苹果渣基质柠檬酸产生菌株的选育及固态发酵条件研究
|
摘要
随着世界范围内对农副产品及工农业生产废弃物综合开发利用研究的日渐深入，我
国对农产品深加工的研究工作也逐渐被提到了议事日程，尤其是用产量比较大，成本比
较低的农副产品来生产一些附加值比较高的产品的研究开发工作越来越受到人们的重
视。本研究就以我省乃至我国年产量非常大的农副产品苹果渣作为原料，比较系统的进
行了以苹果渣为原料的柠檬酸固态发酵研究，得到了以下研究结果。
１． 不同预处理对苹果渣还原糖含量的影响。通过对四种不同的预处理即高温处理、
水解处理、酶解处理和菌解处理对苹果渣还原糖含量的影响分析，结果表明：（１）高温
处理对苹果渣中还原糖含量变化影响不大。高温处理时，相对高温（１２１℃）较短时间
（４０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ）处理，苹果渣中还原糖含量呈下降趋势；相对低温（１００℃、１１４℃）
长时间（８０ｍｉｎ）处理，苹果渣中还原糖含量则会增加，但高温处理引起的苹果渣还原糖
含量变化幅度总的来说不是很大。 （２） 苹果渣水解后，水解物中还原糖含量显著增加，
且其含量随着水解时间的增加而增加。工业化生产时，当水解 ｐＨ＝１，Ｔ＝１２１℃时，２０ｍｉｎ
为比较合适的水解时间。（３） 在使用三种商品纤维素酶酶解苹果渣后，三种酶酶解物中
的还原糖含量均明显升高。三种纤维素酶中，３＃酶酶解苹果渣效果最好。（４） 菌解苹果
渣时，在本研究所选用的 ２１ 株菌中，有 １１ 株在纯苹果渣基质上生长良好，ＦＧ０３、ＦＧ０７、
ＦＧ１０、ＦＧ１１ 四株菌均能有效的降解苹果渣，其中 ＦＧ０３ 降解效果最好。
２． 野生高效柠檬酸产生菌株的筛选。本研究分别以纯固体苹果渣、苹果渣的 ３ 种酶
解物和酶解液，以及 １０％葡萄糖溶液为基质，以 １７ 株野生黑曲霉菌株作为供试菌种，分
别进行了 １７ 株供试菌的固体发酵和液体摇瓶发酵两种发酵方式的柠檬酸发酵试验。并通
过 ＳＡＳ 软件系统中的二因素随机区组试验结果的方差分析对发酵试验的结果进行了统计
分析，同时对部分发酵液进行了纸层析分析。结果表明：在供试的 １７ 株野生黑曲霉菌株
中，ＦＧ１５、ＦＧ１７、ＦＧ２３、ＦＧ２６、ＦＧ３０、ＦＧ４１、ＦＧ４５ 等 ７ 株菌不但柠檬酸产生能力较高，
而且在不同基质上产酸性能也比较稳定，杂酸生成少，是柠檬酸发酵及用于进行柠檬酸
高产优良菌株诱变育种时的理想菌株。
３． 紫外线、６０Ｃｏ－γ 射线诱变育种。对初筛出的 ７ 株野生黑曲霉菌株进行紫外线诱
变和 Ｃｏ－γ 射线诱变时，７ 株菌的致死率都呈现出随紫外线和 Ｃｏ－γ 射线照射时间的
６０ ６０
增加而增加的趋势，但对于同一种诱变剂而言，在同一辐照剂量下，不同的菌株对其的
耐受能力不同。作为一种可用于对柠檬酸产生菌进行筛选的溴甲酚绿指示剂－平板筛选方
I
法，该法不但快速、简便，而且测定值非常准确，可靠。７ 株野生黑曲霉菌株经紫外线
诱变后，共获得了 ８９ 株正向突变株，其中有 ２３ 株正突变株的产酸性能比出发菌株显著
提高。经 Ｃｏ－γ 射线辐照诱变后，共获得 ９１ 株正向突变株，４０ 株负突变株，其中有 ２５
６０
株正向突变株的产酸性能比出发菌株明显提高。ＦＧ２３－１５－１、ＦＧ２３－１５－３、ＦＧ２６－１５－１、
ＦＧ２６－１５－４、ＦＧ３０－１５－１、４５－１７－２、ＦＧ４１－１５－１、ＦＧ１７－１５－７、 ＦＧ２３－１３－３（γ）、ＦＧ１５－９－８
（γ）、ＦＧ１７－９－５（γ）、ＦＧ４５－１３－２（γ）、ＦＧ２６－９－５（γ）等突变株与原出发菌株相比
较，其柠檬酸产生能力均有了很大的提高，是可用于进行柠檬酸生产的优良菌株。但对
于一些产酸能力本身就比较高的野生菌株，经紫外线和 Ｃｏ－γ 射线诱变后正突变率均比
６０
较低，产酸率提高也不显著。另外，对于相同的出发菌株，虽然使用不同的诱变剂，但
在中等诱变剂量时均表现出高正突变率，且柠檬酸产率增长幅度较大；而高诱变剂量均
表现出高致死率、高负突变率的情况。与此同时，在中等辐照剂量下，部分突变株的菌
落特征也发生了某些变化，而且经紫外线诱变后同一株菌 Ｋ 值变化的大小程度明显要高
于经同位素 Ｃｏ－γ 射线辐照诱变后的变化程度。
６０
４．柠檬酸发酵的影响因素及工艺条件研究。对以苹果渣为原料固态发酵生产柠檬酸
的若干影响因素及工艺条件进行了研究，探讨了菌种、发酵温度、ｐＨ、发酵时间、Ｎ 源
种类及添加量、产酸促进剂的添加等因素对柠檬酸产率的影响。结果表明：（１） 对以苹
果渣为基质的固态柠檬酸发酵，本研究诱变出的 ＦＧ２３－１３－３（γ）为比较合适的菌种。（２）
当使用 ＦＧ２３－１３－３（γ）作为发酵菌种发酵苹果渣时，柠檬酸产率较高的最适当发酵温度
应保持在 ２６—２８℃，且发酵 ９６ｈ 后样品中柠檬酸含量达到最大值。（３） 三种化学氮源
ＮＨ４ＮＯ３、ＮＨ４ＣＬ 和 ＣＯ（ＮＨ２）２都可作为发酵基质的有效氮源，但相比较之下，ＮＨ４ＮＯ３作为氮源
With the study in multipurposly exploiting and using agricultural byproducts and the waste
residue during the manufacture of industry and agriculture more and more thoroughly in
worldwide,the study in deeply processing agricultural products in our country was paid
attention gradually,especially the research in using some agricultural byproducts which have
the comparatively high output and cheap cost to produce some products that can be sold with
high price was attaching importance to more and more people.In this paper,the study of the
influence to the raw material by pretreatment,the mutation breeding ,the influence elements 、
condition to the fermentation and producing citric acid from apple pomace which annual
yield is very high in our province ,even in our country, by the method of Aspergillus niger
solidstate fermentation was carried on systemly.The results were followed:
1. The influce to the content of reducing sugar in apple pomace with different pretreatment.
The study of the influence of four different pretreatment-hightemperaturetreatment,
hydrolysistreatment, cellulose enzyme treatment and fungi treatment to the content of reducing
sugar was carried on, the results showed:(1) The content of reducing sugar was increased
unnotably after the treatments of high temperature . Comparatively high temperature(121℃)
and short time(40min,60min) treatment,the content of reducing sugar in apple pomace showed
the tendency of decline;relatively low temperature(100℃,114℃) and long time(80min)
treatment,the content of reducing sugar in apple pomace appeared to increase,but the change
range of the content of the reducing sugar in apple pomace which caused by high temperature
was not high in the whole.(2) After apple pomace hydrolyzed, the content of reducing sugar
increased obviously in hydrolyte, moreover,the content increased with the time rised.When the
production industrialized, if hydrolysis pH=1,T=121℃,20min is the relatively suitable time.(3)
After the apple pomace was degraded by three kinds of cellulose enzyme,the content of
reducing sugar in apple pomace increased notably also.Among three cellulose enzyme,the
result of enzymolysis of 3# enzyme was best.(4)When used fungi to degrade the apple
III
pomace,if the 21strains of fungi which be selected in the study,11 strains could grow in pure
apple pomace and FG03, FG07, FG10, FG11 could degrade the apple pomace effectively,
among those,FG03 was the best.
