“参芪脑保”治疗局灶性脑梗塞的药效学实验研究
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摘要
目的：
选用3种不同的动物模型及体外细胞培养的方法，研究中药参芪脑保颗粒对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用及其量效关系，并观察该药对肠系膜微血管血栓形成的预防作用，及对PC12细胞的营养和抗凋亡作用，从实验上证明该药治疗缺血性脑血管病的疗效。
方法：
1．采用光化学法诱导的大鼠局灶性脑缺血模型，于造模成功后3h始，给于参芪脑保颗粒剂溶液2ml／天灌胃，连续5天，动态观察体重及神经功能评分的变化。术后第5天取鼠脑，TTC染色后计算梗死灶体积，HE染色后观察病理学改变。
2．采用线栓法所致的大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，连续给药7天，观察大鼠48h的病死率及7天的存活率。术后第7天取鼠脑，计算梗死灶体积并观察病理学改变。
3．采用光化学诱导的大鼠肠系膜微血管血栓形成模型，实验前每日给予参芪脑保颗粒剂溶液2ml灌胃，连续5天，于第6天观察药物对肠系膜微血管血栓形成的影响。
4．采用细胞培养的方法和H_2O_2诱导细胞凋亡的方法，观察连续给药7天后，含参芪脑保的大鼠血清对PC12细胞的营养和抗凋亡作用。
结果：
1．参芪脑保颗粒可以减小光化学诱导的局灶脑梗死体积，其中大剂量组及中剂量组的梗死灶体积分别为5.56±2.41 mm~3、6.09±1.55 mm~3明显小
军医进修学院硕＿上学位论义 摘要
于对照组（1．54公．91 mffi勺o功刀of人 中剂量组治疗作用优于阳性对
照药金纳多门1．抡h．1们o叩刀5人量效关系显示：大剂量及中剂量有
效，小剂量组与对照组差别不显著0＞0．05）。
2．参蔑脑保组大鼠脑缺血再灌注后48小时的病死比率门门2）低于对照
组（6／12），7天存活率（9／12）高于对照组（6／12），梗死灶体积（26．51
5．Zmm’）较对照组（41．9士7。3mm’）明显减小（P＜0＊01）。
3．参茂脑保组大鼠在紫外光照后1分钟、IO分钟时，肠系膜微血管血栓
形成的长度较对照组小（P、0．05），血栓占管腔的面积比也较对照组小
o＜0刀5）。
4．参民脑保大、中、小剂量均可明显促进 PC 12 细胞的营养和增殖
（P＜0刀01），还可对抗100卜MN0。引起的＊CI二细胞调亡，其中大剂量
及中剂量组作用明显（P＜0．00）。
结论：
参民脑保颗粒对光化学诱导的大鼠局灶性脑缺血有治疗作用，可以减
轻线栓法所致的脑缺血后再灌注损伤。含参民脑保颗粒大鼠血清对微血管
内的血栓形成有预防作用，可促进PC12细胞的营养和增殖作用，并对HZOZ
诱导的细胞凋亡有保护作用。
Adjective:
To study the treatment effect of Senqi Naobao on focal cerebral ischemia in rats and the relationship between the curative effect and dose, observe its prevent effect on microvascular thrombosis in mesentery by using three different animal models. Furthermore we observed the roles of Senqi Naobao's nutrition and the anti-apoptosis on PC12 cells. We expected to identify the effect of Senqi Naobao on treatment of brain ischemia by animal experiment.
Methods:
1. By using the model of photochemistry-inducing focal cerebral ischemia in rats, we observed dynamical the change of weight and neurologic score started from 3 hours after the onset of ischemia. With Senqi Naobao pouring into stomach 2ml per day for 5 days, the rat brain was excised on day 5 after ischemia , , TTC staining was used for measuring infarct volumes and HE staining was used for observing the pathological change.
2. By using the model of thread embolizing-inducing focal cerebral ischemia-reperfusion in rats, we observed the ratio of death within 48 hours, the ratio of survival in 7 days, the infarct volume and pahthological alteration 7 days after reperfusion with Senqi Naobao poured into stomach for 7 days.
3. A model of microvascular thrombosis initiated by a photochemical
reaction in mesentery was used to observe the effect of Senqi Naobao on thrombosis in mesentery on sixth day with Senqi Naobao poured continually into stomach for 5 days before the experiment. 4. The roles of nutrition and anti-apoptosis of the rat serum containing Senqi Naobao on PC12 cell was also observed following the continual administration by using the methods of cell culture and H2O2-inducing cell apoptosis.
Results:
1. Senqi Naobao significantly reduced the volume of the infarct in large dose group and middle dose group compared with control (p<0. 001). The curative effect of middle dose group is more effective than Ginnaton group. The relationship between dose and effect demonstrated that large dose and middle dose is effective, however no significant differences were revealed between small dose group and control group(P>0. 05).
2. At Senqi Naobao group , the ratio of death 48 hours after ischemia reperfusion was lower than control group, and the ratio of survival 7 days after reperfusion was higher than control group. The infarct volume was significantly reduced in Senqi Naobao group compared with control(p<0.001).
