美国红栌组培快繁体系的研究
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摘要
本试验主要围绕外植体灭菌、丛生芽诱导、丛生芽增殖、试管苗生根、试管苗出瓶炼苗移栽等几方面进行,集中研究不同灭菌方法的选择、不同基本培养基类型、不同激素配比和用量的选择、不同碳源、琼脂浓度、糖浓度以及抗氧化剂的选择等多方面相关问题。试验中的培养基方案均采用正交设计,数据采用SPSS软件分析。本文意图通过上述试验,全面研究美国红栌组培快繁各阶段的主要影响因素和最佳培养基配方,筛选出最优技术参数组合,建立美国红栌最优再生体系,进一步扩大美国红栌外植体选择范围,提高丛生芽增殖系数,进而提高美国红栌商业化生产效率,为美国红栌专业化育苗提供技术支持。
研究结果表明:
1.美国红栌外植体最佳的灭菌方法是:美国红栌外植体最佳的灭菌方法是:美国红栌茎段→洗衣粉上清液浸泡10min并用软刷刷去表面污垢→自来水冲洗30min→超静台上用70%酒精浸20S→无菌水冲洗2次→0.1%升汞浸8min→无菌水冲洗8次→将茎段两端切去0.5cm→100mg/LVC浸泡5分钟→接种→15℃的条件下光照培养,成功率达93.3%。
2.美国红栌腋芽诱导的最适宜培养基是MS+BA1.0 mg/L+NAA 0.1mg/L+活性炭1g/L+食糖30g/L+琼脂8g/L,pH5.8-6.0。
3美国红栌丛生芽继代增殖培养初期最适宜培养基配方是DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+食糖30g/L+琼脂8g/L,培养后期最适宜的培养基DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+食糖30g/L+琼脂8g/L。同时,还发现食糖、葡萄糖还是蔗糖对丛生芽增殖没有明显影响。培养基中添加水解乳蛋白(200mg/L)更加有利于美国红栌丛生芽的增殖。
4.适合美国红栌壮苗的培养基为MS+BA1.0 mg/L+ZT0.05 mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1.0g/L+食糖30g/L+琼脂8g/L。
5.影响美国红栌生根的主要因素有:基本培养基,生长素IBA、NAA。在试管苗诱导生根初期采用1/2MS+IBA0.5 mg/L+NAA0.05 mg/L+活性炭1.0 mg/L+食糖30g/L+琼脂8g/L可以诱导更多的试管苗生根。在培养后期,可以用1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.1 mg/L+活性炭2.0g/L+食糖30g/L+琼脂8g/L,以促进根数和根长的增加。同时发生根粉对生根没有显著影响,糖浓度对生根影响显著。
6.移栽时,美国红栌小苗先在室内炼苗一段时间,再进行移栽,试验发现泥炭+珍珠岩(3:2)是较好移栽基质,成活率可达40%以上,且小苗生长健壮。
The axillary buds of the Cotinus coggygria'Royal purple'were taken as explants to induce bud clumps and this regeneration way of propagation were studied in this experiment.This experiment resolved around the best ways to exterminate germs of explants,producing cluster buds,propagating cluster buds,strengthening test-tube shoots, engending roots and transplanting finally.The main contents focus on the following aspects:asepsis methods,basic mediums and raising modes,the combination and density of hormone,carbon source and different resisting oxidizing agent.The Orthogonal Design is adopted to arrange experiments,and all data analysis was dealt with by SPSS.Through the research above,the main effected factors and the suitable medium in each stage were researched fully,then the technique parameter combination were filtrated,the superior regeneration system about Cotinus coggygria'Royal purple' to expand the choice scope of explants,improve the propagation coefficient,and,thus enhancing Cotinus coggygria'Royal purple' commercial production efficiency,provide solution to the current market shortage of fine breed Cotinus coggygria'Royal purple',and technical support for professional nursery.
1.The result shows that the effective procedure of setting up asepsis shoots is follow: the axillary buds of the Cotinus coggygria'Royal purple' pedicels→washed by tap water→dipped in the detergent water about 10min and used a soft brush to clean the surface dirt→washed about 30min by tap water→putted on the extra-clean desk→dipped in 70%alcohol 20S Cotton to clean→washed 2times by asepsis water→dipped in the 0.1% HgCl_28min→washed 8 times by asepsis water→soaked in 100mg/LVC,the beginnin and the end was cut 0.5cm individually→water dried and the bracteal leaves sweeped away→inoculated→tranedunder the conditions of 15℃.the success rate is 93.3%.