2.The results of selecting uncultivated fungi which could produce citric acid in high
efficiency.In this study,the pure solidstate apple pomace, three kinds of solidstate and
liquidstate apple pomace,which was degraded by three cellulose enzyme,the 10% glucose
solution were used as fermentable culture medium and 17 strains of uncultivated Aspergillus
niger were used as primitive strains to carry out the citric acid fermentation experiment by two
ways of solidstate and liquidstate fermentation.the results of experiment were processed by
SAS(stastistic Analysis system),some of fermentation liquid was analysised by paper
chromatography. The results showed that among 17strains of uncultivated Asp.niger
provided,7 strains, FG15,FG17,FG23,FG26,FG30,FG41,FG45 etc. not only have high ability
to produce cetric acid ,but their natural production capcities in different culture medium were
fairly stable,other acid can not be found in fermentation liquids.Those 7 strains of Asp.niger
were the ideal fungi which can be used to produce citric acid and mutate to ferment apple
pomance producing citric acid effectively.
3.The results of mutation breeding by ultraviolet and isotope Co-?ray. When 7 strains of
60
uncultivatec Asp.niger that were selected from 17 strains were induced by ultraviolet ray and
60Co-?ray,the tendency of all 7strains’kill rates rised with the time increaced,but for one
specific mutagen,different strain had different durability
国对农产品深加工的研究工作也逐渐被提到了议事日程，尤其是用产量比较大，成本比
较低的农副产品来生产一些附加值比较高的产品的研究开发工作越来越受到人们的重
视。本研究就以我省乃至我国年产量非常大的农副产品苹果渣作为原料，比较系统的进
行了以苹果渣为原料的柠檬酸固态发酵研究，得到了以下研究结果。
１． 不同预处理对苹果渣还原糖含量的影响。通过对四种不同的预处理即高温处理、
水解处理、酶解处理和菌解处理对苹果渣还原糖含量的影响分析，结果表明：（１）高温
处理对苹果渣中还原糖含量变化影响不大。高温处理时，相对高温（１２１℃）较短时间
（４０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ）处理，苹果渣中还原糖含量呈下降趋势；相对低温（１００℃、１１４℃）
长时间（８０ｍｉｎ）处理，苹果渣中还原糖含量则会增加，但高温处理引起的苹果渣还原糖
含量变化幅度总的来说不是很大。 （２） 苹果渣水解后，水解物中还原糖含量显著增加，
且其含量随着水解时间的增加而增加。工业化生产时，当水解 ｐＨ＝１，Ｔ＝１２１℃时，２０ｍｉｎ
为比较合适的水解时间。（３） 在使用三种商品纤维素酶酶解苹果渣后，三种酶酶解物中
的还原糖含量均明显升高。三种纤维素酶中，３＃酶酶解苹果渣效果最好。（４） 菌解苹果
渣时，在本研究所选用的 ２１ 株菌中，有 １１ 株在纯苹果渣基质上生长良好，ＦＧ０３、ＦＧ０７、
ＦＧ１０、ＦＧ１１ 四株菌均能有效的降解苹果渣，其中 ＦＧ０３ 降解效果最好。
２． 野生高效柠檬酸产生菌株的筛选。本研究分别以纯固体苹果渣、苹果渣的 ３ 种酶
解物和酶解液，以及 １０％葡萄糖溶液为基质，以 １７ 株野生黑曲霉菌株作为供试菌种，分
别进行了 １７ 株供试菌的固体发酵和液体摇瓶发酵两种发酵方式的柠檬酸发酵试验。并通
过 ＳＡＳ 软件系统中的二因素随机区组试验结果的方差分析对发酵试验的结果进行了统计
分析，同时对部分发酵液进行了纸层析分析。结果表明：在供试的 １７ 株野生黑曲霉菌株
中，ＦＧ１５、ＦＧ１７、ＦＧ２３、ＦＧ２６、ＦＧ３０、ＦＧ４１、ＦＧ４５ 等 ７ 株菌不但柠檬酸产生能力较高，
而且在不同基质上产酸性能也比较稳定，杂酸生成少，是柠檬酸发酵及用于进行柠檬酸
高产优良菌株诱变育种时的理想菌株。
３． 紫外线、６０Ｃｏ－γ 射线诱变育种。对初筛出的 ７ 株野生黑曲霉菌株进行紫外线诱
变和 Ｃｏ－γ 射线诱变时，７ 株菌的致死率都呈现出随紫外线和 Ｃｏ－γ 射线照射时间的
６０ ６０
增加而增加的趋势，但对于同一种诱变剂而言，在同一辐照剂量下，不同的菌株对其的
耐受能力不同。作为一种可用于对柠檬酸产生菌进行筛选的溴甲酚绿指示剂－平板筛选方
I
法，该法不但快速、简便，而且测定值非常准确，可靠。７ 株野生黑曲霉菌株经紫外线
诱变后，共获得了 ８９ 株正向突变株，其中有 ２３ 株正突变株的产酸性能比出发菌株显著
提高。经 Ｃｏ－γ 射线辐照诱变后，共获得 ９１ 株正向突变株，４０ 株负突变株，其中有 ２５
６０
株正向突变株的产酸性能比出发菌株明显提高。ＦＧ２３－１５－１、ＦＧ２３－１５－３、ＦＧ２６－１５－１、
ＦＧ２６－１５－４、ＦＧ３０－１５－１、４５－１７－２、ＦＧ４１－１５－１、ＦＧ１７－１５－７、 ＦＧ２３－１３－３（γ）、ＦＧ１５－９－８
（γ）、ＦＧ１７－９－５（γ）、ＦＧ４５－１３－２（γ）、ＦＧ２６－９－５（γ）等突变株与原出发菌株相比
较，其柠檬酸产生能力均有了很大的提高，是可用于进行柠檬酸生产的优良菌株。但对
于一些产酸能力本身就比较高的野生菌株，经紫外线和 Ｃｏ－γ 射线诱变后正突变率均比
６０
较低，产酸率提高也不显著。另外，对于相同的出发菌株，虽然使用不同的诱变剂，但
在中等诱变剂量时均表现出高正突变率，且柠檬酸产率增长幅度较大；而高诱变剂量均
表现出高致死率、高负突变率的情况。与此同时，在中等辐照剂量下，部分突变株的菌
落特征也发生了某些变化，而且经紫外线诱变后同一株菌 Ｋ 值变化的大小程度明显要高
于经同位素 Ｃｏ－γ 射线辐照诱变后的变化程度。
６０
４．柠檬酸发酵的影响因素及工艺条件研究。对以苹果渣为原料固态发酵生产柠檬酸
的若干影响因素及工艺条件进行了研究，探讨了菌种、发酵温度、ｐＨ、发酵时间、Ｎ 源
种类及添加量、产酸促进剂的添加等因素对柠檬酸产率的影响。结果表明：（１） 对以苹
果渣为基质的固态柠檬酸发酵，本研究诱变出的 ＦＧ２３－１３－３（γ）为比较合适的菌种。（２）
当使用 ＦＧ２３－１３－３（γ）作为发酵菌种发酵苹果渣时，柠檬酸产率较高的最适当发酵温度
应保持在 ２６—２８℃，且发酵 ９６ｈ 后样品中柠檬酸含量达到最大值。（３） 三种化学氮源
ＮＨ４ＮＯ３、ＮＨ４ＣＬ 和 ＣＯ（ＮＨ２）２都可作为发酵基质的有效氮源，但相比较之下，ＮＨ４ＮＯ３作为氮源
With the study in multipurposly exploiting and using agricultural byproducts and the waste
residue during the manufacture of industry and agriculture more and more thoroughly in
worldwide,the study in deeply processing agricultural products in our country was paid
attention gradually,especially the research in using some agricultural byproducts which have
the comparatively high output and cheap cost to produce some products that can be sold with
high price was attaching importance to more and more people.In this paper,the study of the
influence to the raw material by pretreatment,the mutation breeding ,the influence elements 、
condition to the fermentation and producing citric acid from apple pomace which annual
yield is very high in our province ,even in our country, by the method of Aspergillus niger
solidstate fermentation was carried on systemly.The results were followed:
