黄连解毒汤超细微粉的生物药剂学研究
|
摘要
目的：超微粉碎技术是近年来迅速发展起来的一项高新技术，在中药生产上正逐步得到应用，并已显露出其特有的优势。本项目以中兽医经典名方黄连解毒汤为对象，研究该技术对黄连解毒汤组织形态、溶出特性和抑菌效果等方面的影响，为该技术在中药制剂领域中的应用提供科学依据。
方法：对黄连解毒汤复方生药及方中黄连、黄柏、黄芩、栀子等各味生药采用超微粉碎技术和普通粉碎技术制成的粉末进行以下研究：1．应用光镜和扫描电子显微镜对两种粉末进行组织形态学对比；2．应用薄层色谱和高效液相色谱对黄连解毒汤复方超细微粉的溶出特性进行定性和定量研究；3．应用体外抑菌实验对黄连解毒汤复方超细微粉进行药效学初步研究。
结果：1．LM观察和SEM观察可知，黄连解毒汤复方生药及方中黄连、黄柏、黄芩、栀子等各味生药经普通粉碎后，粉末中组织块清晰可见，且形状不规则；而经超微粉碎后粒度变小，且颗粒大小均匀，颗粒的球性度提高。对于黄连解毒汤复方，普通粉碎的粉末仍可见原药材的形貌，而经超微粉碎后，已很难观察到原药材形貌，其混合的均匀度(均质化)显著提高。此外，采用两种粉碎方式得到的粉末在相同放大倍数(×750)下其细胞特征也有很大的不同：细粉在SEM下能明显观察到大批细胞壁完整的细胞群，偶见个别细胞的细胞壁破裂；而超细微粉在SEM下看到的大多是细胞碎片，仅能观察到极个别完整的细胞存在。2．定性实验表明，黄连解毒汤复方超细微粉薄层色谱有明显改变，简化提取工艺不影响其色谱图。定量实验表明，超声提取后，黄芩、栀子中的有效成分含量超细微粉比细粉分别提高34.36％和50.96％，黄连解毒汤复方中的小檗碱、黄芩甙和栀子甙的含量超细微粉比细粉分别提高37.07％、32.53％和26.66％。而在简化提取方法(开水冲搅)下黄连解毒汤复方中黄芩甙和栀子甙含量超细微粉比细粉分别提高51.15％和45.50％；粉体HPLC图谱显示，细粉和超细微粉在相同的保留时间有相同的吸收峰，只是峰值有差别。3．体外抑菌实验结果表明，对两种粉末利用传统的提取方法进行抑菌圈大小比较，两者无显著差异；但对两种粉末进行简化提取(开水冲搅)后比较，却发现抑菌圈大小存
福建堆林大学硕士学位伦文
在着极显著的差异(p<0 .01)。
结论:黄连解毒汤复方生药及方中黄连、黄柏、黄答、桅子等各味生药经超微
粉碎后，粉末粒度更加细微均匀，复方药材的均匀度提高;绝大多数细胞破壁，
有效成分溶出特性改变，提取工艺可大大简化;有效成分溶出量大幅度增加，
抑菌效果提高。
OBJECTIVE : Ultramicro-pulverization technology is a high-tech that was developed rapidly in recent years. It has been gradually adopted in the processing of Chinese materia medica and appeared its special advantage. In order to offer scientific testify for the application of ultramicro-pulverization in the preparation of Chinese materia medica, this research investigated the effects of ultramicro-pulverization on Huanglian jiedutang' histological configurations, dissolving characteristics and bacteriostasis effects.
METHODS: The research on the ultra-fine powder and conventional fine powder of Huanglian jiedutang and Huanglian, Huangbo,Huangqin,Zhizi as fellow: 1. To compare the histological configuration of ultra-fine powder and conventional fine powder with SEM and LM; 2. The qualitative test with TLC and the quantitative test with HPLC on the ultra-fine powder and conventional fine powder. 3. The pilot study on pharmacodynamics of HLJDT' ultra-fine powder with Bacteriostasis in vitro.
RESULTS: 1. SEM and LM results show that the histological pieces were vivid and erose in the conventional fine powder; but in the ultra-fine powder, the particles were more uniform and improved in the spherical degree, the granularity became smaller. HLJDT conventional fine powder can also observe the histological configuration of Huanglian, Huangbo,Huangqin and Zhizi; in the HLJDT ultra-fine powder, it can't be observed, but improved in the mixed uniformity. Furthermore, the cell wall characteristics of conventional fine powder and ultra-fine powder was remarkably different in the same magnify multiple ( x 750) . The former can observe large quantities of cell flock which cell wall was integrate, the latter was on the contrary. 2. The qualitative test results show that the TLC of HLJDT ultra-fine
powder has obvious changes, but the simply extract can't effect the TLC. The quantitative test results show that the ultra-fine powder has a higher content of effective component than the conventional fine powder, improved 34.63% in Huangqnu 50.96% in Zhizi, 37.07%, 32.53%, 26.66% in HLJDT' Berber, Baicalin, Geniposide by ultrasonic extract, and 51.15%, 45.50% in HLJDT' Baicalin, Geniposide by simply extract(stirred by spoil water). The HPLC results show that two kinds of powder have the similar absorb peak in the same reserve time, but peak magnitude is different. 3. The Bacteriostasis in vitro results show that two kinds of powder' Bacteriostasis circle wasn't obvious difference in the conventional extract, but existed remarkably difference in simply extract (stirred by spoil water)(p<0.01).
