甜地丁生药学研究
摘要
目的：对甜地丁进行全面系统生药学研究,并对其化学成分进行了提取分离和部分药效学研究。
方法：采用生药学研究方法对甜地丁的植物形态、药材性状、显微特征(不同药用部位的组织构造、粉末特征)进行了研究；采用扫描电镜技术对甜地丁地上部分的多个部位进行了微形态观察；采用药典规定方法对甜地丁常规项目进行了研究,并对其具有补益作用的多糖、黄酮类成分、氨基酸进行了含量测定；采用柱层析技术对部分化学成分进行了提取分离；采用气相-质谱联用技术对甜地丁脂溶性成分进行了分析；最后对甜地丁免疫增强、抗炎、镇痛、抗菌等药效活性进行了研究。
结果：确定了甜地丁的基源、性状、显微特征和微形态的专属性特征；制定了甜地丁的质量标准(包括水分、灰分、浸出物、总黄酮、多糖和氨基酸含量)。从甜地丁中提取分离出10个成分,分别为胡萝卜苷、β-谷甾醇、正十六烷酸、十二烷醇、正二十四烷酸、木犀草素、芦丁、槲皮素、芹菜素和3β,22β,24-三羟基-齐墩果-12-烯。药效学研究显示,甜地丁水煎液具有明显免疫增强作用；水煎液和乙酸乙酯萃取部位均有明显抗炎、镇痛作用；甜地丁、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇部位有抑菌活性。
结论：为甜地丁生药学鉴定、质量标准制定、化学成分分离鉴定、药效活性研究及合理开发利用提供了参考。
Objebtive:In order to establish the quality standard of Herb Gueldensta edtiae-vernae, a systematic Pharmacognostic research and isolation of chemical constituents of Herb Gueldenstaedtiae vernae, as well as pharmacological studies were performed.
Methods:Pharmacognostic researches aimed at the botanical resource, medical character and microstructure of Herb Gueldenstaedtiae vernae were carried out. Scanning electron-microscope was applied in the micro-morphological research on different parts of its aerial parts. Spectrphotometry was used to determine the content of total flavone and polysaccharide with rutin and glucose as standard product respectively. In additional, the content of water extracts, ethanol extracts and ashes in crude samples were determined using the subtraction of weight. At last, amimo acids were determined by PITC methods and the liposoluble constituents were analysed by GC-MS method. Its chemical components of alcohol extractive were analyzed using systematic separation process. Pharmacological studies including immunology, anti-inflammatory, analgesis were also tested on rats and vitro antibacterial activity of effective fractions of crude herb were also carried out with cylinder plate and dilution methods.
Results:This research determined the traits in the origin, character, and micromorphology of herb Gueldenstaedtiae vernae and primary quality standard was established. Besides, ten compounds were identified from this medicine including daucosterol, β-sitosterol, n-Hexadecanioc acid, tetracosanoic acid, luteolin, apigenin, lutin, quercetin,12-oleanen-3β,22β-24triol. Pharmacological studies indicate that water extract of herb Gueldenstaedtiae vernae can obviously enhance body immunology. Its water extracts and ethylaceta extracts demonstrated strongly anti-inflammatory, analgesis and antibacterial activities.
Conclusions:This research systematically summarized scientific data and established the foundation for the pharmacognosy, quality control, quality standard, isolation and identification of the chemical compounds, pharmacological activity of herb Gueldenstaedtiae vernae. The result is definitely helpful for further research on this medicine.