1. The influce to the content of reducing sugar in apple pomace with different pretreatment.
The study of the influence of four different pretreatment-hightemperaturetreatment,
hydrolysistreatment, cellulose enzyme treatment and fungi treatment to the content of reducing
sugar was carried on, the results showed:(1) The content of reducing sugar was increased
unnotably after the treatments of high temperature . Comparatively high temperature(121℃)
and short time(40min,60min) treatment,the content of reducing sugar in apple pomace showed
the tendency of decline;relatively low temperature(100℃,114℃) and long time(80min)
treatment,the content of reducing sugar in apple pomace appeared to increase,but the change
range of the content of the reducing sugar in apple pomace which caused by high temperature
was not high in the whole.(2) After apple pomace hydrolyzed, the content of reducing sugar
increased obviously in hydrolyte, moreover,the content increased with the time rised.When the
production industrialized, if hydrolysis pH=1,T=121℃,20min is the relatively suitable time.(3)
After the apple pomace was degraded by three kinds of cellulose enzyme,the content of
reducing sugar in apple pomace increased notably also.Among three cellulose enzyme,the
result of enzymolysis of 3# enzyme was best.(4)When used fungi to degrade the apple
III
pomace,if the 21strains of fungi which be selected in the study,11 strains could grow in pure
apple pomace and FG03, FG07, FG10, FG11 could degrade the apple pomace effectively,
among those,FG03 was the best.
2.The results of selecting uncultivated fungi which could produce citric acid in high
efficiency.In this study,the pure solidstate apple pomace, three kinds of solidstate and
liquidstate apple pomace,which was degraded by three cellulose enzyme,the 10% glucose
solution were used as fermentable culture medium and 17 strains of uncultivated Aspergillus
niger were used as primitive strains to carry out the citric acid fermentation experiment by two
ways of solidstate and liquidstate fermentation.the results of experiment were processed by
SAS(stastistic Analysis system),some of fermentation liquid was analysised by paper
chromatography. The results showed that among 17strains of uncultivated Asp.niger
provided,7 strains, FG15,FG17,FG23,FG26,FG30,FG41,FG45 etc. not only have high ability
to produce cetric acid ,but their natural production capcities in different culture medium were
fairly stable,other acid can not be found in fermentation liquids.Those 7 strains of Asp.niger
were the ideal fungi which can be used to produce citric acid and mutate to ferment apple
pomance producing citric acid effectively.
3.The results of mutation breeding by ultraviolet and isotope Co-?ray. When 7 strains of
60
uncultivatec Asp.niger that were selected from 17 strains were induced by ultraviolet ray and
60Co-?ray,the tendency of all 7strains’kill rates rised with the time increaced,but for one
specific mutagen,different strain had different durability
引文
［１］ 张晓蓉． 柠檬酸生产现状、市场及发展前景［Ｊ］． 四川化工，２００１，（４）：３１－３４
［２］ 金其荣、张继民、徐勤编著．有机酸发酵工艺学［Ｍ］．中国轻工出版社，１９９７
［３］ 周日尤． 我国柠檬酸的生产应用与开发［Ｊ］． 江苏化工，２００１，２９（５）：１０－１３
［４］ 汪多仁． 柠檬酸的国外市场动态和我们的对策［Ｊ］． 中国食品用化学品，１９９９（１）：１－６
［５］ 戎志梅． 新型生物化工产品投产指南［Ｍ］． 沈阳：辽宁科学技术出版社，１９９６
［６］ 于春梅、满俊． 我国柠檬酸生产概况和发展前景［Ｊ］． 化工开发与设计，２０００（２３），３８－４０
［７］ 于春梅、满俊． 世界柠檬酸生产概况及前景展望［Ｊ］． 现代化工，２０００，２０（１１）：５５－５８
［８］ Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｅｗｓ． ２０００，７２（６－１２）： ４