CONCLUSION: The ultra-fine powder particles were more uniform in shape and became smaller in size, the mixed uniformity of HLJDT improved remarkably; Nearly all plant cells were cracked in SEM; the dissolving characteristics changed, the extract processing can be simplified; the dissolving content increased and bacteriostasis effect improved.
方法：对黄连解毒汤复方生药及方中黄连、黄柏、黄芩、栀子等各味生药采用超微粉碎技术和普通粉碎技术制成的粉末进行以下研究：1．应用光镜和扫描电子显微镜对两种粉末进行组织形态学对比；2．应用薄层色谱和高效液相色谱对黄连解毒汤复方超细微粉的溶出特性进行定性和定量研究；3．应用体外抑菌实验对黄连解毒汤复方超细微粉进行药效学初步研究。
结果：1．LM观察和SEM观察可知，黄连解毒汤复方生药及方中黄连、黄柏、黄芩、栀子等各味生药经普通粉碎后，粉末中组织块清晰可见，且形状不规则；而经超微粉碎后粒度变小，且颗粒大小均匀，颗粒的球性度提高。对于黄连解毒汤复方，普通粉碎的粉末仍可见原药材的形貌，而经超微粉碎后，已很难观察到原药材形貌，其混合的均匀度(均质化)显著提高。此外，采用两种粉碎方式得到的粉末在相同放大倍数(×750)下其细胞特征也有很大的不同：细粉在SEM下能明显观察到大批细胞壁完整的细胞群，偶见个别细胞的细胞壁破裂；而超细微粉在SEM下看到的大多是细胞碎片，仅能观察到极个别完整的细胞存在。2．定性实验表明，黄连解毒汤复方超细微粉薄层色谱有明显改变，简化提取工艺不影响其色谱图。定量实验表明，超声提取后，黄芩、栀子中的有效成分含量超细微粉比细粉分别提高34.36％和50.96％，黄连解毒汤复方中的小檗碱、黄芩甙和栀子甙的含量超细微粉比细粉分别提高37.07％、32.53％和26.66％。而在简化提取方法(开水冲搅)下黄连解毒汤复方中黄芩甙和栀子甙含量超细微粉比细粉分别提高51.15％和45.50％；粉体HPLC图谱显示，细粉和超细微粉在相同的保留时间有相同的吸收峰，只是峰值有差别。3．体外抑菌实验结果表明，对两种粉末利用传统的提取方法进行抑菌圈大小比较，两者无显著差异；但对两种粉末进行简化提取(开水冲搅)后比较，却发现抑菌圈大小存
福建堆林大学硕士学位伦文
在着极显著的差异(p<0 .01)。
结论:黄连解毒汤复方生药及方中黄连、黄柏、黄答、桅子等各味生药经超微
粉碎后，粉末粒度更加细微均匀，复方药材的均匀度提高;绝大多数细胞破壁，
有效成分溶出特性改变，提取工艺可大大简化;有效成分溶出量大幅度增加，
抑菌效果提高。
OBJECTIVE : Ultramicro-pulverization technology is a high-tech that was developed rapidly in recent years. It has been gradually adopted in the processing of Chinese materia medica and appeared its special advantage. In order to offer scientific testify for the application of ultramicro-pulverization in the preparation of Chinese materia medica, this research investigated the effects of ultramicro-pulverization on Huanglian jiedutang' histological configurations, dissolving characteristics and bacteriostasis effects.
METHODS: The research on the ultra-fine powder and conventional fine powder of Huanglian jiedutang and Huanglian, Huangbo,Huangqin,Zhizi as fellow: 1. To compare the histological configuration of ultra-fine powder and conventional fine powder with SEM and LM; 2. The qualitative test with TLC and the quantitative test with HPLC on the ultra-fine powder and conventional fine powder. 3. The pilot study on pharmacodynamics of HLJDT' ultra-fine powder with Bacteriostasis in vitro.
RESULTS: 1. SEM and LM results show that the histological pieces were vivid and erose in the conventional fine powder; but in the ultra-fine powder, the particles were more uniform and improved in the spherical degree, the granularity became smaller. HLJDT conventional fine powder can also observe the histological configuration of Huanglian, Huangbo,Huangqin and Zhizi; in the HLJDT ultra-fine powder, it can't be observed, but improved in the mixed uniformity. Furthermore, the cell wall characteristics of conventional fine powder and ultra-fine powder was remarkably different in the same magnify multiple ( x 750) . The former can observe large quantities of cell flock which cell wall was integrate, the latter was on the contrary. 2. The qualitative test results show that the TLC of HLJDT ultra-fine
powder has obvious changes, but the simply extract can't effect the TLC. The quantitative test results show that the ultra-fine powder has a higher content of effective component than the conventional fine powder, improved 34.63% in Huangqnu 50.96% in Zhizi, 37.07%, 32.53%, 26.66% in HLJDT' Berber, Baicalin, Geniposide by ultrasonic extract, and 51.15%, 45.50% in HLJDT' Baicalin, Geniposide by simply extract(stirred by spoil water). The HPLC results show that two kinds of powder have the similar absorb peak in the same reserve time, but peak magnitude is different. 3. The Bacteriostasis in vitro results show that two kinds of powder' Bacteriostasis circle wasn't obvious difference in the conventional extract, but existed remarkably difference in simply extract (stirred by spoil water)(p<0.01).