方法：采用生药学研究方法对甜地丁的植物形态、药材性状、显微特征(不同药用部位的组织构造、粉末特征)进行了研究；采用扫描电镜技术对甜地丁地上部分的多个部位进行了微形态观察；采用药典规定方法对甜地丁常规项目进行了研究,并对其具有补益作用的多糖、黄酮类成分、氨基酸进行了含量测定；采用柱层析技术对部分化学成分进行了提取分离；采用气相-质谱联用技术对甜地丁脂溶性成分进行了分析；最后对甜地丁免疫增强、抗炎、镇痛、抗菌等药效活性进行了研究。
结果：确定了甜地丁的基源、性状、显微特征和微形态的专属性特征；制定了甜地丁的质量标准(包括水分、灰分、浸出物、总黄酮、多糖和氨基酸含量)。从甜地丁中提取分离出10个成分,分别为胡萝卜苷、β-谷甾醇、正十六烷酸、十二烷醇、正二十四烷酸、木犀草素、芦丁、槲皮素、芹菜素和3β,22β,24-三羟基-齐墩果-12-烯。药效学研究显示,甜地丁水煎液具有明显免疫增强作用；水煎液和乙酸乙酯萃取部位均有明显抗炎、镇痛作用；甜地丁、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇部位有抑菌活性。
结论：为甜地丁生药学鉴定、质量标准制定、化学成分分离鉴定、药效活性研究及合理开发利用提供了参考。
Objebtive:In order to establish the quality standard of Herb Gueldensta edtiae-vernae, a systematic Pharmacognostic research and isolation of chemical constituents of Herb Gueldenstaedtiae vernae, as well as pharmacological studies were performed.
Methods:Pharmacognostic researches aimed at the botanical resource, medical character and microstructure of Herb Gueldenstaedtiae vernae were carried out. Scanning electron-microscope was applied in the micro-morphological research on different parts of its aerial parts. Spectrphotometry was used to determine the content of total flavone and polysaccharide with rutin and glucose as standard product respectively. In additional, the content of water extracts, ethanol extracts and ashes in crude samples were determined using the subtraction of weight. At last, amimo acids were determined by PITC methods and the liposoluble constituents were analysed by GC-MS method. Its chemical components of alcohol extractive were analyzed using systematic separation process. Pharmacological studies including immunology, anti-inflammatory, analgesis were also tested on rats and vitro antibacterial activity of effective fractions of crude herb were also carried out with cylinder plate and dilution methods.
Results:This research determined the traits in the origin, character, and micromorphology of herb Gueldenstaedtiae vernae and primary quality standard was established. Besides, ten compounds were identified from this medicine including daucosterol, β-sitosterol, n-Hexadecanioc acid, tetracosanoic acid, luteolin, apigenin, lutin, quercetin,12-oleanen-3β,22β-24triol. Pharmacological studies indicate that water extract of herb Gueldenstaedtiae vernae can obviously enhance body immunology. Its water extracts and ethylaceta extracts demonstrated strongly anti-inflammatory, analgesis and antibacterial activities.
Conclusions:This research systematically summarized scientific data and established the foundation for the pharmacognosy, quality control, quality standard, isolation and identification of the chemical compounds, pharmacological activity of herb Gueldenstaedtiae vernae. The result is definitely helpful for further research on this medicine.
引文
[1]江苏新医学院.中药大辞典(上)[M].上海：上海科学技术出版社,1993,800.
[2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(上册),上海：上海科技出版社,1996：790-791.
[3]陈丽,王军宪,栗燕,常永红.米口袋属植物研究概况.陕西中医,2001,22(3)：184-185.
[4]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志,第四十二卷第二分册.北京：科学出版社.1998：146-157.
[5]陈立,王军宪,栗燕,等.米口袋属植物研究概况[J].陕西中医,2001,22(3)：184-185.
[6]韦群辉,邹海舰,钱子刚,等.川滇米口袋和白花米口袋的生药研究[J].中草药,1999,30(3)：216-219.
[7]乔俊缠,杨九艳,张宏霞.少花米口袋的生药学研究[J].中药材,2008,31(6)：832-834.
[8]李玲,王志敏.甜地丁与其伪品二豆棘豆的鉴别[J].滨州医学院学报,2000,23(2)：181.
[9]张雅杰,宋光伟.地丁类药材的性状鉴别与理化鉴别比较[J].黑龙江医药科学,2006,29(6)：62-63.
[10]霍德兰,赵华英,陈永林.四种菖蒲和三种地丁的蛋白电泳鉴别[J].中药材,1998,21(5)：231-232.