［９］ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍａｒｋｅｔ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ． ２０００，２５７（３）：４
［１０］ 中国化工信息中心． 中国化学工业年鉴． １９９８／１９９９（４０）
［１１］ 韩秋燕． 纵观全球柠檬酸工业．精细与专用化学品［Ｊ］． ２０００（８）：９－１０
［１２］ 阮仕立、王西锐．苹果酒的开发研究进展［Ｊ］．食品与发酵工业，２０００，２７（４）：７５－７７
［１３］ 杨福有等． 陕西苹果渣生产利用现状调查［Ｊ］． 陕西农业科学，１９９４（４）：２９－３０
［１４］ 李丙智等． 苹果产业发展现状与趋势—陕西农业新兴产业现状与发展［Ｍ］． 西安地图出
版社，１９９７
［１５］ 傅斌、林祥斌． 苹果渣的综合利用［Ｊ］． 中国果品研究，１９８９（２）：１９－２０
［１６］ 李巨秀、李志西、杨明泉等．果渣资源的综合利用［Ｊ］．西北农林科技大学学报（自然科学版），
２００２，（９）：１０３－１０６
［１７］ 李锡钧．苹果皮渣的综合利用［Ｊ］．包装与食品机械．２００１，１９（３）：２
［１８］ 赵国建．苹果皮渣的综合利用［Ｊ］．农牧产品开发，１９９７，（８）：３３－３４
［１９］ Ｊｏｓｈｉ Ｖ Ｋ， Ｋａｕｓｈａｌ Ｎ Ｋ，Ｔｈａｌｕｒ Ｎ Ｓ． Ａｐｐｌｅ ｐｏｍａｃｅ ｓａｕｃｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ
ｆｒｅｓｈ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｎａｌ ｏｆ ｆｏｏｄ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｉｎｄｉａ ． １９９６，３３
（５）：４１４－４１７
［２０］ 陈喜英、张鸣岐．苹果渣青贮及饲喂奶牛的效果［Ｊ］．河南畜牧兽医，２０００，（２）：１８－１９
［２１］ 郭维烈、郭庆华．固体发酵可强化基质蛋白［Ｊ］． 中国饲料，１９９６，（６）：４１－４２
［２２］ 郗丽兰．菌体饲料开发研究综述［Ｊ］．粮食与饲料工业，１９９４（１）：３６－３８
［２３］ 谢玺文、张翠霞、陈丽媛等．饲用微生物的应用前景及研究现状［Ｊ］．微生物学杂志，２００１，２１
（１）：４７－４９
［２４］ Ｈ Ｗａｎｇ Ｊ Ｋ， ｋｉｍ Ｃ Ｔ，ｋｉｍ Ｃ Ｊ， ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｐｌｅ ｐｏｍａｃｅ ｂｙ ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ ａｓ ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ
ｐｅｃｔｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ［Ｊ］， ＩＦＴ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ： ｂｏｏｋ ｏｆ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ １９９６，１１１－１１２
［２５］ Ｔｒａｎｃ Ｔ，Ｍ． Ｉｔｃｈｅｌｌ Ｄ Ａ． ｐｉｎｅａｐｐｌｅ ｗａｓｔｅ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｕｂｓｔｒａｃｔｓ ｆｏｒ ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｂｙ ｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｃｔｅｒｓ ，１９９５，１７（１０）：１１０７－１１１０
［２６］ Ｊｏｓｈｉｖ Ｋ ．ｓａｎｄｈｕ ．Ｄ Ｋ． ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖａｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｆｅｅｄ ｂｙ ｐｒｏｄｕｃｔ ｐｒｏｄｕｃｅｄ
ｂｙ ｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｐｌｅ ｐｏｍａｃｅ［Ｊ］， Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９５，
５６（２／３）：２５１－２５５
［２７］ Ｓｈａｈ Ｇ．Ｈ Ｍａｓｏｏｄｉ Ｆ．Ａ． ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｗａｓｔｅｓ ｆｒｏｍ ａｐｐｌｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ
ｐｌａｎｔｓ ［Ｊ］．Ｉｎｄｉａ Ｆｏｏｄ ｐａｃｋｅｒ．１９９６，４８（５）：４７－５２
·58· 苹果渣基质柠檬酸产生菌株的选育及固态发酵条件研究
［２８］ 吴金鹏主编． 食品微生物学． 中国农业出版社［Ｍ］，１９９０，２３５－２４０
［２９］ 王晋杰、尚文博． 苹果渣的综合开发与利用［Ｊ］． 饲料研究，２０００，（３）：１３－１６
［３０］ 李彩凤、杨福有． 苹果渣的营养成分及利用［Ｊ］． 饲料博览，２００１，（２）：３８
［３１］ 无锡轻工业学院等． 食品微生物学［Ｍ］． 轻工业出版社，１９８３
［３２］ 华南工学院等． 发酵工程与设备［Ｍ］． 轻工业出版社，１９８５
［３３］ Ｂｒｉａｎ Ｊ． Ｂ． Ｗｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ Ｆｏｏｄｓ， １９８５
［３４］ 武汉大学、复旦大学合编． 微生物学［Ｍ］． 高等教育出版社，１９８７
［３５］ 沈同、王镜岩． 生物化学［Ｍ］． 高等教育出版社，１９９１
［３６］ 朱亨政．柠檬酸发酵的生物化学机制［Ｊ］．工业微生物，１９８１，（３）：４７－４９
［３７］ 颜方贵主编． 发酵微生物学［Ｍ］． 中国农业大学出版社，１９９１
［３８］ 江汉湖主编．食品微生物学［Ｍ］．中国农业出版社，２００１
［３９］ 朱亨政．柠檬酸发酵生产研究［Ｊ］．食品与发酵工业，１９８４，２１（４）：３６３－３６９
［４０］ Ａ Ｈ ｒｏｓｅ． Ｐｒｉｍａｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．１９７８
［４１］ 陈 声．有机酸发酵生产技术［Ｍ］．工业微生物，１９８７（３２）：２５－２７
［４２］ 朱亨政、李妙珍、劳文香等．甘蔗糖蜜深层发酵柠檬酸的研究［Ｊ］． 工业微生物，１９８３，（５）：
１２
［４３］ Ｅｖａｒｓ， Ｇ．Ｔ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｍｉｃｒｏｂ， Ｍｅｔｈｏｄｓ， １９８５ ，４，３／４， ２０３－２１０
［４４］ 周定、王建龙．柠檬酸产生菌黑曲霉诱变选育的研究［Ｊ］．微生物学杂志，１９９３，２（１３）：４－７
［４５］ 朱亨政、候勤芳、杨芸芳等．高浓度薯干直接发酵柠檬酸的研究［Ｊ］．微生物学报，１９８１，２１
（３）：３６３－３６６
［４６］ 孔玉，柠檬酸生产菌种的改良［Ｊ］． 柠檬酸科技交流，１９９２，（４）：２０－２０
［４７］ 王建龙、侯文华、周定．柠檬酸发酵生产技术新进展［Ｊ］．工业微生物．１９９３，２３（５）２１—２７
［４８］ 上海工微所：微生物学通报［Ｊ］．１９７８，（１２）：５
［４９］ 朱亨政． 柠檬酸发酵．食品与发酵工业［Ｊ］．１９９４，（６）：６９—７４
［５０］ 朱亨政、赵国础、王熙萍等．葡萄糖费母液（二母）深层发酵生产柠檬酸的研究［Ｊ］．工业
微生物，１９８４（３）：２０－２４２０—２４
［５１］ 徐子渊等．微生物学通报［Ｊ］．１９８１，（１１）：２１
［５２］ Ｋｉｒｉｍｕｒａ， Ｋ ．ｅｔ ａｌ． ：Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９８８，２７（５）：５０４
