中国卤虫早期胚胎发育相关基因的研究—mRNA差异显示技术的三种不同染色方法比较
- 出版年：2005
- 作者：林盛国；侯林；陈志娟；徐明玉；王璐
- 单位1：辽宁师范大学
- 出生年：1978
- 学历：硕士研究生
- 作者关键词：国孤雌生殖卤虫；mRNA差异显示；SYBR GreenⅠ；硝酸银；溴化乙锭
- 起始页：67
- 总页数：6
- 经费资助：国家自然科学基金项目（No. 30271035)资助
- 刊名：海洋湖沼通报
- 是否内版：否
- 主办单位：山东海洋湖沼学会
- 主编：刘秦玉
- 期：1
- 期刊索取号：P\226.06\449-35
摘要
利用mRNA差异显示技术研究中国孤雌生殖卤虫胚胎发育的相关基因，并对中国孤雌生殖卤虫差异显示中SBR Green I、硝酸银和溴化乙锭三种染色方法进行了比较。以三种单碱基描定引物对发育0h,4h,8h,12h，16h和10天的中国孤雌生殖卤虫的RNA进行逆转录和26种随机引物进行PCR反应，经非变性的6％聚丙稀酰胺凝胶电泳后，分别用SYBRGreen Ⅰ 、硝酸银和溴化乙锭染色．最后进行差异条带的回收和再扩增。结果表明：(1)6种样本的DD-PCR产物显示长200-3.0k不等的扩增片段，条带清晰，并呈现出有无和强弱的变化(2）SYBRGreen I和硝酸银染色的灵敏度比溴化乙锭染色的灵敏度高（3)经SYBR Green I和溴化乙锭染色的凝胶的回收和再扩增效率比硝酸银染色的高（4）水煮法和NAP-25过柱法对凝胶片段的回收效果几乎相当。利用mRNA差异显示技太研究中国孤雌生殖卤虫胚胎发育相关基因时，得到了较好的扩增片段：三种染色方法中SYBR Green Ⅰ染色灵敏度较高，并且SYBR Green Ⅰ染色有利于凝胶片段的回收和再扩增。