2.The best inducement medium is MS+BA1.0 mg/L +NAA0.1 mg/L+AC 1g/L +sugar 30g/L + agar 8.0g/L,pH5.8-6.0.
3.During the bud lumps multiplication,at the initial period of culture,the best multiplication medium is DKW+BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L+sugar 30g/L + agar 8.0g/L, pH5.8-6.0.At the latter period of culture,he best multiplication medium is DKW+6-BA1.0mg/L +NAA0.05mg/L+sugar 30g/L + agar 8.0g/L,pH5.8-6.0.The effect of carbon source is not obvious.The medium which has LH(200mg/L) can improve the multiplication of bud clumps.The medium which has AC(1g/L) can inhibit the multiplication of bud clumps.
4.The best medium for promoting seedlings is MS+BA1.0mg/L+ZT0.05mg/L+ NAA0.1mg/L+AC1.0g/L + sugar 30g/L + agar 8g/L,pH 5.8-6.0.
5.The significant factors of rooting is medium,NAA,IBA.At the initial period of rooting,the best medium for rooting is 1/2MS +IBA0.5 mg/L+NAA0.05 mg/L+AC1.0 mg/L+sugar30g/L + agar 8.0g/L,pH5.8-6.0.At the latter period of rooting,we can use the medium of 1/2MS +IBA0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L+AC2.0 mg/L + sugar30g/L + agar8.0g/L, pH5.8-6.0 to increase the number of root and the length of root.The effects of the rooting powder on rooting is not obvious.The effects of the concentration of agar on rooting is obvious.
6.When transplanting,first,seedlings are forged in the room for 6days,then transplanted.Peat and perlite(3:2) is the best soilless media for Cotinus coggygria'Royal purple',the living rate can reach 40%,meanwhile,seedlings grow strongly,and leaves glitter and all of them are upstanding.
研究结果表明:
1.美国红栌外植体最佳的灭菌方法是:美国红栌外植体最佳的灭菌方法是:美国红栌茎段→洗衣粉上清液浸泡10min并用软刷刷去表面污垢→自来水冲洗30min→超静台上用70%酒精浸20S→无菌水冲洗2次→0.1%升汞浸8min→无菌水冲洗8次→将茎段两端切去0.5cm→100mg/LVC浸泡5分钟→接种→15℃的条件下光照培养,成功率达93.3%。
2.美国红栌腋芽诱导的最适宜培养基是MS+BA1.0 mg/L+NAA 0.1mg/L+活性炭1g/L+食糖30g/L+琼脂8g/L,pH5.8-6.0。
3美国红栌丛生芽继代增殖培养初期最适宜培养基配方是DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+食糖30g/L+琼脂8g/L,培养后期最适宜的培养基DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+食糖30g/L+琼脂8g/L。同时,还发现食糖、葡萄糖还是蔗糖对丛生芽增殖没有明显影响。培养基中添加水解乳蛋白(200mg/L)更加有利于美国红栌丛生芽的增殖。
4.适合美国红栌壮苗的培养基为MS+BA1.0 mg/L+ZT0.05 mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1.0g/L+食糖30g/L+琼脂8g/L。
5.影响美国红栌生根的主要因素有:基本培养基,生长素IBA、NAA。在试管苗诱导生根初期采用1/2MS+IBA0.5 mg/L+NAA0.05 mg/L+活性炭1.0 mg/L+食糖30g/L+琼脂8g/L可以诱导更多的试管苗生根。在培养后期,可以用1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.1 mg/L+活性炭2.0g/L+食糖30g/L+琼脂8g/L,以促进根数和根长的增加。同时发生根粉对生根没有显著影响,糖浓度对生根影响显著。
6.移栽时,美国红栌小苗先在室内炼苗一段时间,再进行移栽,试验发现泥炭+珍珠岩(3:2)是较好移栽基质,成活率可达40%以上,且小苗生长健壮。
The axillary buds of the Cotinus coggygria'Royal purple'were taken as explants to induce bud clumps and this regeneration way of propagation were studied in this experiment.This experiment resolved around the best ways to exterminate germs of explants,producing cluster buds,propagating cluster buds,strengthening test-tube shoots, engending roots and transplanting finally.The main contents focus on the following aspects:asepsis methods,basic mediums and raising modes,the combination and density of hormone,carbon source and different resisting oxidizing agent.The Orthogonal Design is adopted to arrange experiments,and all data analysis was dealt with by SPSS.Through the research above,the main effected factors and the suitable medium in each stage were researched fully,then the technique parameter combination were filtrated,the superior regeneration system about Cotinus coggygria'Royal purple' to expand the choice scope of explants,improve the propagation coefficient,and,thus enhancing Cotinus coggygria'Royal purple' commercial production efficiency,provide solution to the current market shortage of fine breed Cotinus coggygria'Royal purple',and technical support for professional nursery.
