重组质粒HF443-EGFP的构建及其在赤潮毒素检测中的应用初探
- 出版年：2003
- 作者：刘洁生；杨维东；车军；甄熹；江天久；吴春利
- 单位1：暨南大学生命科学技术学院
- 出生年：1967
- 学历：博士
- 职称：副教授
- 作者关键词：c-fos启动子；绿色荧光蛋白；BIU-87细胞；赤潮毒素
- 起始页：566
- 总页数：6
- 经费资助：国家重点基础研究发展规划(973)资助项目，2001CB409710 号，200 1CB409709 号；教育部科学技术研究重点项目资助，00214号；广州市科技攻关课题资助项目，2001.z0056-01 号；广州市科技项目，002J1-C0011号。
- 刊名：海洋与湖沼
- 是否内版：否
- 刊频：双月刊
- 创刊时间：1957
- 主办单位：中国海洋湖沼学会
- 主编：相建海
- 地址：青岛市南海路7号
- 邮编：266071
- 电子信箱：bsun@rns．qdio．ac．
- 卷：34
- 期：5
- 期刊索取号：P\226.06\449
摘要
采用基因工程的方法，进行重组质粒HF443-EGFP的构建和在哺乳动物细胞中的表达，并进行了其用于赤潮毒素检测的可能性研究。结果表明，用PCR技术扩增EGFP基因，用XbaⅠ、HundⅢ双酶切并纯化，与同样双酶切并纯化的HF443质粒连接，可构建重组质粒HF433-EGFP；利用Lipofect AMINE2000转染体外培养哺乳动物BIU-87细胞。在培养体系中加入不同浓度的GTX，而后加入Na+通道激活剂乌头碱以诱导绿色荧光蛋白表达，荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白表达的变化情况。细胞发出的荧光随毒素浓度的增加而减弱，存在一定的剂量效应关系，提示毒素GTX可显著影响绿色荧光蛋白的表达，重组质粒H443-EGFP用于赤潮毒素检测有一定的可行性。