CONCLUSION: The ultra-fine powder particles were more uniform in shape and became smaller in size, the mixed uniformity of HLJDT improved remarkably; Nearly all plant cells were cracked in SEM; the dissolving characteristics changed, the extract processing can be simplified; the dissolving content increased and bacteriostasis effect improved.
引文
[1] 余华。中草药在防治禽流感病上的应用与机理研究[J]。畜禽业，2002，1：18-19．
[2] 石达友，刘汉儒。中草药防治仔猪黄白痢的研究进展[J]。广东畜牧兽医科技，2002，27(2)：12-15，
[3] 周岷江，王天益。中兽医防治畜禽病毒性疾病[J]。黑龙江畜牧兽医杂志，2002，1：24-26．
[4] 朴香淑，李德发。中草药饲料添加剂促进畜禽生长性能研究现状及展望[J]。饲料工业，2002，23(1)；12-15．
[5] 付双喜，冯定远．中草药与畜禽防疫保健[J]。畜禽业，2001，9：14-15，
[6] 张月星。观赏鱼真菌性疾病和寄生虫病的中草药治疗[J]。水产科技情报，2002，29(4)；187-188．
[7] 燕传利，刘春海。鲫鱼饲料中用中草药萃取物取代喹乙醇试验[J]。饲料研究，2002，9：32，39．
[8] 孙克年。中草药在水产养殖业中的应用[J]。饲料博览，2002，2：37-38．
[9] 许星鸿。中草药在水产养殖业中的应用[J]。饲料世界，2001，12：31．
[10] 白元良，王洪鹏，魏祥法等。中草药与绿色家禽业[J]。山东家禽，2002，8：39-42．
[11] 许立等。中草药饲料添加剂学[M]。北京：中国农业出版社，1994，8
[12] 张颖，陈世玲，盖国胜等。中草药与难溶药物超细粉碎技术的应用[J]。世界科学技术—中药现代化，2001，3(2)：9-11．
[13] 郭胜民，范晓雯。高新技术在中药制剂生产中的应用[J]。中国药房，2000，11(6)：241-243，
[14] 黄一帆，李富文，朱志雄。超微粉碎技术在中药制剂生产上的应用研究及展望[J]。山东中兽医，2002，4：41-43．
[15] 李凤生。超细粉体技术[M]。北京：国防工业出版社，1999，1．
[16] 王爱武，吕文海。超微粉碎在中药生产中应用概况及展望[J]。时珍国医国药，2000，11(7)；669．
[17] 骆苏芳，翁加丰。浅谈超微细中药粉体[J]。中药材，1999，22(4)：209-211．
[18] Igbasan FA, Ouenter W. The influence of micronization,dehulling and enzyme supplementation on the nutrition value of peas for laying hens[J]. Poultry Science. 1997, 76:2,331-334.
[19] Wang Y, McAllister TA, Pickard MD et al. Effect of micronizing full fat canola seed on amino acid disappearance in the gastrointestinal tract of dairy cows [J]. Journal of Dairy Science. 1999,82:3, 537-544.
[20] Wang Y, McAllister TA, Zobell DR et al. The effect of micronizing full fat canola seed on digestion in the rumen and total tract of dairy cows [J]. Canadian Journal of Animal Science. 1997,77:3, 431-440.
[21] Medel P, Salado S, Bias JC et al. Processed cereals in diets for early-weaned piglets [J]. Animal Feed Science and Technology. 1999,82:3-4,145-156.
[22] 张孝娟，陈长洲，崔景朝。中药超细粉体及其在中药配方颗粒中的应用[J]。世界科学技术—中药现代化，2002，4(1)：47-49．
[23] 魏凤环，田景辉，牛波，超微粉碎技术[J]。山东中医杂志，1999，18(12)：559-560．
[24] 彭念国．超细粉碎技术用于中药粉剂加工初探[J]。国医论坛，2001，16(6)：54-55．
[25] 关天增，雷敬卫，郑艳丽．浅淡超微粉碎[J]。中国中药杂志，2002，27(7)：499-501．
[26] 吴纯洁。中药超细粉碎技术之浅析[J]。中成药，2002，24(1)：59-61，
[27] 邹全明，杨君，赵先英等。中华鳖甲超微细粉中氨基酸及钙、镁元素分析[J]．中药材，2000，23(1)：6-7．
[28] 陆付耳，阮金兰，余达经等。试论微米中药[J]。世界科学技术—中药现代化，2001，3(1)：12-15．
[29] 中国高技术产业发展促进会。“微米中药研究与产业化开发学术研讨会”纪要[J]．世界科学技术---中药现代化，2001，3(4)：78-79．
[30] 何煜，郭琪，杜晓敏。中药细胞级微粉碎对体内吸收的影响[J]。中成药，1999，21(11)：601-602．
[31] 金万勤，黄芳，郭六玮。苍术、黄柏及二妙丸超细微粉的生物药剂学研究：Ⅰ．扫描电子显微镜技术对超细微粉的表征[J]。中草药，2001，32(4)；306-308．