[11]杨德奎.山东米口袋属花粉形态的研究[J].山东科学,2002,15(1)：17-19.
[12]孙京田,于风华.胡枝子属与米口袋属花粉亚显微形态特征的比较研究[J].山东师范大学学报,2003,18(3)：59-61.
[13]杨德奎.山东米口袋属植物的核型分析[J].广西植物,2002,22(4)：349-351.
[14]Xiangyun Zhu. A revision of the genus Gueldenstaedtia (Fabaceae) [J]. Ann. Bot. Fennici,2004,41(4):283-291.
[15]韩毅丽,高黎明.米口袋化学成分的研究[J].山西中医学院学报,2009,10(5)：24-25.
[16]王军宪,朱蓉.米口袋的化学成分研究[J].西北植物学报,1989,9(2)：127-130.
[17]Tsunoda Y, Okawa M, Kinjo, J, etal. Studies on the constituents of Gueldenstaedtia multiflora[J]. Chem Pharm Bull Tokyo,2008, 56(8):1138-1142.
[18]李可,李晓明,王斌贵.狭叶米口袋化学成分研究[J].中国中药杂志,2008,33(14)：1711-1712.
[19]朱蓉,朱大元,徐任生.地丁化学成分研究[J].中草药,1984,15(8)：1-3.
[20]魏友霞,陈立,王军宪.狭叶米口袋化学成分研究[J].中药材,2007,30(8)：954-956.
[21]赵永光,常丽新,刘红梅,等.冀东地区6种野菜的营养成分[J].安徽农业科学,2007,35(26)：8179-8180.
[22]赵永光,常丽新,腾兰稳,等.碣石山区常见野菜营养成分分析及营养价值评价[J].安徽农业科学,2008,36(10)：53.
[23]肖培根.新编中药志.第三卷[M].北京：化学工业出版社,2002：339-342.
[24]楼之岑等主编,常用中药材品种整理和质量研究(2).北京：北京医科大学中国协和医大联合出版社,1995,660-664.
[25]张德山,陈国联,任茜,等.19种药用地丁抗菌作用的实验研究[J].中医药学报,1991(2)：45.
[26]黄海兰,徐波.米口袋清除自由基活性及其成分的研究[J].青岛大学学报(自然科学版)2006,19(4)：30-35.
[27]郭郁频,孙全文,姜凤琴,等.河北坝上地区天然草地主要豆科牧草的形态特征及饲用价值[J].黑龙江畜牧与兽医,2008,(4)：56-58.
[28]宋·唐慎微.《证类本草》影印本[M].北京：人民卫生出版社,1975：281,641.
[29]金元·张子和.《儒门事亲》[M].上海卫生出版社,1985：81.
[30]楼之岑,秦波主编.常用中药材品种整理和质量研究[M].北京医科大学,中国协和医科大学联合出版社,1995：567-666.
[31]金元·李仲南,王均宁等整理.《永类钤方》[M].人民卫生出版社,2006：294.
[32]明·朱楠.《普济方》[M].北京：人民卫生出版社,1983：1107.
[33]明·朱橚原著,王家葵等校注.《救荒本草校释与研究》[M].北京：中医古籍出版 社,2007：78,79,179.
[34]明·金礼蒙.《医方类聚·9分册》[M].人民卫生出版社,2006：67,169,171.
[35]明·李时珍.《本草纲目》[M].北京：人民卫生出版社校点本,1982：1109,1051,1664,1634,956.
[36]赵燏黄·本草药品实地之观察[M]·福州：福建科学技术出版社,2006：140-143.
[37]石户谷勉著,沐绍良译·中国北部之药草[M]·上海：商务印书馆,1950：29-30.
[38]明·李中立.《本草原始》[M].人卫出版社,2007,198.
[39]清·吴其溶.《植物名实图考》[M].北京商务印书馆,1957：301,302,331,377,383.
[40]国家药典委员会编.中华人民共和国药典.2000年颁一部.北京：化学工业出版社,1977：546.
