significantly (P<0.01); The treatment group24h urine protein28days of lower than that in control group (P<0.01);
After the end of experiment, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group serum albumin leels significantly lower P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group increased significantly (P<0.01); Treatment group was obviously higher than those in the control group (P<0.01);
After the end of experiment, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group of serum cholesterol, triglyceride levels increased significantly (P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group reduced significantly (P<0.01); Treatment group was obviously lower than that in control group (P<0.01);
Serum urea nitrogen and muscle groups with no significant differences between;
By light microscopy found normal rats, mesangial area without hyperplasia, sediment, basement membrane has not seen the pathological changes, capillary open good; Model rats, visible diffuse mesangial area broadens, and film cells, department of membrane matrix hyperplasia, capillary lumen; Tripterygium wilfordii much glucoside group and kidney apply spirit merger tripterygium wilfordii much glucoside in different degree of lesions reduce.
By electron microscopy, normal rats, glomerular basement membrane complete structure, the film has not seen the hyperplasia, clear and complete foot processes; Model group glomerular podocyte foot processes of widely fusion, the film substrate increased, thickening of glomerular basement membrane, the membrane cells and basement membrane not seen in obvious things electron dense deposits, the glomerular capillary open, endothelial cells mild swelling, etc. Tripterygium wilfordii much glucoside group and kidney apply spirit merger tripterygium wilfordii much glucoside in model group pathological changes significantly reduce group, the foot processes of fusion, the film substrate mild increase, glomerular basement membrane thickening ease.
3. The experiment ends, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group rats in the kidney tissues nf-kappa B, TGF-obviously up-regulated (P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group reduced significantly (P<0.01); Among them the nf-kappa B level of treatment group is obviously lower than those of the control group (P<0.01);
4. The experiment ends, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group rats in the kidney tissues nephrin protein expression obviously down-regulated (P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group increased significantly (P<0.01); Treatment group was obviously higher than those in the control group (P<0.01);
5. The experiment ends, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group rats in the kidney tissues apoA-I level express significantly; And model group, compared to the control group and the treatment group increased significantly (P<0.01); Compared with the normal group, model group, the control group, the treatment group rats in the kidney tissues decorin express increased significantly (P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group reduced significantly (P<0.01); Treatment group was obviously lower than in control group (P<0.01);
Conclusion:
1. Kidney apply spirit external merger tripterygium wilfordii more persistent nephrotic syndrome in improving glucoside rat nutrition, reduce albuminuria and serum cholesterol and triglycerides, and increase serum albumin is good effect.
Kidney apply spirit with external tripterygium wilfordii treatment plant more rats after kidney pathological change significantly reduce, apply for kidney spirit treatment refractory nephrosis rats, reduce the kidney damage provides histopathological on the basis.
2. Kidney apply spirit with external tripterygium wilfordii much glucoside can inhibit the nf-kappa B, TGF-β expression, reduce the persistent nephrotic syndrome rats of glomerular inflammation and damage to the conservation restraining glomerulus.
3. Kidney apply spirit with external tripterygium wilfordii much glucoside can through regulation foot cell and molecular nephrin protein, thus protecting glomerular stage of the diaphragm of the structure and function of integrity, to reduce refractory nephrosis rats proteinuria.
4. This study proves renal apply spirit with external tripterygium wilfordii much glucoside can can improve apoA-I, decorin expression, reflected in the improvement of lipid metabolism of the good function to protect the persistent nephrotic syndrome rats kidney from damage.