［５３］ 杉并孝三ぅ；酿造协会志，１９８４，（７９）：７２５
［５４］ Ｋｅｌｌｙ， Ｊ．Ｍ ．ｅｔ ａｌ ．：ＥＭＢＯ．Ｊ．， １９８５，４：４７５
［５５］ 王竟、柳雄冰、陈海昌．紫外线诱变原生质体选育柠檬酸生产菌［Ｊ］．江苏食品科技，２０００，
（６）：１－６
［５６］ 魏炜、杨明贤．柠檬酸高温发酵菌种选育及应用研究［Ｊ］．山东食品发酵，１９９２，（２）：７－１５
［５７］ 金其荣、兰青道、朱宝镛．柠檬酸发酵高温生产菌株选育［Ｊ］．微生物学报，１９９３，３３（３）：
２０４－２０９
［５８］ 周剑平等． 固定化黑曲霉发酵玉米糖液生产柠檬酸的研究［Ｊ］． 微生物学通报，２００１，２８（５）：
２９－３２
［５９］ 朱亨政、朱宝娣、陈莉莉．淀粉原料直接发酵生产柠檬酸［Ｊ］．工业微生物，１９９０，２０（４）：
２０－２４
［６０］ 李文革、彭玲、刘承宣．６０Ｃｏ－γ 射线诱变柠檬酸产生菌黑曲霉 Ｃｏ９－６ 的研究［Ｊ］．激光生物学，
１９９４，３（３）：５０９－５１２
参考文献·59·
［６１］ 黄利群、赵四发、赵书申．黑曲霉发酵橡子生产柠檬酸［Ｊ］．武汉大学学报（自然科学版）．１９９６，
４２（６）：７５９—７６３
［６２］ 何连芳、刘茵、孙玉梅．膨化薯干原料柠檬酸发酵新技术的研究［Ｊ］．食品与发酵工业
２００２，２８（６）：５３－５６
［６３］ 周军伟、马晓建、刘利平等．玉米粉和淀粉混合原料发酵生产柠檬酸的初步研究［Ｊ］．郑州
工业大学学报．２０００，２１（３）：７９－８１
［６４］ 徐伟、徐宗烈．用玉米面生产柠檬酸的新工艺［Ｊ］．生物技术．１９９４，４（２）：２１—２３
［６５］ Ｙ．Ｄ． Ｈａｎｇ． Ｂ．Ｓ．ｌｕｍ． Ｅ．Ｆ．Ｗｏｏｄａｍｓ， Ｍｉｃｒｏｂｉｏａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ ｓｏｌｉｄ ｓｔａｔｅ
ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｋｉｗｉｆｒｎｉｔ ｐｅｅｌ． Ｊ． Ｆｏｏｄ， Ｓｃｉ， １９８７，５２ （１）：２２６
［６６］ Ｈａｎｇ Ｙ． Ｄ ｅｔ ａｌ： Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ， １ｅｔｔ．， １９８５，７（４）：２５３
［６７］ Ｘｕ Ｗ． Ｑ ｅｔ ａｌ．： ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ， １９８８，２３（４）：１７７
［６８］ 李文哲、宋纪蓉等． 纤维素酶、酶解苹果渣的工艺条件［Ｊ］． 西北大学学报（自然科学版），
２０００，３０（３）
［６９］ 李文哲，宋纪蓉． 苹果渣酶解制备柠檬酸［Ｊ］． 应用化学，２０００，１７（５）：５４７－５４８
［７０］ 吴怡莹、张苓花等． 以苹果渣为原料固态发酵生产柠檬酸的研究［Ｊ］． 大连轻工业学院学报，
１９９４，１３（２）：７２－７７
［７１］ 徐积恩． 柠檬酸的产需动态分析［Ｊ］．江苏食品与发酵．１９９５（１）３５—３９
［７２］ 边风根、张文华、刘晓庚．浅谈柠檬酸的现状及前景［Ｊ］．江西化工，１９９９，（１）：４－５
［７３］ 薛泉宏、程丽娟．微生物学实验技术［Ｍ］．世界图书出版公司．西安．２０００
［７４］ Ｋｏｎｉｈｉｋｏ ｗａｔａｎａｂｌｅ， Ｍａｒｉ Ｔａｂｕｃｈｉ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ａｇｉｔａｔｅｄ ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］． Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ， １９９８，（５）： １８７－２００
［７５］ 高培基、曲音波等． 纤维素酶解过程的分析和测定［Ｊ］． 生物工程学报，１９９８，４（４）：
３２１－３２６
［７６］ 王淑军等． 纤维素酶酶解稻壳的条件试验［Ｊ］． 微生物学通报，１９９５，２２（６）：３５４－３５７
［７７］ 外山信南． 纤维素工业， １９７０，（３）：４９３－５０１
［７８］ 司美茹、薛泉宏、蔡艳．混合发酵对纤维素酶和淀粉酶活性的影响［Ｊ］．西北农林科技大学学
报（自然科学版）２００２，３０（５）：６９－７３
［７９］ 微生物学． 高等学校轻工专业试用教材［Ｍ］． 西北农林科技大学翻印
［８０］ 张纪中著．微生物分类学［Ｍ］．上海．复旦大学出版社．１９９０
［８１］ 魏景超遗著． 真菌鉴定手册［Ｍ］．上海科学技术出版社．１９７９
［８２］ 林春果、宋庆训等． 发酵果渣生产柠檬酸［Ｊ］． 食品与发酵工业，１９９９，（２）：１６－１８
［８３］ 天津微生物研究所． 柠檬酸生产基本知识［Ｍ］，１９８５
［８４］ 戚以政等． 柠檬酸固态发酵过程的研究［Ｊ］． 应用与环境． 生物学报，１９９５，１（１）：７８－８４
［８５］ 张伟心． 柠檬酸发酵条件的研究［Ｊ］． 河北大学学报（自然科学版），１９９２，１２（４）：８９－９２
［８６］ 张建安等． 纤维素酶解液的柠檬酸发酵—恒温发酵与周期变温发酵的比较［Ｊ］． 化工学报，
２０００，（５１）：１０５－１０８
［８７］ 张建安、张小勇、刘德华等．用黑曲霉发酵纤维素酶解液生产柠檬酸的研究［Ｊ］．微生物学
杂志．２００１，９（２１）：５－８
［８８］ 匡群、孙梅、费克晖等．甘蔗糖蜜发酵生产柠檬酸［Ｊ］．生物技术，２００１，１１（２）；４０－４４
［８９］ 赵景联． 固定化黑曲霉 Ａｘ－６ 分生孢子生产柠檬酸的研究［Ｊ］．西安交通大学学报，１９９９，
３３（２）：７４－７８
［９０］ 张龙翔、张庭芳等． 生化实验方法和技术（第二版）［Ｍ］． 高等教育出版社，１９８１
·60· 苹果渣基质柠檬酸产生菌株的选育及固态发酵条件研究
［９１］ ＧＢ６０１－７７． 标准溶液制备方法．
［９２］ ＧＢ ８２６９－８７． 柠檬酸及其试验方法
［９３］ 诸葛健、王正祥． 工业微生物实验技术手册［Ｍ］． 北京：中国轻工业出版社，１９９４
［９４］ 龚报森主编． 有机化学实验［Ｍ］．西安：陕西科学技术出版社，１９９３
［９５］ 上海工微所．一种微生物诱变育种后的简单筛选方法［Ｊ］．微生物学报．１９７３（１３）：１９８－１９９
［９６］ Ｓｏｄｅｃｋ Ｇ， Ｋｏｍｉｎｅｋ， Ｓａｌｚｂｒｕｍ Ｗ． Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ，
Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｎｃｈｅｍ， １９８１，１６（９）： ９３１－９３４
［９７］ 施巧琴、吴松刚． 工业微生物育种学［Ｍ］． 福建科学技术出版社，１９９１
［９８］ 章名春． 工业微生物诱变育种［Ｍ］． 科学出版社，１９８４
［９９］ 中科院微生物研究所． 微生物诱变育种［Ｍ］． 科学出版社，１９７３
［１００］ 工业微生物菌种选育与发酵控制技术［Ｍ］．西北农林科技大学翻印
［１０１］ 汤莉．纤维素酶产生菌选育、固态发酵条件及性质研究．硕士论文．２００１
［１０２］ 赵允麟、赵莉．黑曲霉复合酶系组成的调节与控制［Ｊ］．工业微生物．２００１，２１（３）：１９—２２
［１０３］ ＧＢ ６４３５－８６． 饲料水分的测定方法
［１０４］ 林维宣主编． 试验设计方法［Ｍ］． 大连海事大学出版社，１９９５
［１０５］ 邬敏辰． 淀粉原料发酵生产柠檬酸的研究［Ｊ］． 山西食品工业．１９９５，（２）：１３—１５
［１０６］ 刘洁，李宪臻，高培基．纤维素酶活力测定方法评述［Ｊ］．工业微生物，１９９４，２４（４）：２７－３２
［１０７］ 王琳，刘国生，王琳嵩等．ＤＮＳ 法测定纤维素酶活力最适条件研究［Ｊ］．河南师范大学学报（自
然科学版）．１９９８，２６（３）：６６－６９
［１０８］ Ｃｈｉｌｄ ． Ｊ ． Ｓ． ｅｔ ａｌ ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｕｓｉｎｇ ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ
ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｓ ｓｕｂｓｔｒａｃｔｓ． Ｃａｎ． Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ ．１９７３．５１：３９
［１０９］ Ｍｅｙｒａｔｈ ．Ｊ．ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９６７，２（１０）：２５
［１１０］ Ｍａｒｉｅｒ ．Ｊ．Ｒ． ｅｒ ａｌ．：Ｄｉｒｅｃｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｍｉｌｋ ｗｉｔｈ ａｎ
ｉｍｐｒｏｖｅｄｐｙｒｉｄｉｎｅ－ａｃｅｔｉｅ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ ｍｅｔｈｏｄ． Ｊ．Ｄａｉｒｙ．ｓｃｉ．１９５８，４１：１６８３—１６９２
［１１１］ 胡小平，王长发编著．ＳＡＳ 基础及统计实例教程［Ｍ］，西安地图出版社，２００１
［１１２］ Ｂ．ＭｃＮｅｉｌ ａｎｄ Ｌ．Ｍ．Ｈａｒｖｅｙ ． Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｐｒｅｓｓ １９９０
［１１３］ Ｅｖａｎｓ，Ｇ．Ｔ． ｅｔ ａｌ：Ｊｍｉｃｒｏｂ． Ｍｅｔｈｏｄｓ． １９８５，４，３／４，２０３－２１０
［１１４］ Ｔａｋａｔａ， Ｉ．ｅｔ ａｌ：Ｅｕｒ．Ｊ，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．， １９７９，７：１６１－１７２
［１１５］ Ｓｅｋｉｎｅ， Ｈ．， Ｎａｓｕｎｏ， Ｓ． ａｎｄ Ｉｇｕｃｈｉ， Ｎ．： Ａｇｒ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， １９６９，（３３）：１４７７，
［１１６］ 宁佐美ぅ：昭和 ６０ 年度日本发酵工业工学会讲演要旨集，１９８５，２２
［１１７］ Ｍａｄｄｏｘ，Ｉ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．：Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９８６，２３（３）：２０３
［１１８］ Ｈｏｓｓａｉｎ，Ｍ．ｅｒ ａｌ．： Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９８４，１９（６）：３９３
［１１９］ Ｒｏｕｋａｓ， Ｔ，ｅｔ ａｌ．：Ｊ． Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．， １９８６，５１（１）：２２５
［１２０］ Ｈｉｌｄｅｇａｒｄ， Ｋ．ｅｒ ａｌ．： Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９８２ ，（４）：１６
［１２１］ Ｈａｎｇ，Ｙ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．， １９８４，（６）：７６３
［１２２］ Ｈａｎｇ，Ｙ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｋｅｔｔ．， １９８７，９（３）：１８３
［２］ 金其荣、张继民、徐勤编著．有机酸发酵工艺学［Ｍ］．中国轻工出版社，１９９７
［３］ 周日尤． 我国柠檬酸的生产应用与开发［Ｊ］． 江苏化工，２００１，２９（５）：１０－１３
［４］ 汪多仁． 柠檬酸的国外市场动态和我们的对策［Ｊ］． 中国食品用化学品，１９９９（１）：１－６
［５］ 戎志梅． 新型生物化工产品投产指南［Ｍ］． 沈阳：辽宁科学技术出版社，１９９６
［６］ 于春梅、满俊． 我国柠檬酸生产概况和发展前景［Ｊ］． 化工开发与设计，２０００（２３），３８－４０
［７］ 于春梅、满俊． 世界柠檬酸生产概况及前景展望［Ｊ］． 现代化工，２０００，２０（１１）：５５－５８
［８］ Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｅｗｓ． ２０００，７２（６－１２）： ４
［９］ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍａｒｋｅｔ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ． ２０００，２５７（３）：４
［１０］ 中国化工信息中心． 中国化学工业年鉴． １９９８／１９９９（４０）
［１１］ 韩秋燕． 纵观全球柠檬酸工业．精细与专用化学品［Ｊ］． ２０００（８）：９－１０
［１２］ 阮仕立、王西锐．苹果酒的开发研究进展［Ｊ］．食品与发酵工业，２０００，２７（４）：７５－７７
［１３］ 杨福有等． 陕西苹果渣生产利用现状调查［Ｊ］． 陕西农业科学，１９９４（４）：２９－３０
［１４］ 李丙智等． 苹果产业发展现状与趋势—陕西农业新兴产业现状与发展［Ｍ］． 西安地图出
版社，１９９７
［１５］ 傅斌、林祥斌． 苹果渣的综合利用［Ｊ］． 中国果品研究，１９８９（２）：１９－２０
［１６］ 李巨秀、李志西、杨明泉等．果渣资源的综合利用［Ｊ］．西北农林科技大学学报（自然科学版），
２００２，（９）：１０３－１０６
［１７］ 李锡钧．苹果皮渣的综合利用［Ｊ］．包装与食品机械．２００１，１９（３）：２
［１８］ 赵国建．苹果皮渣的综合利用［Ｊ］．农牧产品开发，１９９７，（８）：３３－３４
［１９］ Ｊｏｓｈｉ Ｖ Ｋ， Ｋａｕｓｈａｌ Ｎ Ｋ，Ｔｈａｌｕｒ Ｎ Ｓ． Ａｐｐｌｅ ｐｏｍａｃｅ ｓａｕｃｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ
ｆｒｅｓｈ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｎａｌ ｏｆ ｆｏｏｄ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｉｎｄｉａ ． １９９６，３３
（５）：４１４－４１７
［２０］ 陈喜英、张鸣岐．苹果渣青贮及饲喂奶牛的效果［Ｊ］．河南畜牧兽医，２０００，（２）：１８－１９
［２１］ 郭维烈、郭庆华．固体发酵可强化基质蛋白［Ｊ］． 中国饲料，１９９６，（６）：４１－４２
［２２］ 郗丽兰．菌体饲料开发研究综述［Ｊ］．粮食与饲料工业，１９９４（１）：３６－３８
［２３］ 谢玺文、张翠霞、陈丽媛等．饲用微生物的应用前景及研究现状［Ｊ］．微生物学杂志，２００１，２１
（１）：４７－４９
［２４］ Ｈ Ｗａｎｇ Ｊ Ｋ， ｋｉｍ Ｃ Ｔ，ｋｉｍ Ｃ Ｊ， ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｐｌｅ ｐｏｍａｃｅ ｂｙ ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ ａｓ ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ
ｐｅｃｔｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ［Ｊ］， ＩＦＴ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ： ｂｏｏｋ ｏｆ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ １９９６，１１１－１１２