[41]江苏新医学院编,中药大辞典,上册.上海：上海人民出版社,1977：800.
[42]李朝銮.蔷薇科原始属植物叶表皮解剖及其系统学意义.植物分类学报,1979,1-242.
[43]马清温,李凤兰,李承森.气孔参数与大气CO2浓度的相关性及其影响因素[J].西北植物学报,2004,24(2)：20-24.
[44]张延龙,牛立新.中国葡萄属植物叶片气孔特征的研究[J].植物研究,1997,17(3)：315-319.
[45]尹秀玲,温静,刘新,等.蔷薇科12属代表植物叶片气孔密度研究[J].2008(1)：4-6.
[46]宓鹤鸣,张其鸿,苏中武,等.16种国产紫珠叶的扫描电镜观察与鉴别[J].植物学报,1984,19(5)：321.
[47]Schieferstein RH, Loomis WE. Development of the cuticular layers in Angiosperm leaves. American Journal of Botany,1959,46:625.
[48]中国科学院植物研究所形态学及细胞学研究室和情报资料室编译.扫描电子显微镜在植物学上的应用.北京：科学出版社,1974.
[49]邵邻相,张凤娟.6种松科植物叶表皮的扫描电镜观察[J].植物研究,2005,25(3)：281-285.
[50]刘长江,林祈,贺建秀.中国植物种子形态学研究方法和术语[J].西北植物学 报,2004,24：178-188.
[51]孙航,陈书坤.绞股蓝属植物种皮微结构特征及分类学意义[J].云南植物研究,1998,20(3)：309-311.
[52]许文清,龚小见,周欣,等.马兰化学成分研究[J],中草药,2010,41(7)：1056-1059.
[53]丛蒲珠.质谱学在天然有机化学中的应用[M].北京：科学技术出版社,1987：294.
[54]刘贇,周欣,龚小见,等.鬼箭羽化学成分的研究(Ⅲ).中草药,2010,41(11)：1780-1781.
[55]王焕弟,谭成玉,杜昱光,等.藏药湿生扁蕾的化学成分研究[J].中国药学杂志,2005,7(40)：1059-1061.
[56]于瞢泉,橱峻山.分析化学手册[M](第7分册).北京：化学工业出版社,1999：838.
[57]Jia LY(贾凌云), Sun QS(孙启时),Huang SW(黄顺旺).Isolation and identification of flavonoids from Chrysanthemum morifolium Ramat. Chin J of Med Chem(中国药物化学杂志),2003,13：159-164.
[58]田菁,赵毅民,栾新慧.马鞭草化学成分的研究[J],中国中药杂志,2005,30(4)：268-269.
[59]吴立军.天然药物化学(第4版).北京：人民卫生出版社,2003：196-206.
[60]于德泉,杨俊.核磁共振波谱分析.分析化学手册[M](第七分册).北京：化学工业出版社,1999：798.
[61]Haiping W.Nitro-oleic acid protects against endotoxin-induced endotoxemia and multi-organ injury in mice[J]. Am J Physiol Renal Physio,2010,297(3):F553.
[62]韩毅丽,高黎明,魏太宝.米口袋挥发油化学成分研究[J].山西中医学院学报,2010,11(1)：18-20.
[63]中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典[S](一部),北京：化学工业出版社,2005,附录Ⅸ H.
[64]中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典[S](一部),北京：化学工业出版社,2005,附录Ⅸ K.
[65]中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典[S](一部),北京：化学工业出版社,2005,附录X A.
[2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(上册),上海：上海科技出版社,1996：790-791.
[3]陈丽,王军宪,栗燕,常永红.米口袋属植物研究概况.陕西中医,2001,22(3)：184-185.
[4]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志,第四十二卷第二分册.北京：科学出版社.1998：146-157.
[5]陈立,王军宪,栗燕,等.米口袋属植物研究概况[J].陕西中医,2001,22(3)：184-185.
[6]韦群辉,邹海舰,钱子刚,等.川滇米口袋和白花米口袋的生药研究[J].中草药,1999,30(3)：216-219.
