Mise au point et validation d¡¯une m¨¦thode de dosage de la 25-hydroxy-vitamine D3 par chromatographie liquide haute performance
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文摘

R¨¦sum¨¦

La vitamine D est une mol¨¦cule liposoluble qui joue un r?le essentiel dans la r¨¦gulation du m¨¦tabolisme osseux. C¡¯est habituellement la 25-hydroxy-vitamine D3 plasmatique qui est dos¨¦e pour d¨¦terminer le statut vitaminique car en plus de sa stabilit¨¦ et de sa longue demi-vie, elle repr¨¦sente la forme circulante majoritaire. L¡¯objectif de ce travail est de mettre au point et de valider une m¨¦thode de dosage de la 25-hydroxy-vitamine D3 par CLHP qui soit simple, sensible et rapide pouvant ¨ºtre appliqu¨¦e en routine.

La premi¨¨re ¨¦tape n¨¦cessaire pour le dosage plasmatique est une d¨¦prot¨¦inisation. L¡¯¨¦lution de la mol¨¦cule est r¨¦alis¨¦e sur des colonnes d¡¯extraction. L¡¯¨¦luant est ¨¦vapor¨¦ puis reconstitu¨¦ dans de la phase mobile lors de l¡¯injection dans le circuit de la CLHP. Nous avons s¨¦lectionn¨¦ les meilleures conditions chromatographiques pour le dosage de la 25-hydroxy-vitamine D3 plasmatique et proc¨¦d¨¦ ¨¤ la validation de la m¨¦thode. Le CV de reproductibilit¨¦ ¨¦tait de 1,08 % ; celui de r¨¦p¨¦tabilit¨¦ ¨¦tait de 1,84 % . La lin¨¦arit¨¦, rapport¨¦e par le coefficient de corr¨¦lation de la courbe de r¨¦gression, ¨¦tait de 0,996 pour des concentrations allant de 10 ¨¤ 150 ng/ml. La limite de quantification ¨¦tait de 0,34 ng/ml et la limite de d¨¦tection de 0,11 ng/ml.

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