［２５］ Ｔｒａｎｃ Ｔ，Ｍ． Ｉｔｃｈｅｌｌ Ｄ Ａ． ｐｉｎｅａｐｐｌｅ ｗａｓｔｅ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｕｂｓｔｒａｃｔｓ ｆｏｒ ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｂｙ ｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｃｔｅｒｓ ，１９９５，１７（１０）：１１０７－１１１０
［２６］ Ｊｏｓｈｉｖ Ｋ ．ｓａｎｄｈｕ ．Ｄ Ｋ． ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖａｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｆｅｅｄ ｂｙ ｐｒｏｄｕｃｔ ｐｒｏｄｕｃｅｄ
ｂｙ ｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｐｌｅ ｐｏｍａｃｅ［Ｊ］， Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９５，
５６（２／３）：２５１－２５５
［２７］ Ｓｈａｈ Ｇ．Ｈ Ｍａｓｏｏｄｉ Ｆ．Ａ． ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｗａｓｔｅｓ ｆｒｏｍ ａｐｐｌｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ
ｐｌａｎｔｓ ［Ｊ］．Ｉｎｄｉａ Ｆｏｏｄ ｐａｃｋｅｒ．１９９６，４８（５）：４７－５２
·58· 苹果渣基质柠檬酸产生菌株的选育及固态发酵条件研究
［２８］ 吴金鹏主编． 食品微生物学． 中国农业出版社［Ｍ］，１９９０，２３５－２４０
［２９］ 王晋杰、尚文博． 苹果渣的综合开发与利用［Ｊ］． 饲料研究，２０００，（３）：１３－１６
［３０］ 李彩凤、杨福有． 苹果渣的营养成分及利用［Ｊ］． 饲料博览，２００１，（２）：３８
［３１］ 无锡轻工业学院等． 食品微生物学［Ｍ］． 轻工业出版社，１９８３
［３２］ 华南工学院等． 发酵工程与设备［Ｍ］． 轻工业出版社，１９８５
［３３］ Ｂｒｉａｎ Ｊ． Ｂ． Ｗｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ Ｆｏｏｄｓ， １９８５
［３４］ 武汉大学、复旦大学合编． 微生物学［Ｍ］． 高等教育出版社，１９８７
［３５］ 沈同、王镜岩． 生物化学［Ｍ］． 高等教育出版社，１９９１
［３６］ 朱亨政．柠檬酸发酵的生物化学机制［Ｊ］．工业微生物，１９８１，（３）：４７－４９
［３７］ 颜方贵主编． 发酵微生物学［Ｍ］． 中国农业大学出版社，１９９１
［３８］ 江汉湖主编．食品微生物学［Ｍ］．中国农业出版社，２００１
［３９］ 朱亨政．柠檬酸发酵生产研究［Ｊ］．食品与发酵工业，１９８４，２１（４）：３６３－３６９
［４０］ Ａ Ｈ ｒｏｓｅ． Ｐｒｉｍａｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．１９７８
［４１］ 陈 声．有机酸发酵生产技术［Ｍ］．工业微生物，１９８７（３２）：２５－２７
［４２］ 朱亨政、李妙珍、劳文香等．甘蔗糖蜜深层发酵柠檬酸的研究［Ｊ］． 工业微生物，１９８３，（５）：
１２
［４３］ Ｅｖａｒｓ， Ｇ．Ｔ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｍｉｃｒｏｂ， Ｍｅｔｈｏｄｓ， １９８５ ，４，３／４， ２０３－２１０
［４４］ 周定、王建龙．柠檬酸产生菌黑曲霉诱变选育的研究［Ｊ］．微生物学杂志，１９９３，２（１３）：４－７
［４５］ 朱亨政、候勤芳、杨芸芳等．高浓度薯干直接发酵柠檬酸的研究［Ｊ］．微生物学报，１９８１，２１
（３）：３６３－３６６
［４６］ 孔玉，柠檬酸生产菌种的改良［Ｊ］． 柠檬酸科技交流，１９９２，（４）：２０－２０
［４７］ 王建龙、侯文华、周定．柠檬酸发酵生产技术新进展［Ｊ］．工业微生物．１９９３，２３（５）２１—２７
［４８］ 上海工微所：微生物学通报［Ｊ］．１９７８，（１２）：５
［４９］ 朱亨政． 柠檬酸发酵．食品与发酵工业［Ｊ］．１９９４，（６）：６９—７４
［５０］ 朱亨政、赵国础、王熙萍等．葡萄糖费母液（二母）深层发酵生产柠檬酸的研究［Ｊ］．工业
微生物，１９８４（３）：２０－２４２０—２４
［５１］ 徐子渊等．微生物学通报［Ｊ］．１９８１，（１１）：２１
［５２］ Ｋｉｒｉｍｕｒａ， Ｋ ．ｅｔ ａｌ． ：Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９８８，２７（５）：５０４
［５３］ 杉并孝三ぅ；酿造协会志，１９８４，（７９）：７２５
［５４］ Ｋｅｌｌｙ， Ｊ．Ｍ ．ｅｔ ａｌ ．：ＥＭＢＯ．Ｊ．， １９８５，４：４７５
［５５］ 王竟、柳雄冰、陈海昌．紫外线诱变原生质体选育柠檬酸生产菌［Ｊ］．江苏食品科技，２０００，
（６）：１－６
［５６］ 魏炜、杨明贤．柠檬酸高温发酵菌种选育及应用研究［Ｊ］．山东食品发酵，１９９２，（２）：７－１５
［５７］ 金其荣、兰青道、朱宝镛．柠檬酸发酵高温生产菌株选育［Ｊ］．微生物学报，１９９３，３３（３）：
２０４－２０９
［５８］ 周剑平等． 固定化黑曲霉发酵玉米糖液生产柠檬酸的研究［Ｊ］． 微生物学通报，２００１，２８（５）：
２９－３２
［５９］ 朱亨政、朱宝娣、陈莉莉．淀粉原料直接发酵生产柠檬酸［Ｊ］．工业微生物，１９９０，２０（４）：
２０－２４
［６０］ 李文革、彭玲、刘承宣．６０Ｃｏ－γ 射线诱变柠檬酸产生菌黑曲霉 Ｃｏ９－６ 的研究［Ｊ］．激光生物学，
１９９４，３（３）：５０９－５１２
参考文献·59·
［６１］ 黄利群、赵四发、赵书申．黑曲霉发酵橡子生产柠檬酸［Ｊ］．武汉大学学报（自然科学版）．１９９６，
４２（６）：７５９—７６３
［６２］ 何连芳、刘茵、孙玉梅．膨化薯干原料柠檬酸发酵新技术的研究［Ｊ］．食品与发酵工业
２００２，２８（６）：５３－５６
［６３］ 周军伟、马晓建、刘利平等．玉米粉和淀粉混合原料发酵生产柠檬酸的初步研究［Ｊ］．郑州
工业大学学报．２０００，２１（３）：７９－８１
［６４］ 徐伟、徐宗烈．用玉米面生产柠檬酸的新工艺［Ｊ］．生物技术．１９９４，４（２）：２１—２３
［６５］ Ｙ．Ｄ． Ｈａｎｇ． Ｂ．Ｓ．ｌｕｍ． Ｅ．Ｆ．Ｗｏｏｄａｍｓ， Ｍｉｃｒｏｂｉｏａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ ｓｏｌｉｄ ｓｔａｔｅ
ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｋｉｗｉｆｒｎｉｔ ｐｅｅｌ． Ｊ． Ｆｏｏｄ， Ｓｃｉ， １９８７，５２ （１）：２２６
［６６］ Ｈａｎｇ Ｙ． Ｄ ｅｔ ａｌ： Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ， １ｅｔｔ．， １９８５，７（４）：２５３
［６７］ Ｘｕ Ｗ． Ｑ ｅｔ ａｌ．： ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ， １９８８，２３（４）：１７７
［６８］ 李文哲、宋纪蓉等． 纤维素酶、酶解苹果渣的工艺条件［Ｊ］． 西北大学学报（自然科学版），
２０００，３０（３）
［６９］ 李文哲，宋纪蓉． 苹果渣酶解制备柠檬酸［Ｊ］． 应用化学，２０００，１７（５）：５４７－５４８
［７０］ 吴怡莹、张苓花等． 以苹果渣为原料固态发酵生产柠檬酸的研究［Ｊ］． 大连轻工业学院学报，
１９９４，１３（２）：７２－７７
［７１］ 徐积恩． 柠檬酸的产需动态分析［Ｊ］．江苏食品与发酵．１９９５（１）３５—３９
［７２］ 边风根、张文华、刘晓庚．浅谈柠檬酸的现状及前景［Ｊ］．江西化工，１９９９，（１）：４－５
［７３］ 薛泉宏、程丽娟．微生物学实验技术［Ｍ］．世界图书出版公司．西安．２０００