[7]乔俊缠,杨九艳,张宏霞.少花米口袋的生药学研究[J].中药材,2008,31(6)：832-834.
[8]李玲,王志敏.甜地丁与其伪品二豆棘豆的鉴别[J].滨州医学院学报,2000,23(2)：181.
[9]张雅杰,宋光伟.地丁类药材的性状鉴别与理化鉴别比较[J].黑龙江医药科学,2006,29(6)：62-63.
[10]霍德兰,赵华英,陈永林.四种菖蒲和三种地丁的蛋白电泳鉴别[J].中药材,1998,21(5)：231-232.
[11]杨德奎.山东米口袋属花粉形态的研究[J].山东科学,2002,15(1)：17-19.
[12]孙京田,于风华.胡枝子属与米口袋属花粉亚显微形态特征的比较研究[J].山东师范大学学报,2003,18(3)：59-61.
[13]杨德奎.山东米口袋属植物的核型分析[J].广西植物,2002,22(4)：349-351.
[14]Xiangyun Zhu. A revision of the genus Gueldenstaedtia (Fabaceae) [J]. Ann. Bot. Fennici,2004,41(4):283-291.
[15]韩毅丽,高黎明.米口袋化学成分的研究[J].山西中医学院学报,2009,10(5)：24-25.
[16]王军宪,朱蓉.米口袋的化学成分研究[J].西北植物学报,1989,9(2)：127-130.
[17]Tsunoda Y, Okawa M, Kinjo, J, etal. Studies on the constituents of Gueldenstaedtia multiflora[J]. Chem Pharm Bull Tokyo,2008, 56(8):1138-1142.
[18]李可,李晓明,王斌贵.狭叶米口袋化学成分研究[J].中国中药杂志,2008,33(14)：1711-1712.
[19]朱蓉,朱大元,徐任生.地丁化学成分研究[J].中草药,1984,15(8)：1-3.
[20]魏友霞,陈立,王军宪.狭叶米口袋化学成分研究[J].中药材,2007,30(8)：954-956.
[21]赵永光,常丽新,刘红梅,等.冀东地区6种野菜的营养成分[J].安徽农业科学,2007,35(26)：8179-8180.
[22]赵永光,常丽新,腾兰稳,等.碣石山区常见野菜营养成分分析及营养价值评价[J].安徽农业科学,2008,36(10)：53.
[23]肖培根.新编中药志.第三卷[M].北京：化学工业出版社,2002：339-342.
[24]楼之岑等主编,常用中药材品种整理和质量研究(2).北京：北京医科大学中国协和医大联合出版社,1995,660-664.
[25]张德山,陈国联,任茜,等.19种药用地丁抗菌作用的实验研究[J].中医药学报,1991(2)：45.
[26]黄海兰,徐波.米口袋清除自由基活性及其成分的研究[J].青岛大学学报(自然科学版)2006,19(4)：30-35.
[27]郭郁频,孙全文,姜凤琴,等.河北坝上地区天然草地主要豆科牧草的形态特征及饲用价值[J].黑龙江畜牧与兽医,2008,(4)：56-58.
[28]宋·唐慎微.《证类本草》影印本[M].北京：人民卫生出版社,1975：281,641.
[29]金元·张子和.《儒门事亲》[M].上海卫生出版社,1985：81.
[30]楼之岑,秦波主编.常用中药材品种整理和质量研究[M].北京医科大学,中国协和医科大学联合出版社,1995：567-666.
[31]金元·李仲南,王均宁等整理.《永类钤方》[M].人民卫生出版社,2006：294.
[32]明·朱楠.《普济方》[M].北京：人民卫生出版社,1983：1107.
[33]明·朱橚原著,王家葵等校注.《救荒本草校释与研究》[M].北京：中医古籍出版 社,2007：78,79,179.
[34]明·金礼蒙.《医方类聚·9分册》[M].人民卫生出版社,2006：67,169,171.
[35]明·李时珍.《本草纲目》[M].北京：人民卫生出版社校点本,1982：1109,1051,1664,1634,956.