[32] 罗付生，朝爱军，杨毅等．超细粉体技术在中药行业中的应用[J]。中草药，2001，32(10)：941-942．
[33] 何金洋，郭兴伯。纳米中药的功能与应用研究浅释[J]。中医药学刊，2002，20(1)：37-38．
[34] 刘燕玲。中药微米即可，不必纳米[Z]。健康报，2001，6．4．
[35] 许启寨，杜钢军，包翠屏。复方地黄超细微粉药理学研究[J]．中草药，2002，33(6)：537-539。
[36] 宋丽丽，张启明，范丙义等。六味地黄超细微粉的有效成分熊果酸与丹皮酚溶出特性的研究[J]。中成药，2002，24(7)：498-500．
[37] 杜晓敏，刘璐，何煜。原生药材超细微粉制剂的药效学研究 [J]。中草药，1999，30(9)：680-684．
[38] 杜晓敏，郭琪，何煜。中成药传统制剂与超细微粉制剂的药效学比较[J]。中成药，2000，22(4)：307-309．
[39] 吕文海，邱福军，王作明。炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的初步实验研究[J]。中国中药杂志，2001，26(4)：241-243．
[40] 宋丽丽，李勉，范丙义。六味地黄超微细粉体显微特征观察[J]，中草药，2002，33(6)：560-561，568。
[41] 宋丽丽，范丙义，蒋士忠。蒲公英超微细粉体特性探讨[J]。中国中药杂志，2002，27(1)：12-15。
[42] 宋丽丽，张启明，王鸽子。超微粉碎对蒲公英成分溶出特性的影响[J]。时珍国医国药，2001，12(6)：492-493。
[43] 袁红宇，黄芳，郭立玮。苍术、黄柏及二妙丸超细微粉的生物药剂学研究：Ⅱ．超细粉二妙丸的体外溶出度研究[J]。中草药，2002，33(9)：790-792。
[44] 黄芳，郭立玮，袁红宇等。超细粉体技术对二妙丸体内吸收、分布的影响[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(4)：216-218。
[45] 黄芳，郭立玮，金万勤。药物累积法测定普通马钱子粉及超细马钱子粉的表观药动学参数[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)。2001，17(3)；162-163。
[46] 薛焰，郭立玮，袁红宇等。药理效应法测定超细马钱子和普通马钱子的药动学参数[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(2)；94-95。
[47] 袁红宇，郭立玮，薛焰等．超细粉体技术对马钱子中士地宁在体内的分布的影响[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(1)：27-28．
[48] 苏瑞强，何煜，王瑞成等。超微粉碎技术提高六味地黄丸(水蜜丸)溶出度的研究[J]。中国中药杂志，2002，27(7)：511-513．
[49] 陈长洲，陈路林，彭俊锋等。天麻超细粉体工业生产技术的实验研究[J]。中药材，2002，25(7)：495-496．
[50] 陈长洲，孙冬梅，张孝娟等。天麻超细粉体的显微和溶出特征[J]。中药新药与临床药理．2002,13(4)：251-252．
[51] 孙晓燕，袁红宇，郭立玮等。超细粉体对当归及其溶出速率的影响[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(4)：219-221．
[52] 蔡光先，杨永华，张水寒．微粉化对人参类药材有效成分的影响[J]。中国医药学报，2001，16(6)：26-28．
[53] 李晓明，王跃生，闫寒等。超微粉碎决明子对其大黄酚溶出量的影响[J]。中国实验方剂学杂志，2001，7(6)；6-8．
[54] 郭学东。山茱萸普通粉碎和微粉化处理在溶出速率上的比较[J]。首都医药，2000，7(8)：45．
[55] 郭学东。比较红参普通粉碎和微粉化处理的溶出速率[J]。首都医药，2000，7(9)：47．
[56] 郭学东，赵保文。珍珠粉不同加工方法粒径大小的比较[J]。首都医药，2001，8(2)652．
[57] 杨新林，朱鹤孙，赵东旭等。灵芝破壁孢子和不破壁孢子的显微镜观察与生化测定比较研究[J]。中草药，1997，28(12)：721-7237
[58] 鲍辛峰，方积年。赤芝孢子破壁前后多糖释放能力比较研究[J]。中国中药杂志，2001，26(5)：326-328．
[59] 陈体强，李开本，郑宇。原木灵芝孢子及其破壁形态观察简报[J]。食用菌学报，1996，3(1)：61-64．
[60] 陈体强，朱培根，蔡云等。原木灵芝孢子研究----(Ⅳ)未破壁孢子与破壁孢子的比较[J]。食用菌学报，1999，6(3)：21-26．
[61] 王爱武，耿晖，魏巍。洒制及超微粉碎对当归散中黄芩苷溶出效果的影响[J]。山东中医杂志，2001，20(4)：237-238．
[62] 郭月英，于庆海，张毅，黄连解毒汤实验药理研究[J]。中成药，1993，29-31．
[63] 赵国荣．温病病因辩证的物质基础—黄芩滑石汤与黄连解毒汤体外抗菌活性的初步研究[J]。湖南中医杂志，1986，6：7-9．
[64] Dai K ,Miki K, Fukuoka T. et al. Suppression of neuropeptides' mRNA expression by herbal medicine in a rat model of peripheral inflammation[J], Life Sci, 2000,66(1 ): 19-29.
[65] Lin SC, Lin CC, Lu FJ et al. Protective and therapeutic effects of huanglian-jie-du-tang on hepatotoxin-induced liver injuries [J]. Am J Chin Meal, 1996,:24(3): 219-229.
