聚磷激酶基因在假单胞菌中的整合和表达
- 出版年：2009
- 作者：杜宏伟；武俊；肖琳；杨柳燕；蒋丽娟；王晓琳
- 单位1：南京大学环境学院
- 出生年：1985
- 学历：硕士研究生
- 语种：中文
- 作者关键词：聚磷；聚磷激酶（PPK）；三亲接合；恶臭假单胞菌
- 起始页：3011
- 总页数：5
- 经费资助：国家科技支撑计划项目（2006BAJ08B01-02）；国家重点基础研究发展规划（973）项目（2008CB418102）
- 刊名：环境科学
- 是否内版：否
- 刊频：月刊
- 创刊时间：1976
- 主管单位：中国科学院
- 主办单位：中国科学院生态环境研究中心
- 主编：欧阳自远
- 地址：北京市海淀区双清路18号
- 邮编：100085
- 电子信箱：hjkx@rcees.ac.cn
- 网址：http://www.hjkx.ac.cn
- 卷：30
- 期：10
- 期刊索取号：P875.06 929-3
摘要
为了构建高效除磷的微生物，将来源于大肠杆菌的聚磷激酶基因（ppk）插入广宿主载体pBBR1MCS-2多克隆位点区，得到质粒pBBR1MCS-2-ppk。以该质粒为模板，通过PCR扩增出携带有载体启动子和终止子序列的ppk基因，插入自杀型质粒pUTmini-Tn5中得到重组质粒pUTmini-Tn5-ppk.pUTmini-Tn5-ppk经三亲接合作用进入Pseudomonas putida KT2440，同时mini-Tn5通过转座作用将ppk整合到宿主菌株的染色体DNA中，获得基因工程菌Pseudomonas putida KT2440-PPK，用于表达ppk.RT-PCR结果显示，ppk基因在KT2440-PPK中得到较高量的表达，而在原始菌株KT2440中表达微弱。人工模拟污水实验结果表明，接种1h时KT2440-PPK中聚磷含量达到最大，为3.05mg/g，约是对照菌株KT2440的15倍。测定模拟污水中磷酸盐的含量表明，KT2440-PPK可以去除该模拟污水中90%以上的磷酸盐。