miR-214-3p靶向调控CD3ζ基因的研究

详细信息    查看官网全文

• 论文作者：肖彦恺 ; 郭理杏 ; 张逸铠 ; 陈少华 ; 杨力建 ; 李萡 ; 李扬秋
• 年：2016
• 作者机构：暨南大学生命科学技术学院发育与再生教育部重点实验室;暨南大学医学院血液病研究所;暨南大学第一附属医院血液科;
• 论文关键词：再生障碍性贫血 ; CD3ζ ; microRNA ; T细胞
• 会议召开时间：2016-11-04
• 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会壁报交流集
• 英文会议录名称：Proceedings of 2016 CSI Congress on Immunology
• 语种：中文
• 分类号：R556.5
• 学会代码：IGMD
• 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
• 会议地点：中国安徽合肥
• 主办单位：中国免疫学会
• 学会名称：中国免疫学会
• 页数：2
• 文件大小：1367k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

目的 :TCR(T cell receptor)是T细胞表面识别抗原的受体,由于其肽链的胞质部分很短,不具备传递抗原刺激信号的能力,必须通过与CD3分子形成TCR/CD3复合物。抗原刺激T细胞后,通过TCR/CD3复合物传递细胞刺激信号,引起T细胞活化、增殖从而发挥其生物学功能。本实验室前期研究发现AA患者中,TCR/CD3复合物中重要组成分子-CD3ζ较健康人表达水平明显升高,提示AA患者中T细胞异常活化可能与CD3ζ有关。越来越多的研究发现转录后调控是影响CD3ζ基因表达的关键因素,CD3ζ3′-UTR在CD3ζ基因的转录后水平发挥重要调控作用。micro RNA(mi RNA)可与基因3′-UTR区域的种子序列结合,靶向调控基因的表达。目前尚未见有关靶向调控CD3ζ表达的mi RNA的报道。因此,本研究将首先筛选和验证靶向调控CD3ζ表达的mi RNA,为今后进一步明确AA患者异常T细胞活化的分子机制提供研究资料。方法 :利用生物信息学软件预测靶向调控CD3ζ基因的mi RNA;利用双荧光素酶报告系统、实时荧光定量PCR以及Western Blot等技术验证筛选出的mi RNA能否靶向调控CD3ζ。结果 :首先通过三个在线生物软件(Target Scan,Pic Tar和micro RNA.org)均预测mi R-214-3p可以与CD3ζ3’-UTR结合,且具有高度保守性;其次,成功构建了包含CD3ζ3’-UTR的双荧光报告重组质粒,将此重组质粒与mi R-214-3p mimic共转染至HEK293T细胞后实验组的荧光素酶活性较对照组下降50%以上(p<0.05);Molt4细胞中过表达mi R-214-3p后,明显抑制CD3ζm RNA表达水平和蛋白水平,抑制mi R-214-3p表达后,明显提高CD3ζ蛋白水平。结论 :首次筛选和验证mi R-214-3p可以与CD3ζ3’-UTR结合靶向调控CD3ζ表达。

引文