［７４］ Ｋｏｎｉｈｉｋｏ ｗａｔａｎａｂｌｅ， Ｍａｒｉ Ｔａｂｕｃｈｉ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ａｇｉｔａｔｅｄ ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］． Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ， １９９８，（５）： １８７－２００
［７５］ 高培基、曲音波等． 纤维素酶解过程的分析和测定［Ｊ］． 生物工程学报，１９９８，４（４）：
３２１－３２６
［７６］ 王淑军等． 纤维素酶酶解稻壳的条件试验［Ｊ］． 微生物学通报，１９９５，２２（６）：３５４－３５７
［７７］ 外山信南． 纤维素工业， １９７０，（３）：４９３－５０１
［７８］ 司美茹、薛泉宏、蔡艳．混合发酵对纤维素酶和淀粉酶活性的影响［Ｊ］．西北农林科技大学学
报（自然科学版）２００２，３０（５）：６９－７３
［７９］ 微生物学． 高等学校轻工专业试用教材［Ｍ］． 西北农林科技大学翻印
［８０］ 张纪中著．微生物分类学［Ｍ］．上海．复旦大学出版社．１９９０
［８１］ 魏景超遗著． 真菌鉴定手册［Ｍ］．上海科学技术出版社．１９７９
［８２］ 林春果、宋庆训等． 发酵果渣生产柠檬酸［Ｊ］． 食品与发酵工业，１９９９，（２）：１６－１８
［８３］ 天津微生物研究所． 柠檬酸生产基本知识［Ｍ］，１９８５
［８４］ 戚以政等． 柠檬酸固态发酵过程的研究［Ｊ］． 应用与环境． 生物学报，１９９５，１（１）：７８－８４
［８５］ 张伟心． 柠檬酸发酵条件的研究［Ｊ］． 河北大学学报（自然科学版），１９９２，１２（４）：８９－９２
［８６］ 张建安等． 纤维素酶解液的柠檬酸发酵—恒温发酵与周期变温发酵的比较［Ｊ］． 化工学报，
２０００，（５１）：１０５－１０８
［８７］ 张建安、张小勇、刘德华等．用黑曲霉发酵纤维素酶解液生产柠檬酸的研究［Ｊ］．微生物学
杂志．２００１，９（２１）：５－８
［８８］ 匡群、孙梅、费克晖等．甘蔗糖蜜发酵生产柠檬酸［Ｊ］．生物技术，２００１，１１（２）；４０－４４
［８９］ 赵景联． 固定化黑曲霉 Ａｘ－６ 分生孢子生产柠檬酸的研究［Ｊ］．西安交通大学学报，１９９９，
３３（２）：７４－７８
［９０］ 张龙翔、张庭芳等． 生化实验方法和技术（第二版）［Ｍ］． 高等教育出版社，１９８１
·60· 苹果渣基质柠檬酸产生菌株的选育及固态发酵条件研究
［９１］ ＧＢ６０１－７７． 标准溶液制备方法．
［９２］ ＧＢ ８２６９－８７． 柠檬酸及其试验方法
［９３］ 诸葛健、王正祥． 工业微生物实验技术手册［Ｍ］． 北京：中国轻工业出版社，１９９４
［９４］ 龚报森主编． 有机化学实验［Ｍ］．西安：陕西科学技术出版社，１９９３
［９５］ 上海工微所．一种微生物诱变育种后的简单筛选方法［Ｊ］．微生物学报．１９７３（１３）：１９８－１９９
［９６］ Ｓｏｄｅｃｋ Ｇ， Ｋｏｍｉｎｅｋ， Ｓａｌｚｂｒｕｍ Ｗ． Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ，
Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｎｃｈｅｍ， １９８１，１６（９）： ９３１－９３４
［９７］ 施巧琴、吴松刚． 工业微生物育种学［Ｍ］． 福建科学技术出版社，１９９１
［９８］ 章名春． 工业微生物诱变育种［Ｍ］． 科学出版社，１９８４
［９９］ 中科院微生物研究所． 微生物诱变育种［Ｍ］． 科学出版社，１９７３
［１００］ 工业微生物菌种选育与发酵控制技术［Ｍ］．西北农林科技大学翻印
［１０１］ 汤莉．纤维素酶产生菌选育、固态发酵条件及性质研究．硕士论文．２００１
［１０２］ 赵允麟、赵莉．黑曲霉复合酶系组成的调节与控制［Ｊ］．工业微生物．２００１，２１（３）：１９—２２
［１０３］ ＧＢ ６４３５－８６． 饲料水分的测定方法
［１０４］ 林维宣主编． 试验设计方法［Ｍ］． 大连海事大学出版社，１９９５
［１０５］ 邬敏辰． 淀粉原料发酵生产柠檬酸的研究［Ｊ］． 山西食品工业．１９９５，（２）：１３—１５
［１０６］ 刘洁，李宪臻，高培基．纤维素酶活力测定方法评述［Ｊ］．工业微生物，１９９４，２４（４）：２７－３２
［１０７］ 王琳，刘国生，王琳嵩等．ＤＮＳ 法测定纤维素酶活力最适条件研究［Ｊ］．河南师范大学学报（自
然科学版）．１９９８，２６（３）：６６－６９
［１０８］ Ｃｈｉｌｄ ． Ｊ ． Ｓ． ｅｔ ａｌ ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｕｓｉｎｇ ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ
ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｓ ｓｕｂｓｔｒａｃｔｓ． Ｃａｎ． Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ ．１９７３．５１：３９
［１０９］ Ｍｅｙｒａｔｈ ．Ｊ．ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９６７，２（１０）：２５
［１１０］ Ｍａｒｉｅｒ ．Ｊ．Ｒ． ｅｒ ａｌ．：Ｄｉｒｅｃｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｍｉｌｋ ｗｉｔｈ ａｎ
ｉｍｐｒｏｖｅｄｐｙｒｉｄｉｎｅ－ａｃｅｔｉｅ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ ｍｅｔｈｏｄ． Ｊ．Ｄａｉｒｙ．ｓｃｉ．１９５８，４１：１６８３—１６９２
［１１１］ 胡小平，王长发编著．ＳＡＳ 基础及统计实例教程［Ｍ］，西安地图出版社，２００１
［１１２］ Ｂ．ＭｃＮｅｉｌ ａｎｄ Ｌ．Ｍ．Ｈａｒｖｅｙ ． Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｐｒｅｓｓ １９９０
［１１３］ Ｅｖａｎｓ，Ｇ．Ｔ． ｅｔ ａｌ：Ｊｍｉｃｒｏｂ． Ｍｅｔｈｏｄｓ． １９８５，４，３／４，２０３－２１０
［１１４］ Ｔａｋａｔａ， Ｉ．ｅｔ ａｌ：Ｅｕｒ．Ｊ，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．， １９７９，７：１６１－１７２
［１１５］ Ｓｅｋｉｎｅ， Ｈ．， Ｎａｓｕｎｏ， Ｓ． ａｎｄ Ｉｇｕｃｈｉ， Ｎ．： Ａｇｒ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， １９６９，（３３）：１４７７，
［１１６］ 宁佐美ぅ：昭和 ６０ 年度日本发酵工业工学会讲演要旨集，１９８５，２２
［１１７］ Ｍａｄｄｏｘ，Ｉ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．：Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９８６，２３（３）：２０３
［１１８］ Ｈｏｓｓａｉｎ，Ｍ．ｅｒ ａｌ．： Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９８４，１９（６）：３９３
［１１９］ Ｒｏｕｋａｓ， Ｔ，ｅｔ ａｌ．：Ｊ． Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．， １９８６，５１（１）：２２５
［１２０］ Ｈｉｌｄｅｇａｒｄ， Ｋ．ｅｒ ａｌ．： Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １９８２ ，（４）：１６
［１２１］ Ｈａｎｇ，Ｙ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．， １９８４，（６）：７６３
［１２２］ Ｈａｎｇ，Ｙ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｋｅｔｔ．， １９８７，９（３）：１８３