Incorporación del test de dispersión de la cromatina espermática al laboratorio andrológico

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• 作者：Juliana Cicaré ; ^a ; Aylen Avila^a ; Adriana Caille^a ; Marí ; a José ; Munuce^a ; ^b ; ^{slorenzo939@hotmail.com" class="auth_mail" title="E-mail the corresponding author}
• 关键词：Espermatozoide ; Humano ; Per&oacute ; xido de hidr&oacute ; geno ; Test del halo ; Fragmentaci&oacute ; n ; ADN
• 刊名：Revista Internacional de Andrología
• 出版年：2016
• 出版时间：October-December 2016
• 年：2016
• 卷：14
• 期：4
• 页码：137-143
• 全文大小：806 K

文摘

Desarrollar y poner a punto la técnica de dispersión de la cromatina espermática (SCD) para evaluar el grado de fragmentación del ADN en semen.

Materiales y métodos

Se incluyeron 57 pacientes normozoospérmicos (OMS 2010), los cuales fueron invitados a participar del estudio luego de firmar los consentimientos correspondientes. Se evaluó el grado de fragmentación mediante técnica de SCD, de manera objetiva y subjetiva, en muestras sometidas a estrés oxidativo con H₂O₂ y seleccionadas mediante swim up o gradiente de densidad, así como congeladas y descongeladas.

Resultados

La evaluaci&oacute;n objetiva demuestra que la menor fragmentaci&oacute;n se asociaría a un mayor tamaño del halo por definici&oacute;n, aunque se observa un aumento (p < 0,05) en el tamaño del núcleo. El tratamiento oxidante (> 100 μM de H₂O₂) aumenta el índice de fragmentaci&oacute;n de forma dosis-dependiente sin afectar la viabilidad ni la motilidad espermática. Las técnicas de selecci&oacute;n de espermatozoides m&oacute;tiles evaluadas (swim up o gradiente de densidad) disminuyen el índice de fragmentaci&oacute;n, aunque se observa cierta susceptibilidad individual. La congelaci&oacute;n directa a –20 °C permite diferir la realizaci&oacute;n del test, independientemente del tipo de muestra.

Conclusi&oacute;n

La evaluaci&oacute;n subjetiva de la técnica SCD es suficiente para su uso en el laboratorio clínico, siempre que se evalúe la relaci&oacute;n halo/núcleo para la clasificaci&oacute;n. La utilizaci&oacute;n del tratamiento oxidante permite introducir un control positivo de daño para la puesta a punto de la técnica. La selecci&oacute;n espermática mediante técnicas de uso habitual en reproducci&oacute;n asistida disminuye el índice de fragmentaci&oacute;n, observándose cierta susceptibilidad individual. La técnica SCD puede ser diferida mediante congelamiento de la muestra, lo que permite un ahorro de insumos, reactivos y tiempo de procesamiento.