3. The length of the thrombosis in mesentery microvascular illuminated by light in Senqi Naobao group is shorter than that of control within the time windows of 1 min and 10 min. At the same time point, the area ratio of thrombus to vein is also smaller
than control.
4. The number of PC12 cells was all increased significantly in the three doses groups of Senqi Naobao compared with control (P<0. 001). They also can suppress neuronal apoptosis induced by H202. Among the three dose groups, the effect of large dose group and middle dose group are stronger than control.
Conclusion:
The results shown that Senqi Naobao has a significant beneficial effect on focal cerebral ischemia induced by photochemistry in rats. It also can decrease the brain's damage associated with cerebral ischemia-reperfusion. The rat serum containing Senqi Naobao has the preventive effect on microvascular thrombosis; furthermore it can stimulate the proliferation of PC12 cells, and suppress neuronal apoptosis induced by
选用3种不同的动物模型及体外细胞培养的方法，研究中药参芪脑保颗粒对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用及其量效关系，并观察该药对肠系膜微血管血栓形成的预防作用，及对PC12细胞的营养和抗凋亡作用，从实验上证明该药治疗缺血性脑血管病的疗效。
方法：
1．采用光化学法诱导的大鼠局灶性脑缺血模型，于造模成功后3h始，给于参芪脑保颗粒剂溶液2ml／天灌胃，连续5天，动态观察体重及神经功能评分的变化。术后第5天取鼠脑，TTC染色后计算梗死灶体积，HE染色后观察病理学改变。
2．采用线栓法所致的大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，连续给药7天，观察大鼠48h的病死率及7天的存活率。术后第7天取鼠脑，计算梗死灶体积并观察病理学改变。
3．采用光化学诱导的大鼠肠系膜微血管血栓形成模型，实验前每日给予参芪脑保颗粒剂溶液2ml灌胃，连续5天，于第6天观察药物对肠系膜微血管血栓形成的影响。
4．采用细胞培养的方法和H_2O_2诱导细胞凋亡的方法，观察连续给药7天后，含参芪脑保的大鼠血清对PC12细胞的营养和抗凋亡作用。
结果：
1．参芪脑保颗粒可以减小光化学诱导的局灶脑梗死体积，其中大剂量组及中剂量组的梗死灶体积分别为5.56±2.41 mm~3、6.09±1.55 mm~3明显小
军医进修学院硕＿上学位论义 摘要
于对照组（1．54公．91 mffi勺o功刀of人 中剂量组治疗作用优于阳性对
照药金纳多门1．抡h．1们o叩刀5人量效关系显示：大剂量及中剂量有
效，小剂量组与对照组差别不显著0＞0．05）。
2．参蔑脑保组大鼠脑缺血再灌注后48小时的病死比率门门2）低于对照
组（6／12），7天存活率（9／12）高于对照组（6／12），梗死灶体积（26．51
5．Zmm’）较对照组（41．9士7。3mm’）明显减小（P＜0＊01）。
3．参茂脑保组大鼠在紫外光照后1分钟、IO分钟时，肠系膜微血管血栓
形成的长度较对照组小（P、0．05），血栓占管腔的面积比也较对照组小
o＜0刀5）。
4．参民脑保大、中、小剂量均可明显促进 PC 12 细胞的营养和增殖
（P＜0刀01），还可对抗100卜MN0。引起的＊CI二细胞调亡，其中大剂量
及中剂量组作用明显（P＜0．00）。
结论：
参民脑保颗粒对光化学诱导的大鼠局灶性脑缺血有治疗作用，可以减
轻线栓法所致的脑缺血后再灌注损伤。含参民脑保颗粒大鼠血清对微血管
内的血栓形成有预防作用，可促进PC12细胞的营养和增殖作用，并对HZOZ
诱导的细胞凋亡有保护作用。
Adjective:
To study the treatment effect of Senqi Naobao on focal cerebral ischemia in rats and the relationship between the curative effect and dose, observe its prevent effect on microvascular thrombosis in mesentery by using three different animal models. Furthermore we observed the roles of Senqi Naobao's nutrition and the anti-apoptosis on PC12 cells. We expected to identify the effect of Senqi Naobao on treatment of brain ischemia by animal experiment.
Methods:
1. By using the model of photochemistry-inducing focal cerebral ischemia in rats, we observed dynamical the change of weight and neurologic score started from 3 hours after the onset of ischemia. With Senqi Naobao pouring into stomach 2ml per day for 5 days, the rat brain was excised on day 5 after ischemia , , TTC staining was used for measuring infarct volumes and HE staining was used for observing the pathological change.
2. By using the model of thread embolizing-inducing focal cerebral ischemia-reperfusion in rats, we observed the ratio of death within 48 hours, the ratio of survival in 7 days, the infarct volume and pahthological alteration 7 days after reperfusion with Senqi Naobao poured into stomach for 7 days.
3. A model of microvascular thrombosis initiated by a photochemical
reaction in mesentery was used to observe the effect of Senqi Naobao on thrombosis in mesentery on sixth day with Senqi Naobao poured continually into stomach for 5 days before the experiment. 4. The roles of nutrition and anti-apoptosis of the rat serum containing Senqi Naobao on PC12 cell was also observed following the continual administration by using the methods of cell culture and H2O2-inducing cell apoptosis.