本实验观察肾敷灵外敷配合雷公藤多甙对难治性肾病大鼠的疗效；探讨其对炎症因子NF-κB及TGF-β、nephr in蛋白及脂代谢的影响,为临床进一步的推广应用提供理论依据。
方法：
按照随机化的原则分为4组,为正常组、模型组、对照组(雷公藤多甙灌胃)、治疗组(肾敷灵外敷加雷公藤多甙灌胃)。模型组、对照组,治疗组大鼠尾静脉一次性注射阿霉素6.0mg/kg(阿霉素按2mg/ml溶于生理盐水中,即3.Oml/kg)。正常组大鼠注射等量生理盐水。实验第7天开始灌胃,正常组、模型组每天灌胃生理盐水,剂量1ml/100克；对照组每天灌胃雷公藤多甙混悬液(浓度为2mg/ml),剂量1ml/100克；治疗组在对照组治疗基础上外敷肾敷灵于大鼠神阙、肾腧、脾腧穴位。实验前和实验开始后2周、4周收集大鼠24小时尿液检测24尿蛋白定量；实验结束后收集血清检测白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、总胆固醇(CHOL)和甘油三脂(TG)；Western Blot方法检测肾组织中跨膜糖蛋白(nephrin)、核因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β(TGF-β)的水平；PCR方法检测肾组织中nephrin;免疫组化方法检测肾组织中载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-I)及核心蛋白聚糖(decorin)的水平。
结果：
1.实验第14天、第28天,模型组、对照组及治疗组大鼠体重明显低于正常组(P<0.01)；模型组大鼠体重均明显低于对照组和治疗组(P<0.01),治疗组与对照组比较,体重无明显差异(P>0.05)。
2.实验第14天、28天,模型组、对照组及治疗组大鼠24h尿蛋白显著高于正常组；与模型组相比,对照组及治疗组24h尿蛋白量均显著受到抑制(P均<0.01)；治疗组24h尿蛋白量28天低于对照组(P<0.01)；
实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组血清白蛋白水平明显降低P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显升高(P均<0.01)；治疗组则明显高于对照组(P均<0.01)；
实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组血清胆固醇、甘油三酯水平明显升高(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显降低(P均<0.01)；治疗组则明显低于对照组(P均<0.01)；
血清尿素氮和肌配各组间无统计学差异；
光镜下发现正常组大鼠肾小球系膜区无增生、沉积物,基底膜未见病变,毛细血管开放佳；模型组大鼠可见弥漫性肾小球系膜区增宽,系膜细胞、系膜基质增生,毛细血管腔狭窄；对照组和治疗组组病变均不同程度减轻。
电镜下,正常组大鼠肾小球基底膜结构完整,系膜未见增生,足突清晰完整；模型组肾小球足细胞足突的广泛融合,系膜基质增多,肾小球基底膜增厚,系膜细胞及基膜内未见明显电子致密物沉积,肾小球毛细血管开放,内皮细胞轻度肿胀等。对照组和治疗组病理改变较模型组明显减轻,足突的部分融合,系膜基质轻度增多,肾小球基底膜增厚减轻。
3.实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组大鼠肾组织中NF-κB、TGF-β的表达明显上调(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显降低(P均<0.01)；其中NF-κB的水平治疗组则明显低于对照组(P均<0.01)；
4.与正常组相比,模型组、对照组、治疗组大鼠肾组织中nephrin蛋白表达明显下调(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显升高(P均<0.01)；治疗组则明显高于对照组(P<0.01)；
5.实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组大鼠肾组织中apoA-Ⅰ表达明显降低(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显升高(P均<0.01)；治疗组与对照组有明显差异(P均<0.01)；
实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组大鼠肾组织中decorin表达明显升高(P均<0.01)；与模型组相比,对照组及治疗组明显降低(P均<0.01)；治疗组与对照组有明显差异(P均<0.01)。
结论：
1.肾敷灵外敷合并雷公藤多甙在改善难治性肾病大鼠营养状况,降低蛋白尿和血清胆固醇及甘油三酯,升高血清白蛋白方面有良好作用。并且可以减轻大鼠肾脏病理改变,为肾敷灵治疗难治性肾病大鼠,减轻肾脏损害提供了组织病理学上的依据。
2.肾敷灵外敷配合雷公藤多甙可通过抑制NF-κB、TGF-β表达,减轻难治性肾病大鼠肾小球的炎症反应,从而抑制肾小球的损伤。
3.肾敷灵外敷配合雷公藤多甙可通过调控足细胞分子nephrin蛋白,从而保护肾小球裂孔隔膜的结构和功能的完整性,以降低难治性肾病大鼠蛋白尿。
4.本研究证明肾敷灵外敷配合雷公藤多甙能可改善apoA-Ⅰ/decorin表达,体现了在改善脂质代谢方面的良好作用,以保护难治性肾病大鼠肾脏免受损伤。
Objective:
The experimental study observes the curative effect of Shen-fu Ling application cooperated with Tripterygium wilfordii poly glucosidlum treat for the refractory nephropathy rat with renal damage; And to investigate the inflammation factors, nephrin and the influence of the lipid metabolism, provides the theory basis for clinical application.
Methods:
According to the principle of random divided into four groups, for normal group, the model group, the control group (tripterygium wilfordii more filling glucoside stomach), the treatment group (renal apply spirit with external tripterygium wilfordii more filling glucoside stomach). Model group, the control group, the treatment group big rat tail vein one-time injection doxorubicin6.0mg/kg (doxorubicin press2mg/ml soluble in saline, or3.0ml/kg). Normal rats, injection amount saline.7day began to fill the stomach, normal group, the model group stomach saline solution filling every day, dose1ml/100g; The control group stomach tripterygium wilfordii filling every day more glucoside suspension liquid (concentration for2mg/ml) dose1ml/100g; The treatment group in the control group based on treatment in rat god Shu, spleen and kidney que feishu on a topical renal apply spirit. Before and after the experiment began two weeks, four weeks collecting rat urine testing24hours24urine protein quantitative; After collecting the serum albumin detection (ALB), urea nitrogen (BUN), creatinine (Scr), total cholesterol (CHOL) and triglycerides (TG); Western Blot methods detection in kidney tissues across a cell membrane glycoprotein (nephrin), nuclear factor-K B, transformation growth factor-β level; Polymerase chain reaction detection in kidney tissues nephrin; Immunohisto chemical method in detecting kidney tissues apolipoprotein A-I (apoA-I) and decorin protein level.