[36]赵燏黄·本草药品实地之观察[M]·福州：福建科学技术出版社,2006：140-143.
[37]石户谷勉著,沐绍良译·中国北部之药草[M]·上海：商务印书馆,1950：29-30.
[38]明·李中立.《本草原始》[M].人卫出版社,2007,198.
[39]清·吴其溶.《植物名实图考》[M].北京商务印书馆,1957：301,302,331,377,383.
[40]国家药典委员会编.中华人民共和国药典.2000年颁一部.北京：化学工业出版社,1977：546.
[41]江苏新医学院编,中药大辞典,上册.上海：上海人民出版社,1977：800.
[42]李朝銮.蔷薇科原始属植物叶表皮解剖及其系统学意义.植物分类学报,1979,1-242.
[43]马清温,李凤兰,李承森.气孔参数与大气CO2浓度的相关性及其影响因素[J].西北植物学报,2004,24(2)：20-24.
[44]张延龙,牛立新.中国葡萄属植物叶片气孔特征的研究[J].植物研究,1997,17(3)：315-319.
[45]尹秀玲,温静,刘新,等.蔷薇科12属代表植物叶片气孔密度研究[J].2008(1)：4-6.
[46]宓鹤鸣,张其鸿,苏中武,等.16种国产紫珠叶的扫描电镜观察与鉴别[J].植物学报,1984,19(5)：321.
[47]Schieferstein RH, Loomis WE. Development of the cuticular layers in Angiosperm leaves. American Journal of Botany,1959,46:625.
[48]中国科学院植物研究所形态学及细胞学研究室和情报资料室编译.扫描电子显微镜在植物学上的应用.北京：科学出版社,1974.
[49]邵邻相,张凤娟.6种松科植物叶表皮的扫描电镜观察[J].植物研究,2005,25(3)：281-285.
[50]刘长江,林祈,贺建秀.中国植物种子形态学研究方法和术语[J].西北植物学 报,2004,24：178-188.
[51]孙航,陈书坤.绞股蓝属植物种皮微结构特征及分类学意义[J].云南植物研究,1998,20(3)：309-311.
[52]许文清,龚小见,周欣,等.马兰化学成分研究[J],中草药,2010,41(7)：1056-1059.
[53]丛蒲珠.质谱学在天然有机化学中的应用[M].北京：科学技术出版社,1987：294.
[54]刘贇,周欣,龚小见,等.鬼箭羽化学成分的研究(Ⅲ).中草药,2010,41(11)：1780-1781.
[55]王焕弟,谭成玉,杜昱光,等.藏药湿生扁蕾的化学成分研究[J].中国药学杂志,2005,7(40)：1059-1061.
[56]于瞢泉,橱峻山.分析化学手册[M](第7分册).北京：化学工业出版社,1999：838.
[57]Jia LY(贾凌云), Sun QS(孙启时),Huang SW(黄顺旺).Isolation and identification of flavonoids from Chrysanthemum morifolium Ramat. Chin J of Med Chem(中国药物化学杂志),2003,13：159-164.
[58]田菁,赵毅民,栾新慧.马鞭草化学成分的研究[J],中国中药杂志,2005,30(4)：268-269.
[59]吴立军.天然药物化学(第4版).北京：人民卫生出版社,2003：196-206.
[60]于德泉,杨俊.核磁共振波谱分析.分析化学手册[M](第七分册).北京：化学工业出版社,1999：798.
[61]Haiping W.Nitro-oleic acid protects against endotoxin-induced endotoxemia and multi-organ injury in mice[J]. Am J Physiol Renal Physio,2010,297(3):F553.
[62]韩毅丽,高黎明,魏太宝.米口袋挥发油化学成分研究[J].山西中医学院学报,2010,11(1)：18-20.
[63]中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典[S](一部),北京：化学工业出版社,2005,附录Ⅸ H.
[64]中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典[S](一部),北京：化学工业出版社,2005,附录Ⅸ K.
[65]中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典[S](一部),北京：化学工业出版社,2005,附录X A.