Results:
1. Senqi Naobao significantly reduced the volume of the infarct in large dose group and middle dose group compared with control (p<0. 001). The curative effect of middle dose group is more effective than Ginnaton group. The relationship between dose and effect demonstrated that large dose and middle dose is effective, however no significant differences were revealed between small dose group and control group(P>0. 05).
2. At Senqi Naobao group , the ratio of death 48 hours after ischemia reperfusion was lower than control group, and the ratio of survival 7 days after reperfusion was higher than control group. The infarct volume was significantly reduced in Senqi Naobao group compared with control(p<0.001).
3. The length of the thrombosis in mesentery microvascular illuminated by light in Senqi Naobao group is shorter than that of control within the time windows of 1 min and 10 min. At the same time point, the area ratio of thrombus to vein is also smaller
than control.
4. The number of PC12 cells was all increased significantly in the three doses groups of Senqi Naobao compared with control (P<0. 001). They also can suppress neuronal apoptosis induced by H202. Among the three dose groups, the effect of large dose group and middle dose group are stronger than control.
Conclusion:
The results shown that Senqi Naobao has a significant beneficial effect on focal cerebral ischemia induced by photochemistry in rats. It also can decrease the brain's damage associated with cerebral ischemia-reperfusion. The rat serum containing Senqi Naobao has the preventive effect on microvascular thrombosis; furthermore it can stimulate the proliferation of PC12 cells, and suppress neuronal apoptosis induced by
引文
1．李求兵，黄柳华，中医药治疗急性脑梗塞的机制研究进展。中日友好医院学报，2000，14 (6)：347-351。
2．毛小平，陈秀芳，张玲等，补阳还五汤提取物对脑缺血再灌注后一氧化氮合酶活性的影响。卒中与神经疾病，2001，8 (2)：103-104。
3．刘军，匡培根，李斌等，丹参对大鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的实验研究。中国神经免疫学和神经病学杂志，1998，5 (2)：77。
4．陈淑清，颜芳，徐德俊等，补阳还五汤颗粒剂的药效学和急性毒性。华西药学杂志，2000，15 (4)：259-261。
5．刘军，吴卫平，匡培根，丹参在缺血再灌注时的神经保护作用：成纤维细胞生长因子上调。中国神经免疫学和神经病学杂志，1996，3(4)：225-229。
6．陈奇主编，中药药理研究方法学，第1版，人民卫生出版社，1993。
7. Bederson JB, Pitts LH, Davis RL, et al. Rat middle cerebral artery occlusion: Evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke, 1986,17(3): 472-476.
8. Zea Longa EL, Weinstein PR, Carlson S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke, 1989,20(1):84.
9. Marmarou A. An improved gravimetric measure of infarction-a prospective study. Stroke, 1986,17:179.
10．杨文清，施新猷等，光化学法致大鼠脑血栓及水蛭提取物的治疗作用，上海实验动物科学 19 (4)：197—200，1999。
11．陈东，赵贵德，考宏盛，缺血性脑卒中发病机制研究新进展。国外医学神经病学神经外科学分册，2001，28 (1)：32-34。
12. Siesjo BK, Zhao Q, Pahlmark K et al. Glutamate,calcium, and free redicals as mediators of ischemia brain damage, Ann Thorac Surg, 1995;59(5): 1316-1320.
13．刘宏，吴平生，全脑缺血再灌注后发生迟发性神经元死亡的机制。国外医学生理、病理科学与临床分册，1999，19 (5)：379-381。
14. Hirose K.Chan P H. Blockade of glutamate excitability and its clinical applications. J Neurochem Res, 1993,18:479.
15．姜亚军，何树声，丁德云，脑缺血再灌注时白细胞与脑血管内皮细胞粘附机制研究进展。国外医学生理、病理科学与临床分册，1996，16 (4)：283-285。
16. Watson BD, Dietrich WD, Busto R, et al..Induction of Fatre UN. An improved photochemical model of embolic cerebral infarction in rats, Strock, 1997,22:225
17. Bederson JB, Pitts LH, Germano SM, et al. Evaluation of 2,3,5-triphenylertazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats. Stroke, 1986; 17:1305—1308.
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27．褚晓凡，董家政，吴军等，颈内动脉线栓与环扎建立大鼠局灶脑缺血再灌模型。中风与神经疾病杂志，2000，17 (3)：152-154。
28．王伟，严格控制实验条件，建立标准化脑缺血动物模型。中华神经科杂志，1998，31 (5)：261-263。
29．关云谦，孙明，徐超，大鼠颈内动脉线栓法制备局灶性脑缺血模型及影响因素。国外医学脑血管疾病分册，2001，9 (3)：151-153。
30．辛世萌，刘远洪，聂志余，栓线长度、直径及大鼠体重与栓线法大鼠局灶性脑缺血模型关系的研究。大连医科大学学报，2000，22 (2)：105-107。
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