Results:
1. The experiment day14, the28days, the model group, the control group and the treatment group was significantly lower than the normal rats weight group (P<0.01), model rats, weight and the treatment group was significantly lower than the control group (P<0.01), and the control group and the treatment group, weight is no obvious difference (P>0.05);
2. The experiment day14and28days, model group, the control group and the treatment rats,24h urine protein was significantly higher than normal group; And model group, compared to the control group and the treatment group24h urine protein quantity is restrained significantly (P<0.01); The treatment group24h urine protein28days of lower than that in control group (P<0.01);
After the end of experiment, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group serum albumin leels significantly lower P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group increased significantly (P<0.01); Treatment group was obviously higher than those in the control group (P<0.01);
After the end of experiment, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group of serum cholesterol, triglyceride levels increased significantly (P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group reduced significantly (P<0.01); Treatment group was obviously lower than that in control group (P<0.01);
Serum urea nitrogen and muscle groups with no significant differences between;
By light microscopy found normal rats, mesangial area without hyperplasia, sediment, basement membrane has not seen the pathological changes, capillary open good; Model rats, visible diffuse mesangial area broadens, and film cells, department of membrane matrix hyperplasia, capillary lumen; Tripterygium wilfordii much glucoside group and kidney apply spirit merger tripterygium wilfordii much glucoside in different degree of lesions reduce.
By electron microscopy, normal rats, glomerular basement membrane complete structure, the film has not seen the hyperplasia, clear and complete foot processes; Model group glomerular podocyte foot processes of widely fusion, the film substrate increased, thickening of glomerular basement membrane, the membrane cells and basement membrane not seen in obvious things electron dense deposits, the glomerular capillary open, endothelial cells mild swelling, etc. Tripterygium wilfordii much glucoside group and kidney apply spirit merger tripterygium wilfordii much glucoside in model group pathological changes significantly reduce group, the foot processes of fusion, the film substrate mild increase, glomerular basement membrane thickening ease.
3. The experiment ends, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group rats in the kidney tissues nf-kappa B, TGF-obviously up-regulated (P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group reduced significantly (P<0.01); Among them the nf-kappa B level of treatment group is obviously lower than those of the control group (P<0.01);
4. The experiment ends, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group rats in the kidney tissues nephrin protein expression obviously down-regulated (P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group increased significantly (P<0.01); Treatment group was obviously higher than those in the control group (P<0.01);
5. The experiment ends, compared with normal group, model group, the control group, the treatment group rats in the kidney tissues apoA-I level express significantly; And model group, compared to the control group and the treatment group increased significantly (P<0.01); Compared with the normal group, model group, the control group, the treatment group rats in the kidney tissues decorin express increased significantly (P<0.01); And model group, compared to the control group and the treatment group reduced significantly (P<0.01); Treatment group was obviously lower than in control group (P<0.01);
Conclusion:
1. Kidney apply spirit external merger tripterygium wilfordii more persistent nephrotic syndrome in improving glucoside rat nutrition, reduce albuminuria and serum cholesterol and triglycerides, and increase serum albumin is good effect.
Kidney apply spirit with external tripterygium wilfordii treatment plant more rats after kidney pathological change significantly reduce, apply for kidney spirit treatment refractory nephrosis rats, reduce the kidney damage provides histopathological on the basis.
2. Kidney apply spirit with external tripterygium wilfordii much glucoside can inhibit the nf-kappa B, TGF-β expression, reduce the persistent nephrotic syndrome rats of glomerular inflammation and damage to the conservation restraining glomerulus.
3. Kidney apply spirit with external tripterygium wilfordii much glucoside can through regulation foot cell and molecular nephrin protein, thus protecting glomerular stage of the diaphragm of the structure and function of integrity, to reduce refractory nephrosis rats proteinuria.
4. This study proves renal apply spirit with external tripterygium wilfordii much glucoside can can improve apoA-I, decorin expression, reflected in the improvement of lipid metabolism of the good function to protect the persistent nephrotic syndrome rats kidney from damage.
引文
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