[66] 曹于平，皋聪，孙继红等。黄连解毒汤提取物的药理作用研究[J]。中国药科大学学报，1996，27(10)：605-608．
[67] 赵新秀，秦龙建。日本应用黄连解毒汤的特点[J]。实用中医内科杂志，1993，7(1)：35，40．
[68] 张泉鑫，张克家。黄连解毒汤----清热解毒基础方[J]。中兽医学杂志，1998，3；36-37．
[69] 中华人民共和国卫生部药典委员会。中华人民共和国药典----中药粉末显微鉴别彩色图集[M]。广东：广东技出版社，1999，4．
[70] 中国兽药检察所，103种中兽药散剂显微鉴别[M]。北京：北京农业大学出版社，1993，67，166．
[71] 刘国杰。药剂学[M]。第二版，北京，人民卫生出版社，1985，154．
[72] 郭乃燕，刘小平，潘旭初。黄连解毒汤(合剂)的研究[J]．中成药，1990，12(7)：17-18．
[73] 孙秀梅，张兆旺，卢连华等。黄连解毒颗粒4种提取方法的比较[J]。中国中药杂志，1996，21(8)：474-476．
[74] 康廷国。中成药薄层色谱鉴别[M]。北京：人民卫生出版社，1995，325-327．
[75] 沈嘉，吴秋媚。HPLC法比较不同工艺制备的黄连解毒汤及日本汉方黄连解毒汤中黄芩苷含量[J]。中草药，1999，30(2)：102～104。
[76] 沈嘉，赵建平。黄连解毒汤质量考察[J]。中成药，1999,21(10)：502-504。
[77] 沈嘉，孙春梅，徐荣源。HPLC法比较不同工艺制备的黄连解毒汤及日本汉方黄连解毒汤中生物碱含量[J]。中草药，2000，31(4)：202-204。
[78] 周元瑶，陈燕祥，朱斌等。十五种原小檗碱型季铵生物碱高效液相色谱条件的优选[J]。药学学报，1988，23(12)：938-943。
[79] 廖延雄。兽医微生物实验诊断手册[M]。北京：中国农业出版社，1995，123-124．
[80] 济南倍力粉技术工程有限公司。中药细胞级微粉碎技术研究资料汇编(内部资料)，P：9，15．
[81] 国家药典委员会编。中国药典[S]。北京：化学工业出版社，2000年版(一部)，凡例。
[82] 刘国杰。药剂学[M]。第二版，北京：人民卫生出版社，1985，593,620．
[83] 沈平壤，何筑生。制药粉体工程技术与中药现代化[J]。世界科学技术----中药现代化，1999，1(3)：26-27，18．
[84] Chaumeil JC. Micronization: a method of improving the bioavailability of poorly soluble drugs [J]. Methods Find Exp Clin Pharmacol. 1998 Apr. 20(3): 211-215.
[85] Denyer S. Pharmaceutical properties of fluticasone propionate nasal drops: a new formulation [J]. Allergy, 1999, 53: 17-20.
[86] Farinha A, Bica A, Tavares P. Improved bio-availability of a micronized Megestrol acetate tablet formulation in humans [J]. Drug Dev Ind Pharm, 2000,26(5): 567-570.
[87] Hargrove JT, Max_son WS, Wentz AC. Absorption of oral progesterone is influenced by vehicle and particle size [J]. Am J Obstet Gynecol. 1989,Oct; 161(4): 948-951.
[88] Kerc J, Srcis S, Knez Z, Sencar-Bozic P. Micronization of drugs using supercritical carbon dioxide [J]. Int J Pharm. 1999 May 10; 182(1): 33-39.
[89] Kondo N, Iwao T, Kikuchi M, et al. Pharmacokinetics of micronized, poorly water-soluble drug HO-221 in experimental animal [J]. Biol Pharm Bull, 1993 16(8): 796-800.
[90] Kubo H, Osawa T, Takashingma K, Mizobe M. Enhancement of oral bioavailability and pharmacologicaleffectof 1-(3,4-dimethoxyphenyl)-2,3-bis(methoxycarbonyl)-4-hydroxy-6,7, 8-trimethoxynaphthalence(TA-7552), a new hypocholesterolemic agent, by micronization in co-ground mixture with D-mannitol[J]. Bio Pharm Bull. 1996 May; 19(5): 741-747.
[91] Mcinne GT, Asbury MJ, Ramsay LE, Shelton JR. Effect of micronization in bioavailability and pharmacologic activity of spironolactone [J]. J Clin Pharmacol. 1982 Aug; 22(8):410-417.
[92] Mcinne GT, Asbury MJ, Ramsay LE, Shelton JR. Effect of micronization in bioavallability and pharmacologic activity of spironolactone [J]. J Clin Pharmacol. 1982 Sep; 22(9):
410-417.
[93]Williams RO 3rd, Brown J, Liu J. Influence of micronization method on the performance of a suspension tramcinolone acetonide pressurized metered-dose inhaler formulation [J].Pharm Dev Technol. 1999 May; 4(2): 167-179.