1.The result shows that the effective procedure of setting up asepsis shoots is follow: the axillary buds of the Cotinus coggygria'Royal purple' pedicels→washed by tap water→dipped in the detergent water about 10min and used a soft brush to clean the surface dirt→washed about 30min by tap water→putted on the extra-clean desk→dipped in 70%alcohol 20S Cotton to clean→washed 2times by asepsis water→dipped in the 0.1% HgCl_28min→washed 8 times by asepsis water→soaked in 100mg/LVC,the beginnin and the end was cut 0.5cm individually→water dried and the bracteal leaves sweeped away→inoculated→tranedunder the conditions of 15℃.the success rate is 93.3%.
2.The best inducement medium is MS+BA1.0 mg/L +NAA0.1 mg/L+AC 1g/L +sugar 30g/L + agar 8.0g/L,pH5.8-6.0.
3.During the bud lumps multiplication,at the initial period of culture,the best multiplication medium is DKW+BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L+sugar 30g/L + agar 8.0g/L, pH5.8-6.0.At the latter period of culture,he best multiplication medium is DKW+6-BA1.0mg/L +NAA0.05mg/L+sugar 30g/L + agar 8.0g/L,pH5.8-6.0.The effect of carbon source is not obvious.The medium which has LH(200mg/L) can improve the multiplication of bud clumps.The medium which has AC(1g/L) can inhibit the multiplication of bud clumps.
4.The best medium for promoting seedlings is MS+BA1.0mg/L+ZT0.05mg/L+ NAA0.1mg/L+AC1.0g/L + sugar 30g/L + agar 8g/L,pH 5.8-6.0.
5.The significant factors of rooting is medium,NAA,IBA.At the initial period of rooting,the best medium for rooting is 1/2MS +IBA0.5 mg/L+NAA0.05 mg/L+AC1.0 mg/L+sugar30g/L + agar 8.0g/L,pH5.8-6.0.At the latter period of rooting,we can use the medium of 1/2MS +IBA0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L+AC2.0 mg/L + sugar30g/L + agar8.0g/L, pH5.8-6.0 to increase the number of root and the length of root.The effects of the rooting powder on rooting is not obvious.The effects of the concentration of agar on rooting is obvious.
6.When transplanting,first,seedlings are forged in the room for 6days,then transplanted.Peat and perlite(3:2) is the best soilless media for Cotinus coggygria'Royal purple',the living rate can reach 40%,meanwhile,seedlings grow strongly,and leaves glitter and all of them are upstanding.
引文
[1]谭文澄,观赏植物组织培养技术[M]北京 中国林业出版社,1991.
[2]张明丽,李青,木本观赏植物组织培养及植株再生的研究进展[J]河北林业科技 2004(2)23-26.
[3]李浚明,植物组织培养教程[M]北京 北京农业大学出版社,1992.
[4]Niu G,Kozai T,Kitaya Y.Simulation of the time course of CO_2 concentratration in the culture vessel and net photosynthetic rate Of Cymbidium plantlets.Transactions ofthe ASAE,1996,39(4):567-573.
[5]吴丽君,木本植物组织培养技术在林业科研与生产中的应用与局限[J]福建林业科技2003,30(1):69-74.
[6]张明丽,,李青,木本观赏植物组织培养及植株再生的研究进展[J]河北林业科技2004(2)23-26.
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