海藻酸裂解酶基因在毕赤酵母中的表达及重组酶性质的初步研究

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• 出版年：2007
• 作者：岳明；丁宏标；乔宇
• 单位1：中国农业科学院饲料研究所
• 出生年：1982
• 学历：博士研究生
• 语种：中文
• 作者关键词：海藻酸裂解酶；毕赤酵母；海藻寡糖；诱导表达
• 起始页：154
• 总页数：7
• 经费资助：国家973计划课题(2004CB117500)；国家863计划课题(2005AA246010)；国际科技合作重点项目计划课题(2005DFA31070)联合资助
• 刊名：海洋学报
• 是否内版：否
• 刊频：双月刊
• 创刊时间：1979
• 主管单位：中国科学技术协会
• 主办单位：中国海洋学会
• 主编：潘德炉
• 地址：北京复兴门外大街1号
• 邮编：100860
• 卷：29
• 期：5
• 期刊索取号：P226.066449-1
• 数据库收录：中国学术期刊全文数据库全文收录期刊；《日本科技文献速报》收录期刊；美国《化学文摘》收录期刊；《中国生物学文摘》收录期刊；中国生物学文摘（遴选）数据库收录期刊；中国核心期刊（遴选）数据库收录期刊
• 核心期刊：中文核心期刊；中国核心期刊（遴选）数据库收录期刊

摘要

褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)是一种海藻酸降解菌．本实验采用PCR的方法，以褐球固氮菌基因组DNA为模板，克隆出约1.05 kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列，并将其插入巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体pPIC9K中，获得重组质粒pPIC9K-algL.重组质粒线性化后用聚乙二醇(PEG)法导入毕赤酵母菌株GS115中，获得高效分泌表达海藻酸裂解酶的毕赤酵母工程菌株．用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵，表达得到43 kDa的目的蛋白，酶活力可达1400U/cm³左右．经测定，该重组酶的最适反应pH为8.5，最适反应温度为40℃，并且在20～55℃，pH2.0～11．0具有较好的稳定性．另外，10mmol/cm³的Cu²⁺，Fe²⁺，Co²⁺，Mn²⁺和Ca²⁺对酶有不同程度的抑制作用。