[94]周瑞玲，陈玉兴，陈长洲。羚羊角超细粉体与粗粉镇疼及解热作用对比研究[J]。时珍国医国药。2003，14(2)：封3．
[95]陈卫东，穆加兵。黄连解毒汤有效成分浸出工艺的研究[J]。南京中医药大学学报，1996，12(4)：30-32．
[96]乔梁，彭嘉柔，濮训生等。黄连—黄芩药对煎煮液沉淀物的分析[J]。中国中药杂志，1999，24(6)：352-353．
[2] 石达友，刘汉儒。中草药防治仔猪黄白痢的研究进展[J]。广东畜牧兽医科技，2002，27(2)：12-15，
[3] 周岷江，王天益。中兽医防治畜禽病毒性疾病[J]。黑龙江畜牧兽医杂志，2002，1：24-26．
[4] 朴香淑，李德发。中草药饲料添加剂促进畜禽生长性能研究现状及展望[J]。饲料工业，2002，23(1)；12-15．
[5] 付双喜，冯定远．中草药与畜禽防疫保健[J]。畜禽业，2001，9：14-15，
[6] 张月星。观赏鱼真菌性疾病和寄生虫病的中草药治疗[J]。水产科技情报，2002，29(4)；187-188．
[7] 燕传利，刘春海。鲫鱼饲料中用中草药萃取物取代喹乙醇试验[J]。饲料研究，2002，9：32，39．
[8] 孙克年。中草药在水产养殖业中的应用[J]。饲料博览，2002，2：37-38．
[9] 许星鸿。中草药在水产养殖业中的应用[J]。饲料世界，2001，12：31．
[10] 白元良，王洪鹏，魏祥法等。中草药与绿色家禽业[J]。山东家禽，2002，8：39-42．
[11] 许立等。中草药饲料添加剂学[M]。北京：中国农业出版社，1994，8
[12] 张颖，陈世玲，盖国胜等。中草药与难溶药物超细粉碎技术的应用[J]。世界科学技术—中药现代化，2001，3(2)：9-11．
[13] 郭胜民，范晓雯。高新技术在中药制剂生产中的应用[J]。中国药房，2000，11(6)：241-243，
[14] 黄一帆，李富文，朱志雄。超微粉碎技术在中药制剂生产上的应用研究及展望[J]。山东中兽医，2002，4：41-43．
[15] 李凤生。超细粉体技术[M]。北京：国防工业出版社，1999，1．
[16] 王爱武，吕文海。超微粉碎在中药生产中应用概况及展望[J]。时珍国医国药，2000，11(7)；669．
[17] 骆苏芳，翁加丰。浅谈超微细中药粉体[J]。中药材，1999，22(4)：209-211．
[18] Igbasan FA, Ouenter W. The influence of micronization,dehulling and enzyme supplementation on the nutrition value of peas for laying hens[J]. Poultry Science. 1997, 76:2,331-334.
[19] Wang Y, McAllister TA, Pickard MD et al. Effect of micronizing full fat canola seed on amino acid disappearance in the gastrointestinal tract of dairy cows [J]. Journal of Dairy Science. 1999,82:3, 537-544.
[20] Wang Y, McAllister TA, Zobell DR et al. The effect of micronizing full fat canola seed on digestion in the rumen and total tract of dairy cows [J]. Canadian Journal of Animal Science. 1997,77:3, 431-440.
[21] Medel P, Salado S, Bias JC et al. Processed cereals in diets for early-weaned piglets [J]. Animal Feed Science and Technology. 1999,82:3-4,145-156.
[22] 张孝娟，陈长洲，崔景朝。中药超细粉体及其在中药配方颗粒中的应用[J]。世界科学技术—中药现代化，2002，4(1)：47-49．
[23] 魏凤环，田景辉，牛波，超微粉碎技术[J]。山东中医杂志，1999，18(12)：559-560．
[24] 彭念国．超细粉碎技术用于中药粉剂加工初探[J]。国医论坛，2001，16(6)：54-55．
[25] 关天增，雷敬卫，郑艳丽．浅淡超微粉碎[J]。中国中药杂志，2002，27(7)：499-501．
[26] 吴纯洁。中药超细粉碎技术之浅析[J]。中成药，2002，24(1)：59-61，
[27] 邹全明，杨君，赵先英等。中华鳖甲超微细粉中氨基酸及钙、镁元素分析[J]．中药材，2000，23(1)：6-7．
[28] 陆付耳，阮金兰，余达经等。试论微米中药[J]。世界科学技术—中药现代化，2001，3(1)：12-15．
[29] 中国高技术产业发展促进会。“微米中药研究与产业化开发学术研讨会”纪要[J]．世界科学技术---中药现代化，2001，3(4)：78-79．
[30] 何煜，郭琪，杜晓敏。中药细胞级微粉碎对体内吸收的影响[J]。中成药，1999，21(11)：601-602．
[31] 金万勤，黄芳，郭六玮。苍术、黄柏及二妙丸超细微粉的生物药剂学研究：Ⅰ．扫描电子显微镜技术对超细微粉的表征[J]。中草药，2001，32(4)；306-308．
[32] 罗付生，朝爱军，杨毅等．超细粉体技术在中药行业中的应用[J]。中草药，2001，32(10)：941-942．
[33] 何金洋，郭兴伯。纳米中药的功能与应用研究浅释[J]。中医药学刊，2002，20(1)：37-38．
[34] 刘燕玲。中药微米即可，不必纳米[Z]。健康报，2001，6．4．
[35] 许启寨，杜钢军，包翠屏。复方地黄超细微粉药理学研究[J]．中草药，2002，33(6)：537-539。
[36] 宋丽丽，张启明，范丙义等。六味地黄超细微粉的有效成分熊果酸与丹皮酚溶出特性的研究[J]。中成药，2002，24(7)：498-500．
[37] 杜晓敏，刘璐，何煜。原生药材超细微粉制剂的药效学研究 [J]。中草药，1999，30(9)：680-684．
[38] 杜晓敏，郭琪，何煜。中成药传统制剂与超细微粉制剂的药效学比较[J]。中成药，2000，22(4)：307-309．
[39] 吕文海，邱福军，王作明。炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的初步实验研究[J]。中国中药杂志，2001，26(4)：241-243．
[40] 宋丽丽，李勉，范丙义。六味地黄超微细粉体显微特征观察[J]，中草药，2002，33(6)：560-561，568。
[41] 宋丽丽，范丙义，蒋士忠。蒲公英超微细粉体特性探讨[J]。中国中药杂志，2002，27(1)：12-15。
[42] 宋丽丽，张启明，王鸽子。超微粉碎对蒲公英成分溶出特性的影响[J]。时珍国医国药，2001，12(6)：492-493。
[43] 袁红宇，黄芳，郭立玮。苍术、黄柏及二妙丸超细微粉的生物药剂学研究：Ⅱ．超细粉二妙丸的体外溶出度研究[J]。中草药，2002，33(9)：790-792。
[44] 黄芳，郭立玮，袁红宇等。超细粉体技术对二妙丸体内吸收、分布的影响[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(4)：216-218。
[45] 黄芳，郭立玮，金万勤。药物累积法测定普通马钱子粉及超细马钱子粉的表观药动学参数[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)。2001，17(3)；162-163。
[46] 薛焰，郭立玮，袁红宇等。药理效应法测定超细马钱子和普通马钱子的药动学参数[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(2)；94-95。
[47] 袁红宇，郭立玮，薛焰等．超细粉体技术对马钱子中士地宁在体内的分布的影响[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(1)：27-28．
[48] 苏瑞强，何煜，王瑞成等。超微粉碎技术提高六味地黄丸(水蜜丸)溶出度的研究[J]。中国中药杂志，2002，27(7)：511-513．
[49] 陈长洲，陈路林，彭俊锋等。天麻超细粉体工业生产技术的实验研究[J]。中药材，2002，25(7)：495-496．
[50] 陈长洲，孙冬梅，张孝娟等。天麻超细粉体的显微和溶出特征[J]。中药新药与临床药理．2002,13(4)：251-252．
[51] 孙晓燕，袁红宇，郭立玮等。超细粉体对当归及其溶出速率的影响[J]。南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(4)：219-221．
[52] 蔡光先，杨永华，张水寒．微粉化对人参类药材有效成分的影响[J]。中国医药学报，2001，16(6)：26-28．
[53] 李晓明，王跃生，闫寒等。超微粉碎决明子对其大黄酚溶出量的影响[J]。中国实验方剂学杂志，2001，7(6)；6-8．
[54] 郭学东。山茱萸普通粉碎和微粉化处理在溶出速率上的比较[J]。首都医药，2000，7(8)：45．
[55] 郭学东。比较红参普通粉碎和微粉化处理的溶出速率[J]。首都医药，2000，7(9)：47．
[56] 郭学东，赵保文。珍珠粉不同加工方法粒径大小的比较[J]。首都医药，2001，8(2)652．
[57] 杨新林，朱鹤孙，赵东旭等。灵芝破壁孢子和不破壁孢子的显微镜观察与生化测定比较研究[J]。中草药，1997，28(12)：721-7237
[58] 鲍辛峰，方积年。赤芝孢子破壁前后多糖释放能力比较研究[J]。中国中药杂志，2001，26(5)：326-328．
[59] 陈体强，李开本，郑宇。原木灵芝孢子及其破壁形态观察简报[J]。食用菌学报，1996，3(1)：61-64．
[60] 陈体强，朱培根，蔡云等。原木灵芝孢子研究----(Ⅳ)未破壁孢子与破壁孢子的比较[J]。食用菌学报，1999，6(3)：21-26．
[61] 王爱武，耿晖，魏巍。洒制及超微粉碎对当归散中黄芩苷溶出效果的影响[J]。山东中医杂志，2001，20(4)：237-238．
[62] 郭月英，于庆海，张毅，黄连解毒汤实验药理研究[J]。中成药，1993，29-31．
[63] 赵国荣．温病病因辩证的物质基础—黄芩滑石汤与黄连解毒汤体外抗菌活性的初步研究[J]。湖南中医杂志，1986，6：7-9．
[64] Dai K ,Miki K, Fukuoka T. et al. Suppression of neuropeptides' mRNA expression by herbal medicine in a rat model of peripheral inflammation[J], Life Sci, 2000,66(1 ): 19-29.
[65] Lin SC, Lin CC, Lu FJ et al. Protective and therapeutic effects of huanglian-jie-du-tang on hepatotoxin-induced liver injuries [J]. Am J Chin Meal, 1996,:24(3): 219-229.
[66] 曹于平，皋聪，孙继红等。黄连解毒汤提取物的药理作用研究[J]。中国药科大学学报，1996，27(10)：605-608．
[67] 赵新秀，秦龙建。日本应用黄连解毒汤的特点[J]。实用中医内科杂志，1993，7(1)：35，40．
[68] 张泉鑫，张克家。黄连解毒汤----清热解毒基础方[J]。中兽医学杂志，1998，3；36-37．
[69] 中华人民共和国卫生部药典委员会。中华人民共和国药典----中药粉末显微鉴别彩色图集[M]。广东：广东技出版社，1999，4．
[70] 中国兽药检察所，103种中兽药散剂显微鉴别[M]。北京：北京农业大学出版社，1993，67，166．
[71] 刘国杰。药剂学[M]。第二版，北京，人民卫生出版社，1985，154．
[72] 郭乃燕，刘小平，潘旭初。黄连解毒汤(合剂)的研究[J]．中成药，1990，12(7)：17-18．
[73] 孙秀梅，张兆旺，卢连华等。黄连解毒颗粒4种提取方法的比较[J]。中国中药杂志，1996，21(8)：474-476．
[74] 康廷国。中成药薄层色谱鉴别[M]。北京：人民卫生出版社，1995，325-327．
[75] 沈嘉，吴秋媚。HPLC法比较不同工艺制备的黄连解毒汤及日本汉方黄连解毒汤中黄芩苷含量[J]。中草药，1999，30(2)：102～104。
[76] 沈嘉，赵建平。黄连解毒汤质量考察[J]。中成药，1999,21(10)：502-504。
[77] 沈嘉，孙春梅，徐荣源。HPLC法比较不同工艺制备的黄连解毒汤及日本汉方黄连解毒汤中生物碱含量[J]。中草药，2000，31(4)：202-204。
[78] 周元瑶，陈燕祥，朱斌等。十五种原小檗碱型季铵生物碱高效液相色谱条件的优选[J]。药学学报，1988，23(12)：938-943。
[79] 廖延雄。兽医微生物实验诊断手册[M]。北京：中国农业出版社，1995，123-124．
[80] 济南倍力粉技术工程有限公司。中药细胞级微粉碎技术研究资料汇编(内部资料)，P：9，15．
[81] 国家药典委员会编。中国药典[S]。北京：化学工业出版社，2000年版(一部)，凡例。
[82] 刘国杰。药剂学[M]。第二版，北京：人民卫生出版社，1985，593,620．
[83] 沈平壤，何筑生。制药粉体工程技术与中药现代化[J]。世界科学技术----中药现代化，1999，1(3)：26-27，18．
[84] Chaumeil JC. Micronization: a method of improving the bioavailability of poorly soluble drugs [J]. Methods Find Exp Clin Pharmacol. 1998 Apr. 20(3): 211-215.
[85] Denyer S. Pharmaceutical properties of fluticasone propionate nasal drops: a new formulation [J]. Allergy, 1999, 53: 17-20.
[86] Farinha A, Bica A, Tavares P. Improved bio-availability of a micronized Megestrol acetate tablet formulation in humans [J]. Drug Dev Ind Pharm, 2000,26(5): 567-570.
[87] Hargrove JT, Max_son WS, Wentz AC. Absorption of oral progesterone is influenced by vehicle and particle size [J]. Am J Obstet Gynecol. 1989,Oct; 161(4): 948-951.
[88] Kerc J, Srcis S, Knez Z, Sencar-Bozic P. Micronization of drugs using supercritical carbon dioxide [J]. Int J Pharm. 1999 May 10; 182(1): 33-39.
[89] Kondo N, Iwao T, Kikuchi M, et al. Pharmacokinetics of micronized, poorly water-soluble drug HO-221 in experimental animal [J]. Biol Pharm Bull, 1993 16(8): 796-800.
[90] Kubo H, Osawa T, Takashingma K, Mizobe M. Enhancement of oral bioavailability and pharmacologicaleffectof 1-(3,4-dimethoxyphenyl)-2,3-bis(methoxycarbonyl)-4-hydroxy-6,7, 8-trimethoxynaphthalence(TA-7552), a new hypocholesterolemic agent, by micronization in co-ground mixture with D-mannitol[J]. Bio Pharm Bull. 1996 May; 19(5): 741-747.
[91] Mcinne GT, Asbury MJ, Ramsay LE, Shelton JR. Effect of micronization in bioavailability and pharmacologic activity of spironolactone [J]. J Clin Pharmacol. 1982 Aug; 22(8):410-417.
[92] Mcinne GT, Asbury MJ, Ramsay LE, Shelton JR. Effect of micronization in bioavallability and pharmacologic activity of spironolactone [J]. J Clin Pharmacol. 1982 Sep; 22(9):
410-417.
[93]Williams RO 3rd, Brown J, Liu J. Influence of micronization method on the performance of a suspension tramcinolone acetonide pressurized metered-dose inhaler formulation [J].Pharm Dev Technol. 1999 May; 4(2): 167-179.
[94]周瑞玲，陈玉兴，陈长洲。羚羊角超细粉体与粗粉镇疼及解热作用对比研究[J]。时珍国医国药。2003，14(2)：封3．
[95]陈卫东，穆加兵。黄连解毒汤有效成分浸出工艺的研究[J]。南京中医药大学学报，1996，12(4)：30-32．
[96]乔梁，彭嘉柔，濮训生等。黄连—黄芩药对煎煮液沉淀物的分析[J]。中国中药杂志，1999，24(6)：352-353．